灵芝子实体中两个新的天然三萜类化学成分的分离_纯化和鉴定
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菌物学报25（4）：599~602, 2006Mycosystema灵芝子实体中两个新的天然三萜类化学成分的分离、纯化和鉴定郝瑞霞1，2张劲松2*唐庆九2胡立宏3郑宗平3潘迎捷4*（1南京农业大学生命科学学院，南京210095；2上海市农业科学院食用菌研究所，上海201106；3中国科学院上海药物研究所，上海201203；4上海水产大学食品科学学院，上海200090）摘要：本文采用硅胶和MCI柱层析的方法，从灵芝Ganoderma lucidum子实体中分离纯化三萜类化合物。
从灵芝子实体的氯仿萃取层中，分离纯化到灵芝属中的2个新天然产物，运用现代NMR技术分析确定了它们的结构，分别为methyl 7β- hydroxy-3, 11, 15, 23-tetraoxo-5α-lanost-8-en-26-oate(methyl ganoderate D)(Ⅰ)和methyl 12β-acetoxy-3,7,11,15-tetraoxo-5α-lanost-8-en-24-oate(methyl lucidenate D) (Ⅱ)。
关键词：生物活性成分，核磁共振，化学结构中图分类号：Q939.96 文献标识码：A 文章编号：1672-6472（2006）04-0599-0602 Isolation, purification and identification of two new triterpenoid constituents from the fruiting bodies of Ganoderma lucidumHAO Rui-Xia1, 2 ZHANG Jin-Song2 TANG Qing-Jiu2HU Li-Hong3ZHENG Zong-Ping3PAN Ying-Jie4(1 College of Life Sciences, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 2 Institute of Edible Fungi, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201106, China; 3 Shanghai Institute of Meteria Medica, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 201203, China; 4 College of Food Science, Shanghai Fisheries University, Shanghai 200090, China) Abstract: The triterpenoid constituents from the fruiting bodies of Ganoderma lucidum were isolated and purified by means of column chromatography. Two new natural products from Ganoderma fruiting bodies were obtained from the chloroform extract. Their structures were identified as methyl 7β-hydroxy-3, 11, 15, 23- tetraoxo-5α-lanost-8-en-26-oate（methyl ganoderate D）(I) and methyl 12β-acetoxy- 3, 7, 11, 15- tetraoxo- 5α- lanost- 8-en-24-oate（methyl lucidenate D ）(II)on the basis of their NMR spectral data.Key words: Biologically active constituents, nuclear magnetic resonance, chemical structure 灵芝Ganoderma lucidum (Curtis : Fr.) P. Karst. 是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，其子实体为名贵药材，在我国具有悠久的药用历史。
据文献报道，灵芝子实体中含有三萜类、多糖类、多肽类、核苷类、生物碱类等多种化学成分；其中三萜类化合物具有抑制肿瘤细胞增殖(Min et al.，2000)、抗病毒、抗氧化、保肝、抑制组胺释放等药理活性（林志彬，2001），是灵芝中的主要活性物质之一。
虽然已有许多文献对灵芝中的三萜类化合物进行了分离纯化研究，但对三萜类化合物项目基金：上海市农委重点攻关项目(No.农科攻字2002-1-4-3)∗通讯作者：zhangjs888@; yjpan@收原稿日期：2006-01-07，收修改稿日期：2006-03-21600 菌物学报 25卷的药理活性的系统研究至今未见报道。
为了系统的比较灵芝子实体中各种三萜类化合物的药理活性，我们对本研究室栽培出的灵芝菌株子实体中的三萜类化合物进行了分离纯化工作，为系统研究灵芝中各种三萜组分的药理活性提供基础，本文介绍了其中2个三萜化合物的分离纯化和化学结构鉴定工作。
1材料与设备1.1材料灵芝子实体由上海农科院食用菌研究所栽培所得，子实体经广东微生物研究所李泰辉教授鉴定为Ganoderma lucidum。
标本存放于上海农科院食用菌研究所药用真菌研究室。
1.2试剂TLC板（HSGF254）为烟台汇友硅胶开发有限公司生产；反相TLC板（RP-18F254S）为德国MERCK公司生产；柱层析硅胶（200-300目）及硅胶H为青岛海洋化工厂生产；MCI （75～150 µm）为Mitsubishi Chemical Corporation生产。
乙醇、甲醇和石油醚为上海振兴化工一厂产品；三氯甲烷和丙酮为国药集团化学试剂有限公司产品；以上化学试剂均为分析纯试剂。
1.3仪器熔点用X-4数字显示显微熔点测定仪测定；核磁共振谱用Varian Inova-500型核磁共振仪（内标为TMS）测定，ZDJ-多功能紫外透射仪（上海顾村电光仪器厂）。
2提取分离方法灵芝子实体粗粉2 kg，用95%乙醇浸提3次，提取液浓缩得到的浸膏(104.5 g)溶于适量水中；然后用氯仿萃取3次，合并氯仿层，减压浓缩到原体积的三分之一，用饱和NaHCO3溶液碱化，取氯仿层部分浓缩，得到棕色浸膏(54.1 g)。
将所得浸膏用200-300目的硅胶柱层析分离，以石油醚-丙酮进行梯度洗脱，每500 mL收集为一组份，经薄层层析检测，分为1-9个组分；石油醚-丙酮（10︰1）洗脱得到的组份8（4.8 g），再用MCI柱层析分离，以甲醇-水（50%-100%）进行梯度洗脱，70%甲醇洗脱得到的组份（0.28 g）用硅胶柱层析（硅胶H）进行分离，以石油醚-丙酮（8︰1 ～0︰1）进行梯度洗脱，6︰1洗脱部分得到化合物Ⅰ（5 mg），5:1洗脱部分得到化合物Ⅱ（10 mg）。
3结果与分析3.1化合物I白色针状结晶（甲醇-水）；熔点为171-172 ℃；1H-NMR（500 MHz, CDCl3）δ：4.85 (1H, dd, J=9.4, 7.9 Hz, H-7)，1.34 (3H, s, Me-32)，1.26 (3H, s, Me-19)，1.19 (3H, d, J=7.2 Hz, Me-27)，1.12 (3H, s, Me-30)，1.11 (3H, s, Me-31)，1.03 (3H, s, Me-18)，1.00 (3H, d, J=6.0 Hz, H-21)；13C-NMR 数据见表1，上述1H-NMR 和13C-NMR 数据与 methyl 7β-hydroxy-3, 11, 15, 23-tetraoxo-5α-lanost-8-en-26-oate (methyl ganoderate D ）(Kohda et al., 1985)一致。
但是，Kohda等人(1985）是从灵芝子实体中经正己烷提取，再经乙酸乙酯萃取后从中分离到ganoderate D，然后将ganoderate D进行甲基化反应，得到methyl ganoderate D，但本文从灵芝子实体中直接分离到了该化合物，这是首次从灵芝中直接获得这一化合物，使灵芝中三萜类化合物的数量又增加了一个。
4期郝瑞霞等：灵芝子实体中两个新的天然三萜类化学成分的分离、纯化和鉴定 601表1化合物Ⅰ和化合物Ⅱ的13C-NMR化学位移值（125 MHz, in CDCl3）Table 1 13C-NMR chemical shifts of compoundsⅠ-Ⅱ（125 MHz, in CDCl3）C的位置Methyl ganderate D 化合物ⅠMethyl lucidenate D 化合物Ⅱ123456789101112131415161718192021222324252627303132 COOCH3 OCH3 COCH335.734.3217.546.849.027.866.3157.8141.338.3197.650.245.059.4216.441.045.817.718.232.019.749.1207.646.834.7176.117.127.020.824.751.9--35.734.3217.646.849.027.766.3157.8141.238.3197.650.245.059.4216.541.045.717.718.232.019.749.1207.746.834.7176.117.127.020.824.751.9--37.434.0214.846.951.033.8198.5149.7146.239.3194.179.147.658.6205.837.445.212.018.633.020.130.131.6173.6---27.620.820.420.851.4170.037.434.1215.046.951.033.7198.6149.8146.239.3194.279.247.658.6205.937.445.212.018.733.020.130.131.7173.7---27.620.820.420.851.6170.03.2化合物II无定型粉末；1H-NMR（500 MHz, CDCl3）δ: 5.68 (1H, s, H-12)，3.68 (3H, s, COOCH3)，602 菌物学报 25卷2.23 (3H, s, OAc)，1.81 (3H, s, Me-32)，1.33 (3H, s, Me-19)，1.14 (3H, s, Me-31)，1.12(3H, s, Me-30)，1.00(3H, d, J=6.7 Hz, H-21)，0.87(3H, s, Me-18)；13C-NMR数据见表1，上述1H-NMR 和13C-NMR 数据与 methyl 12β-acetoxy-3, 7, 11, 15-tetraoxo-5α- lanost-8-en-24- oate (methyl lucidenate D) (Kikuchi et al., 1985)一致。
