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实验五酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
一、目的要求
学习和掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法；了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、实验原理
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
三、器材与试剂
1〉材料
酵母粉。
2〉器材
乳钵、150ml锥形瓶、水浴锅、量筒、吸管、洗耳球、漏斗、滴管、试管、试管架、烧杯、离心机、滤纸、试管夹。
3〉试剂
(1)
0.04mol/L氢氧化钠溶液。
(2)酸性乙醇溶液：将0.3ml浓盐酸加入30ml的乙醇中。
(3)95%乙醇。
(4)乙醚。
(5)
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1.5mol/L硫酸溶液。
(6)浓氨水。
(7)
0.1mol/L硝酸银溶液。
(8)三氧化铁-浓盐酸溶液：
将2ml 10%三氧化铁溶液(用FeCl
3·6H
2O配制)加入到400ml浓盐酸中。
(9)苔黑酚乙醇溶液：
溶解6g苔黑酚于100ml 95%乙醇中。
(10)定磷试剂。
a.17%硫酸溶液：
将17ml浓硫酸(比重
1.84)缓缓加入到83ml水中。
b.
2.5%钼酸铵溶液：将2.5g钼酸铵溶于100ml水中。
c.10%抗坏血酸：
将10g抗坏血酸溶于100ml水中，储于棕色瓶保存。溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄色或棕色则失效。
临用时将上述3种溶液与水按比例混合：17%硫酸溶液︰
2.5%钼酸铵溶液︰10%抗坏血酸︰水=1︰1︰1︰2(体积分数)。
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四、实验步骤
1〉RNA提取
将10g酵母悬浮于90ml
0.04mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150ml锥形瓶中。在沸水浴上加热30min后，冷却。(3000r/min)离心10分钟，将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，(3000r/min)离心5分钟。弃去上清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，每次10ml。乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至漏斗中过滤。沉淀即为粗RNA，可在空气中干燥。作鉴定或测定含量用。
※实验六 酵母RNA的分离及组分鉴定
【实验目的】
了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
【实验原理】
酵母核酸种RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀。由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
鉴定依据：磷酸与定磷试剂反应产生蓝色物质。核糖与苔黑酚作用产生绿色物质。嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤碱银化合物沉淀。
【实验器材】
150 ml锥形瓶、水浴、量筒、漏斗及抽虑瓶 、吸管 7、滴管8、试管及试管架 9、烧杯 、离心机、漏斗
【试剂和材料】
1、 0.04 mol/L氢氧化钠溶液；
2、酸性乙醇溶液：将0.3毫升浓盐酸加入30毫升乙醇中；
3、95%乙醇；
4、乙醚；
5、1.5 mol/L硫酸溶液；
6、浓氨水；
7、0.1 mol/L硝酸银溶液；
8、三氯化铁浓盐酸溶液：将2 ml 10% 三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入到400
ml浓盐酸中；
9、苔黑酚（地衣酚）乙醇溶液：溶解6 g苔黑酚于100 ml 95% 乙醇中（可在冰箱中保存一个月）；
10、定磷试剂：（1）17% 硫酸溶液：将19 ml浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83 ml水中（2）2.5% 钼酸铵溶液：将2.5 g钼酸铵溶于100 ml水中（3）10% 抗坏血酸溶液：10
g抗坏血酸溶于100 ml水中，贮棕色瓶保存（溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失败，需纯化抗坏血酸）。临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。17% 硫酸溶液：2.5%
钼酸铵溶液：10% 抗坏血酸溶液：水=1：1：1：2 (V/V)；
11、酵母粉。
【实验操作】
1、溶解RNA
将5 g酵母悬浮于90 ml 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液于150 ml锥形瓶中，在沸水浴中加热30分钟，制成碱提取液，将其冷却。
实验五 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
一、目的要求
学习和掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法；了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、实验原理
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
三、器材与试剂
1〉材料
酵母粉。
2〉器材
乳钵、150ml锥形瓶、水浴锅、量筒、吸管、洗耳球、漏斗、滴管、试管、试管架、烧杯、离心机、滤纸、试管夹。
3〉试剂
(1)0.04mol/L氢氧化钠溶液。
(2)酸性乙醇溶液：将0.3ml浓盐酸加入30ml的乙醇中。
(3)95%乙醇。
(4)乙醚。
(5)1.5mol/L硫酸溶液。
(6)浓氨水。
(7)0.1mol/L硝酸银溶液。
(8)三氧化铁-浓盐酸溶液：将2ml 10%三氧化铁溶液(用FeCl3·6H2O配制)加入到400ml浓盐酸中。
(9)苔黑酚乙醇溶液：溶解6g苔黑酚于100ml 95%乙醇中。
(10)定磷试剂。
a.17%硫酸溶液：将17ml浓硫酸(比重1.84)缓缓加入到83ml水中。
b.2.5%钼酸铵溶液：将2.5g钼酸铵溶于100ml水中。
c.10%抗坏血酸：将10g抗坏血酸溶于100ml水中，储于棕色瓶保存。溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄色或棕色则失效。
临用时将上述3种溶液与水按比例混合：17%硫酸溶液︰2.5%钼酸铵溶液︰10%抗坏血酸︰水=1︰1︰1︰2(体积分数)。
四、实验步骤
1〉RNA提取
将10g酵母悬浮于90ml 0.04mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150ml锥形瓶中。在沸水浴上加热30min后，冷却。(3000r/min)离心10分钟，将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，(3000r/min)离心5分钟。弃去上清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，每次10ml。乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至漏斗中过滤。沉淀即为粗RNA，可在空气中干燥。作鉴定或测定含量用。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核糖核酸的结构和功能的理解。
实验原理，酵母核糖核酸是由核糖核苷酸单元组成的，核糖核酸的主要结构是由磷酸、核糖和碱基组成的链状分子。核糖核酸通过加热、冷却和酸性条件下，可将其分离成RNA的不同组分，如tRNA、rRNA和mRNA等。
实验步骤：
1. 酵母细胞的培养和收获，将酵母菌落接种在含有葡萄糖和氨基酸的培养基中，培养一定时间后，收获酵母细胞。
2. 酵母细胞的裂解，将收获的酵母细胞用裂解液处理，使细胞膜破裂，释放出细胞内的核糖核酸。
3. 酵母核糖核酸的分离，利用差速离心法，将裂解后的酵母细胞液在不同离心速度下进行离心，分离出不同密度的RNA组分。
4. RNA组分的鉴定，通过琼脂糖凝胶电泳，将分离出的RNA组分进行电泳，根据不同RNA组分的迁移速度和位置，进行鉴定和分析。
实验结果：
经过实验，成功分离出了酵母核糖核酸的不同组分，包括tRNA、rRNA和mRNA等。通过琼脂糖凝胶电泳，得到了不同RNA组分的电泳图谱，根据图谱分析，确认了各个RNA组分的存在和相对含量。
实验结论： 通过本次实验，我们成功掌握了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深了对核糖核酸的结构和功能的理解。同时，实验结果也为进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。
实验中遇到的问题及解决方法：
在实验过程中，可能会遇到RNA的降解、污染等问题，可以通过在实验中加入RNase抑制剂、严格控制实验条件等方法来解决。
总结：
本次实验为我们提供了一种了解RNA结构和功能的方法，也为我们今后的科研工作提供了重要的参考。通过实验，我们不仅学会了实验操作技能，还深化了对核糖核酸的理解，为我们今后的学习和研究打下了坚实的基础。
