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免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。
如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。
就拿温度来说，可以有4 度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。
2、免疫组化最大的优势是定位和定性。
相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。
尤其对于有些因子的转位研究十分有用。
3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。
免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。
4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。
阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。
前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。
5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。
如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。
当然也不能做假阳性或假阴性结果。
6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。
我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。
免疫组化基础知识免疫组化是指利用特异性抗体与被检测物相互作用，通过染色或荧光等方法对细胞或组织中的分子结构、分布、表达水平等进行检测的一种技术手段。
免疫组化技术广泛应用于生命科学领域，可用于研究细胞和组织的形态学、生理学、病理学等方面，是现代分子生物学和医学研究的重要工具之一。
免疫组化技术的基本原理是利用抗体与被检测物之间的特异性结合来检测目标分子。
抗体是由机体免疫系统产生的一种特异性蛋白质，可以识别并结合到其特异性抗原上，从而发挥免疫防御作用。
在免疫组化中，我们利用抗体的这种特异性结合作用，来检测细胞或组织中的目标分子。
具体来说，我们将一种特异性抗体标记上染色剂或荧光素等物质，然后将其加入到待检测的细胞或组织中，让其与目标分子发生结合反应，最后通过染色或荧光等方法来检测抗体-抗原复合物的存在情况。
免疫组化技术的优点主要有以下几个方面：1. 特异性强：由于抗体对其特异性抗原具有高度的特异性结合能力，因此免疫组化技术具有非常高的特异性。
2. 灵敏度高：免疫组化技术可以检测非常微小的分子结构或表达水平，因此具有非常高的灵敏度。
3. 定量性好：通过对染色或荧光信号的定量分析，可以对目标分子的表达水平进行定量化分析。
4. 可视化：通过染色或荧光等方法，可以将目标分子在细胞或组织中的分布情况可视化出来。
免疫组化技术在生命科学领域中有着广泛的应用。
在细胞和分子生物学研究中，免疫组化技术可以用来检测蛋白质、核酸、多肽等生物分子的表达和定位情况；在病理学研究中，免疫组化技术可以用来检测肿瘤标志物、免疫球蛋白等分子的表达情况，从而辅助临床诊断；在药物研发领域中，免疫组化技术可以用来筛选药物靶点和评估药效等。
总之，免疫组化技术是一种非常重要的生命科学技术手段，在现代分子生物学和医学研究中具有广泛的应用前景。
免疫检测技术在疾病诊断中的应用疾病的早期诊断对于治疗和预防疾病的关键意义。
随着科技的进步，免疫检测技术成为了现代医学中重要的工具之一。
本文将探讨免疫检测技术在疾病诊断中的应用，包括免疫组化、免疫层析和免疫荧光等关键技术。
一、免疫组化免疫组化是一种通过特异性抗体的结合来检测和定位特定分子的技术。
它在病理学中具有广泛的应用。
通过对组织样本的染色，免疫组化可以帮助医生确定患者是否患有某种疾病，比如癌症。
该技术基于对人体免疫系统的原理，利用抗体与病理标记物之间的特异性结合来实现疾病标记物的检测和定位。
二、免疫层析免疫层析是一种常见的疾病诊断技术。
它通过将被检测物质与一种已知的抗体结合并沉淀，从而实现对特定分子的检测。
与传统的诊断技术相比，免疫层析具有快速、灵敏和准确的优势。
该技术被广泛应用于临床诊断和药物检测中。
三、免疫荧光免疫荧光是一种利用抗体与标记物之间的特异性结合来检测和定位疾病标记物的技术。
通过将荧光标记的抗体与被检测物质结合，病理标记物可以通过荧光显微镜或流式细胞术等方法进行可视化。
免疫荧光技术在临床诊断中起着关键作用，特别是在病毒感染和自身免疫性疾病的诊断中。
四、免疫基因检测免疫基因检测是一种基于免疫系统基因的检测技术。
人体免疫系统中的基因变异与某些疾病的患病风险密切相关。
通过对免疫相关基因的检测，医生可以预测患者患某种疾病的可能性，从而制定相应的预防和治疗策略。
免疫基因检测技术的发展为个性化医学的实现提供了可能。
综上所述，免疫检测技术在疾病诊断中具有广泛的应用前景。
不仅可以帮助医生确定患者是否患有某种疾病，还可以预测患病风险并制定相应的预防和治疗策略。
随着技术的不断进步和创新，免疫检测技术将为疾病的早期诊断和治疗带来更大的希望和机遇。
免疫组化项目及意义
【最新版】
目录
1.免疫组化项目的定义
2.免疫组化的意义
3.免疫组化项目的应用
4.免疫组化项目的发展前景
正文
1.免疫组化项目的定义
免疫组化是一种实验室技术，它通过检测组织或细胞中特定蛋白质的表达，帮助研究人员了解这些蛋白质在生物体内的功能和作用。
免疫组化项目是通过这一技术来研究蛋白质在疾病发生、发展和治疗中的角色。
2.免疫组化的意义
免疫组化在生物医学研究中有着重要的意义。
首先，它可以帮助研究人员了解蛋白质的功能和作用，为疾病的诊断和治疗提供新的思路和靶点。
其次，免疫组化可以用于疾病标志物的发现和验证，为疾病的早期诊断和预后评估提供依据。
最后，免疫组化还可以用于药物筛选和药效评估，为新药研发提供支持。
3.免疫组化项目的应用
免疫组化项目在临床医学、基础研究和药物研发等领域有着广泛的应用。
在临床医学中，免疫组化主要用于疾病诊断、预后评估和疗效监测。
在基础研究中，免疫组化可以用于研究蛋白质的功能和作用，揭示疾病的发病机制。
在药物研发中，免疫组化可以用于药物筛选和药效评估，提高药物研发的成功率。
4.免疫组化项目的发展前景
随着生物医学研究的深入，免疫组化技术也在不断发展和完善。
免疫组织化免疫组织化学免疫组织化学（Immunohistochemistry）又称免疫细胞化学。
它是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术。
1．发展简史——1941年Coons首先用荧光素标记抗体一检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。
60年代Nakane建立酶标抗体技术铁蛋白标记Ab技术。
——70年代Stemberger改良上述技术，建立辣根过氧化物酶——抗体过氧化物酶（PAP）技术，使免疫细胞化学得到广泛应用。
——80年代Hsu等建立了抗生物素一生素（ABC）法之后，免疫金一银染色法、半抗原标记法、免疫电镜技术相继问世。
——90年代分子杂交技术、原位杂交技术、免疫细胞化学分类方法迅速发展。
——2000年各种免疫组化技术更加成熟，使免疫组化技术成为当今生物医学中形态、功能代谢综合研究的一项有力工具。
其应用范围深达医学各个学科，是目前生命科学工作者应该掌握的基本技术之一。
2．免疫组织化学的技术分类（1）根据染色方式分成：①贴片染色；②漂浮染色。
（2）根据Ag—Ab结合方式分成：①直接法；②间接法；③多层法。
（3）按标记物的性质分成：①免疫荧光技术（免疫荧光法）；②免疫酶技术（酶标抗体法、桥法、PAD法、ABC法）；③免疫金属技术（免疫铁蛋白法、免疫金染色法、蛋白A金法）。
3．标记物（1）必要性：组织细胞内Ag—Ab结合反应一般是不可见的，若在镜下检测，则必须具有可视性标记物。
（2）常用标记物①荧光素：最常用的是异硫一氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate，FITC）荧光显微镜下呈绿色荧光四乙基罗达明（rho—damineRB200）——荧光显微镜下发橙红色荧光；②酶：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。
③生物素：（Biotin）④铁蛋白金等：主要应用于免疫电镜。
其他：如同位素（因涉及污染和防护难一般不用）4．应用凡是组织细胞内具有抗原性的物质，如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等等均可用免疫组织化学方法显示，因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。
免疫组化和原位杂交检测结果概述说明1. 引言1.1 概述本文旨在对免疫组化和原位杂交检测结果进行综合概述和解释。
免疫组化和原位杂交是两种常用的生物学实验技术，用于检测细胞或组织中特定蛋白质或核酸的表达情况。
通过对这两种技术的原理、方法、应用领域以及实验步骤和注意事项的介绍，可以使读者更好地理解并合理应用这些检测结果。
1.2 文章结构本文分为五个主要部分：引言、免疫组化检测结果、原位杂交检测结果、免疫组化与原位杂交比较分析以及结论。
在引言部分，我们将简要介绍本文的目的和文章结构，提供一个整体的框架来帮助读者理解后续内容。
1.3 目的本文旨在全面说明和讨论免疫组化和原位杂交检测结果，并对它们之间的异同进行比较分析。
通过了解免疫组化和原位杂交技术的基本原理、应用领域以及实验步骤等方面信息，读者可以更好地理解和解释这些检测结果，从而能够更科学地进行相关研究工作。
此外，我们将通过案例分析和发展趋势的讨论，对免疫组化和原位杂交技术在未来的应用进行展望，并提供一些建议。
2. 免疫组化检测结果：2.1 原理和方法：免疫组化是一种常用的实验技术，通过特异性抗体对目标分子进行检测。
该技术基于免疫学原理，利用抗体与相应的抗原结合来定位和可视化感兴趣的蛋白质或分子。
在免疫组化实验中，首先需要选择合适的抗体，该抗体可以是单克隆或多克隆抗体，并且需要与所需检测的目标分子有高度的特异性和亲和力。
然后，在样本处理过程中，对组织或细胞进行固定、包埋等步骤以保持其形态结构，并消除内源性酶活性。
接下来，将样本切片后进行染色处理，通常采用荧光标记物或酶标记物进行可视化显示。
最后，使用显微镜观察并记录结果。
2.2 应用领域：免疫组化技术广泛应用于生物医学研究领域。
它在肿瘤学、神经科学、器官发育等领域起着重要作用。
例如，在肿瘤学中，通过免疫组化可以检测肿瘤组织中的细胞分子标记，从而对肿瘤类型、分级和预后进行鉴定。
在神经科学领域，免疫组化可以帮助研究人员探索神经元的分布、表达和功能。
免疫学检验的这些基础知识你都了解吗免疫学检验是指应用免疫学原理进行检测，以发现人体内某些物质（例如抗体、抗原、病原体等）的检验方法。
它已经成为临床医学中不可缺少的检测手段之一，广泛应用于医疗、科研、食品卫生等领域。
本文将从免疫学检验的基础知识、分类、原理和应用方面进行介绍。
一、免疫学检验的基础知识1.抗原和抗体抗原是指能够诱导机体产生免疫应答的物质，包括细菌、病毒、细胞、蛋白质、多糖等。
抗体是由机体的B淋巴细胞分泌的一种特异性免疫球蛋白，能够与特定的抗原结合，从而参与机体的免疫反应。
2.特异性和敏感性免疫学检验是一种特异性和敏感性较高的检验方法。
特异性是指检验结果仅针对特定的抗原或抗体，不会与其他物质产生反应。
敏感性是指检验方法能够检测到极小浓度的抗原或抗体。
3.免疫反应的基本原理免疫学检验基于机体的免疫反应原理。
当机体感染病原体或接种疫苗后，免疫系统会产生相应的抗体。
免疫学检验通过检测血清中特定抗体或抗原的存在与否，来判断患者是否感染了某种病原体或是否存在某种疾病。
二、免疫学检验的分类免疫学检验根据检测原理和方法的不同，可以分为多种类型，包括：1.直接检测法直接检测法是指通过检测病原体本身或其组成成分来判断是否感染某种病原体。
例如，检测病毒核酸或细菌的荚膜多糖等。
2.间接检测法间接检测法是指通过检测体内特定抗体的存在与否，来判断患者是否感染某种病原体。
例如，乙肝表面抗原（HBsAg）的检测就是一种间接检测法。
3.荧光素检测法荧光素检测法是一种常用的免疫学检测方法，可以通过荧光素染色或荧光素标记来检测抗原或抗体的存在。
荧光素检测法有许多不同的形式，包括免疫荧光检测、酶联免疫吸附测定法（ELISA）等。
免疫荧光检测法是利用荧光素标记的抗体与待检测标本中的抗原结合，在荧光显微镜下观察荧光信号的强度和分布情况，来判断是否存在特定抗原或抗体。
该方法具有高度的灵敏度和特异性，且结果可视化，适用于许多病原体的检测，如流感病毒、HIV、病毒性肝炎等。
免疫组织化学检测在乳腺病理诊断中的价值【摘要】免疫组织化学检测在乳腺病理诊断中扮演着重要的角色。
通过对乳腺病理标本中特定蛋白的定量分析，可以帮助医生确定病变的类型和病情的严重程度。
在乳腺癌诊断中，免疫组织化学检测可以帮助确定肿瘤的组织来源和分子特征，有助于制定针对性的治疗方案。
免疫组织化学检测还能够帮助鉴别乳腺的良恶性病变，提高诊断准确性。
在乳腺病理分子机制研究中，免疫组织化学检测也发挥着重要作用。
虽然与其他诊断方法相比，免疫组织化学检测具有一定局限性，但它仍然是乳腺病理诊断中不可或缺的重要手段。
未来，需要进一步研究和应用免疫组织化学检测技术，以提高乳腺病理诊断的准确性和精准度。
【关键词】关键词：乳腺病理诊断、免疫组织化学检测、乳腺癌、良恶性病变、分子机制、比较、前景、研究、应用、结论。
1. 引言1.1 乳腺病理诊断的重要性乳腺疾病是指乳房组织发生的各种异常情况，涵盖了一系列良性和恶性疾病。
乳腺病理诊断是对乳腺组织病变进行准确定性诊断的重要手段，对于及早发现和治疗乳腺疾病、提高治疗效果具有重要意义。
乳腺病理诊断的重要性主要体现在以下几个方面。
乳腺病理诊断是诊断乳腺癌的关键。
乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤之一，早期诊断是提高患者生存率的关键。
通过对乳腺组织进行病理诊断，可以明确肿瘤的类型、分级、浸润深度等信息，为制定个体化治疗方案提供依据。
乳腺病理诊断可以帮助鉴别良性和恶性乳腺病变。
乳腺组织病变种类繁多，有些病变在形态上难以鉴别，需要借助病理学的手段来做出准确诊断，为患者的治疗和预后评估提供依据。
乳腺病理诊断在评估预后和指导治疗方案选择方面也发挥着重要作用。
通过对肿瘤组织进行免疫组织化学检测，可以评估肿瘤的分子特征，预测患者的预后，指导个体化治疗方案的选择，提高治疗效果。
1.2 免疫组织化学检测的介绍免疫组织化学检测是一种基于抗原与抗体反应原理的检测方法，通过检测组织或细胞中特定抗原的存在与定位，来揭示其生物学功能和病理生理过程。
免疫组织学检查的目的和意义
免疫组织化学检查，简称免疫组化，是通过抗原抗体的反应，对细胞内的一些特异表达蛋白做定性、定量、定位的分析。
其目的和意义如下：
1 . 诊断肿瘤性质：常用于判断是良性还是恶性肿瘤。
2 . 判断肿瘤生长速度：例如，通过判断肿瘤的大小，帮助发现微小转移灶，确定手术范围。
3 . 判断肿瘤恶性程度：确定转移性恶性肿瘤的原发部位，对某类肿瘤进行进一步的病理分型。
4 . 对临床靶向治疗、免疫治疗及预后判断有着重要作用。
然而，免疫组化检查的结果与样本质量、实验室技术相关，故检查结果应与其他因素综合判断。
我觉得我们的技术因为扩增覆盖面大（敏感性强）而且扩增是半定量的，不会因为扩增引起免疫组库测序偏向，而且还能避免B细胞的hypermutation引起的扩增失败，所以在技术上我们还是有很多优势的Stanford 诺贝尔得奖者Andrew Fire 他们组的论文在Translational Medicine 上面发表；加拿大一组科学家在Robert Holt 领导下也发表了免疫组库测序的文章；更早还有Quake组对Zebrafish 抗体做高通量测序的文章研究疫苗，我觉得关键问题就是搞懂免疫记忆：免疫记忆是如何形成的？用什么方式记录？记录在那里？如何回顾这个记忆？我们不妨这样随想一下：假设体内的免疫系统是由我来掌管的部队，遇到一个可能反复入侵的敌人，我该如何制订防范计划？免疫记忆，应该是把反抗入侵的成功经验记录下来。
这样，当这股敌人再次入侵时，我就可以用预先准备好的方案去对付他们了。
那么，都有什么信息是需要记录下来的？重要的信息应该有敌人的入侵的部位（呼吸道），入侵的敌人量（病毒或者细菌量），敌人的主攻方法，他们的兵器；上次“反扫荡”我们所用的兵力（动员免疫资源的程度），兵种（T细胞，B细胞等等），火药配备（IgG? IgA? IgM?)，友军（比如先天免疫系统的参与等），抗击时间和出兵的时机，运兵路线，粮草等。
那么，人体（动物）的免疫系统又是如何记录这些信息的？是否也要考虑到这么多的方面？这么复杂的“作战计划”是如何储存在免疫记忆中的？又是如何被完美地回招出来的？记忆又是如何保存而不被忘记的？记忆的空间是否有限？记忆的时间是否有限？教科书上讲的Response to antigen recall 部分很笼统，这里面还有很多细节是我们所不知道的。
那么，从大的方面看，教科书上的假说都正确吗？我们看到的数据有那些是和教科书相符的，那些又是不符的？不符的如何解释？是修改原先的假说还是另外提出假说？当我们手头掌握了只有少数人才有的工具（免疫组库高通量测序技术）的时候，就好比站在一望无际等待收割的麦田边，启动了大型全自动收割机，等待收获的喜悦的时刻。
因为我们看到的数据量之大，之全，之广是前人梦寐以求的。
这是我们的幸运，也是我们的责任。
许多疫苗都属于所谓的减毒活疫苗：如麻疹减毒活疫苗、甲型肝炎减毒活疫苗、乙型脑炎减毒活疫苗、风疹减毒活疫苗、口服脊髓灰质炎减毒活疫苗、口服狂犬病减毒活疫苗等。
这类疫苗的好处就是接种者能获得长期或者终身保护作用，不过安全性是个问题。
有人猜测，减毒活疫苗效果好的原因可能是它更贴近野生型病毒的感染进入途径，所以所刺激出来的免疫反应也更完整，全面，完美。
而用合成蛋白作为抗原的疫苗不能有效地挑起机体完整的免疫反应，所以不是产生出来的士兵兵种不对（该产生分泌型的IgA 结果产生出了IgG), 就是把训练出的士兵送到了错误的战场（呼吸道疾病的抗体送到消化道去了）。
或者是军区之间步调不协调（T细胞，B细胞，和先天免疫的一些功能细胞之间的协调不够好）。
最近和一个CDC的资深科学家交流，椐她说HPV患者中很多血清中有很高浓度的抗HPV抗体，但是还患宫颈癌；而有些没有很高的抗体浓度，反而不得癌。
所以单纯衡量是否有特异性抗体产生并不说明疫苗就有效。
疫苗是很奇妙的东西，可是如果我们在仿效自然免疫的过程中对自然现象本身了解不够，很可能把事情搞糟。
疫苗研发实际上是个“黑匣子”，到底那个好，为什么好，真样才能更好，我们都不很清楚。
这样下去实际上是很危险的。
玩免疫系统就好比玩火，或者是倒卖军火，搞不好会引火烧身的。
改进现状需要我们有更好的方法观察体内免疫的变化过程。
这是免疫组库技术的一个很重要的应用方向：通过高通量测序，比较使用疫苗前后的免疫组库变化，能更准确地找到特异性的个体变化，为评价疫苗的效率提供新的参照指标。
研发疫苗就是最大限度地复制机体本身的免疫反应，不但要“山寨”一把，还要做出“高仿”的产品来。
可是我们现在连原版的东西都没有看清楚，如何做出像样的“高仿”产品来呢？我现在做的免疫组库方面的研究和肿瘤关系密切。
肿瘤其实就是免疫系统的失职，让该死的死不了。
关键是如何找到失职的机制和责任者，找到了，就有办法治疗了。
和许多免疫相关的疾病一样，个体性及强，所以期待的治疗也应该是个体化的。
免疫系统是人的内环境和自然的外环境相互作用的界面，它每天要处理的信号不下于神经系统。
它时刻都在问“是敌人，还是朋友？”，“是昨天的朋友？还是昨天的敌人？”，“是现在的危机，还是今后的隐患？新发现的免疫调控T细胞（regulatory T cells)就是很好的例子。
表达太多容易生癌，太少容易生自身免疫疾病。
免疫系统简直就是矛盾的完美组合。
自身免疫疾病顾名思义就是自己的免疫细胞六亲不认攻击自己。
问题可能被分为两个方面：（1）免疫系统没有问题，是组织细胞发生了变化，使得原本是“自己的”变成了“他人的”；（2）免疫系统的敌我识别能力出错，把本来属于自己的当做他人来攻击。
（又是用中医的阴阳理论了，看来用惯的东西还是顺手）。
如果是第一种情况，免疫细胞在“培训”阶段所接受的“教育”是好的，这个教育使得它们具备识别敌我的能力。
之所以发生自身免疫反应是因为某些组织细胞本身发生了变化，使得免疫细胞看花了眼。
病毒感染就可以挑起这样的反应。
免疫细胞在发生的过程中都经过识别自我的“培训”，一般经过两个严格的挑选过程：先是识别MHC分子（个人身份证），然后识别一些主要的自身抗原（单位工作证明）。
前一个选择叫“正选择”，把那些符合条件（能和MHC分子结合，但结合力又不很强的）的细胞选出来；后一个选择叫“负选择”把那些符合条件（能和自身抗原结合）的剔出去。
这样选择的结果是免疫细胞同时看到两个证明（身份证和工作证）时就认为是自己人，放行；但如果只有一个证明，就要提高警惕了。
在上面提到的第一种自身免疫疾病情形下，病人的组织细胞拿不出两个证明，结果被打了；而另一种情形则是免疫细胞识别证明的能力出了问题，结果当然是敌我不分了。
今天我们请来阿拉巴马伯明翰大学的Harry Schroeder教授做学术讲座。
Harry是免疫组库方面的专家，在这个领域工作了二十多年，主要研究抗体组库，因为IgH 要比T细胞受体简单些，没有MHC的参与。
Harry也是把免疫组库比喻成Homeland Security Department，认为人的免疫组库有一定的容量，在这个总容量下质量也很重要。
因为它是学遗传出身的，所以用许多遗传学的概念。
他的演讲让我想起一个事：人在得了细菌感染以后，需要八天到十天才能产生出有针对性得抗体。
而且这个抗体的生产过程是严格调控的，根据细菌的毒性，入侵细菌的数量，种类，产生不同程度和种类的免疫反应。
这个精密的调控系统十经过成千上万年进化成熟的。
可是，五十年前，人类制造出了抗菌素。
通常，感染三五天的时候病人可能就用了广谱抗菌素了。
用药的结果是细菌在体内的数量急剧下降（如果抗菌素有用的话），这是好的方面，可是，那进化来的周密的调节机制就“失算”了。
等按照自然机制产生出抗体的时候，细菌可能已经从体内被清除了。
这就象发生了边境冲突，军委根据情报派兵从北京赶到边境，可是等兵到了预定战场的时候敌人已经被消灭了。
那这些兵如何“裁减”？所以是否可以有这样的假说：有些自身免疫疾病或过敏等免疫失调病的起因可能是抗菌素？因为抗菌素的使用破坏了进化成熟的人体免疫机制，“裁军”不及时，导致“兵变”？毫无疑问，抗菌素的发现给人类带来无限的好处，但是如果使用不当也会带来许多问题。
除了能导致细菌耐药性的产生以外，抗菌素滥用还可能引起不必要的副作用甚至产生出其它的疾病。
免疫是一个内外防御体系的平衡：对外要抗击感染；对内要监视突变。
对外太强则为炎症；对外太弱则有慢性感染。
对内太强则产生自身免疫；对内太弱则产生癌变。
感染和癌症都是（自己和外来）组织细胞的增生；而自身免疫和炎症则是不必要的细胞损伤。
而且，这个内外防御体系还受“预算”的限制，人体投入在免疫系统的就是那么多资源。
如果那个方面过渡使用了资源的大部，就会产生不平衡，免疫系统的不平衡就会表现为各种临床症状。
那么，如何判断一个人的免疫系统是否处于平衡的正常状态？我们现在的理解是正常的免疫系统表现之一就是有完好的多样性：有足够多种类的B或T细胞。
因为我们的基因组库技术可以用高通量的手段观察免疫细胞的多样性，因此我们可以很全面的观察和描述个体的免疫功能状况。
当然，免疫系统的失衡也就能够看到了。
我们的技术是几个技术的最佳整合：（1）过去二十年免疫学的最高级技术：单克隆抗体和流式；（2）过去二十年分子生物学的高端技术：多重PCR和高通量测序；（3）加上过去二十年信息技术的最新发展；生物信息分析软件和高速运算能力的硬件。
谢谢您考虑我们题为"High throughput sequencing reveals a complex pattern of dynamic interrelationships among human T cell subsets."的论文。
这个研究中，我们结合一个独特的，半定量多重PCR技术和454高通量测序平台来研究T 细胞组库。
我们实验室研发出了这个独特的PCR技术并在最近几年对它进行了不断改进和完善而且用它解答一系列重要的生物学问题。
从一个人体分离出的T细胞中我们得到一百六十七万多有效序列，包括进一百五十万独特CDR3序列——这要比基因库(GenBank）中现有的序列多出进三百七十倍。
深入分析测得的序列使我们对T细胞免疫组库的大小做了更精确的推测。
同时，我们的数据也支持有关T细胞命运的“随机假说”。
对分离出的T细胞亚型进行高通量测序还使我们能给T细胞之间的动态功能联系进行详细描述。
实际上我们已经完成了更多测序工作，包括B细胞抗体组库和几个病人的免疫组库研究。
我们会慢慢把相关论文写出来。
外面听到不少传言，说至少有两个诺贝尔获奖者也在做有关454测序免疫组库方面的工作。
这也是我们加速完成论文的原因之一。
不过我对我们独特的“半定量多重PCR”在这方面应用的优势还是比较有信心的。
因为有这个技术，我们才能直接研究人的免疫组库。
研究人的免疫组库有几大难关：（1）人的免疫细胞来源有限。
外周血里十毫升血含有大约五百万B细胞，两千万个T细胞。
考虑到免疫细胞的多样性，十毫升血里面可能每个独特的B或T细胞可能仅有几个。
因此不扩增就没有办法研究。
（2）一般的扩增办法不能同时多成千上万个靶点进行扩增，而且扩增会偏向与几个克隆而忽略其他。
所以研究免疫组库的扩增方法需要覆盖面非常广，敏感性格外强。
（3）扩增过程不能引入偏向性。
不能有些CDR3得到更多的扩增。
就是说扩增需要半定量。
