免疫调节在自身免疫性疾病治疗中的应用前景

崔雪娇等外泌体的免疫调节作用及在自身免疫性疾病中的研究第ｌ２期　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－４８４Ｘ．２０１７．１２．０３０　外泌体的免疫调节作用及在自身免疫性疾病中的研究①　崔雪娇李玉姝　（中国医科大学附属第一医院内分泌与代谢病科，沈阳１１０００１）　中图分类号　Ｒ３９２．１２　文献标志码Ａ　文章编号　１外泌体的概述　外泌体（Ｅｘｏｓｏｍｅｓ）是直径大约在３０～１００　ｎｍ　之间的双层脂质膜囊泡，可由不同类型的细胞脱落　释放，存在于多种体液中，包括血液、尿液、支气管肺　泡灌洗液，甚至在唾液和乳汁中也可发现外泌体。　与它的起源细胞相比，外泌体含有丰富的胆固醇、神　经酰胺、鞘磷脂等脂类成分，这些成分使得外泌体的　结构更加稳定　１　Ｊ。外泌体包括丰富的蛋白质，如：　黏附分子、膜转运因子、趋化因子、信号转导因子、细　胞骨架蛋白、热休克蛋白、蛋白酶和细胞特异性抗原　等。此外，外泌体还包含编码及非编码ＲＮＡｓ（如　ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ）　Ｊ。局部环境的改变，如炎症、缺　氧也可以影响外泌体的成分，可见，外泌体与周围环　境的作用是相互的　Ｊ。外泌体代表了一种新的远　距离作用模式，而不只限于细胞间的直接接触方式，　具有快速传递信号及信号放大的能力　，在自身免　疫性疾病中的作用也逐渐成为新的研究热点　。　２外泌体参与免疫反应的机制　外泌体是双层脂质膜囊泡，主要起“载体”作　用，而外泌体具有免疫调节的能力主要是因为外泌　体内部富含众多的生物活性分子（趋化因子、炎症　因子、信号转导因子、热休克蛋白、细胞特异性抗原、　ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ等）或表面携带有特殊功能　的蛋白（黏附分子、共刺激分子、配体、受体等），外　泌体将以上这些成分作为信号分子，以表面信号分　子的直接作用、膜融合时信号分子的胞内调节以及　生物活性成分的胞外释放三种方式传递给靶细　胞　，从而改变靶细胞的功能或基因表达，实现免　疫抑制或免疫激活的作用。众所周知，外泌体可以　①本文受国家自然科学基金面上项目（８１４７１００３、８１７７０７８４）资助。　作者简介：崔雪娇（１９９１年一），女，在读博士，主要从事自身免疫性　甲状腺病方面的研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｕｉｘｕｅｗｅｉ５５５＠１６３．ｃｏｍ。　通讯作者及指导教师：李玉姝（１９７１年一），女，博士，教授，主任医　师，博士生导师，主要从事自身免疫性甲状腺　病方面的研究，Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｙｕｓｈｕ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｒｎ。　１０００．．４８４Ｘ（２０１７）１２—１８９１－０５　将其内的ｍｉＲＮＡ传递给靶细胞，实现对靶细胞的基　因沉默　ｊ。下面将对外泌体发挥免疫调节作用中　的重要环节做进一步说明。　２．１生物活性分子进入外泌体Ｐａｕｌ等　的研究　证实，高尔基体上的蛋白（例如：ＭＨＣ　１Ｉ类分子）或　细胞表面被内吞的蛋白（例如：生长因子受体）在胞　浆中被泛素化，泛素化的蛋白结合在胞内体　（Ｅｎｄｏｓｏｍｅ）上，内吞体转运复合物０（Ｅｎｄｏｓｏｍａｌ　ｓｏｒｔｉｎｇ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｆｏｒ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔ，ＥＳＣＲＴ）识别了　Ｅｎｄｏｓｏｍｅ上胞浆侧的蛋白，ＥＳｃＲＴ—Ｉ进一步与之结　合，从而吸引ＥＳＣＲＴ—ＩＩ，这时启动了多囊泡体（Ｍｕｌ—　ｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ　ｂｏｄｉｅｓ，ＭＶＢｓ）中腔内囊泡（Ｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌ　ｖｅｓｉｃｌｅｓ，ＩＬＶｓ）的早期逆出芽，胞浆内的生物活性分　子也在此时进人形成的囊泡，囊泡在ＥＳＣＲＴ一１Ｉ与　ＥＳＣＲＴ．Ⅲ的作用下，形成了ＭＶＢｓ内的游离ＩＬＶｓ。　还有一些蛋白质（例如脂蛋白）不依赖ＥＳＣＲＴ，而是　通过富含神经酰胺的微区域进入ＩＬＶｓ　’ｍ　Ｊ。可见，　无论是细胞表面的蛋白或是高尔基体的蛋白、还是　细胞腔内的蛋白及ＲＮＡ，都有其各自的途径进入　ＩＬＶｓ。ＭＶＢｓ可以向溶酶体释放ＩＬＶｓ使之降解，也　可以在ＧＴＰａｓｅ家族中ＲＡＢ酶的调节下与细胞膜融　合向外界分泌ＩＬＶｓ，被释放的囊泡称为细胞外囊　泡，外泌体是细胞外囊泡的一种。　２．２外泌体在抗原呈递中的作用在多种自身免　疫性疾病及肿瘤的研究中被证明，自身免疫性疾病　的抗原或肿瘤的抗原可以“转移”到抗原呈递细胞　或Ｔ细胞中发挥作用…’　Ｊ，可能是通过以下机制。　①外泌体可以附着到抗原呈递细胞（ＡＰＣ）的表面，　将外泌体自身的ＭＨＣ　１１类一抗原复合物直接呈递给　Ｔ细胞，抗原不需要经过ＡＰＣ中ＭＨＣ　１１类分子的再　次呈递，这是外泌体的直接抗原呈递过程。②外泌　体也可以被ＡＰＣ内吞，将抗原呈递给ＡＰＣ的ＭＨＣ　Ⅱ类分子，进一步形成ＭＨＣ　１１类一抗原复合物，ＡＰＣ　再将抗原呈递给Ｔ细胞，这是外泌体的间接抗原呈　递过程　。　３外泌体参与免疫反应　

中国疗养医学2019年第28卷第3期ChinJConvalescentMed，Mar.2019，Vol.28，No.3

小干扰RNA技术治疗自身免疫性疾病应用展望

宋国婧王永福

【摘要】自身免疫性疾病(autoimmunediseases，AID)是指机体对自身抗原发生免疫反应，导致自身组织受损而引起的疾病，可累及全身各个系统，临床表现多种多样。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)技术是指利用小干扰RNA(smallinterfering，RNA，siRNA)沉默致病基因表达的技术。RNAi现象在生物中普遍存在，由于RNAi技术具有高效性、特异性、位置效应、竞争效应和可传播性等特点，因此越来越多的研究人员将RNAi技术应用于多种研究领域中，如基因功能研究、基因治疗、开发新药，以及病毒感染、遗传性疾病和恶性肿瘤的治疗等。因此，siRNA技术将会成为治疗AID的新途径。【关键词】小干扰RNA；RNA干扰技术；基因沉默；自身免疫性疾病

RNA干扰(RNAinterference，RNAi)技术是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-strandedRNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解过程中沉默致病基因或蛋白片段表达的技术。运用RNAi干扰技术，可在细胞基因转录后抑制基因表达，来达到沉默基因的效果[1]，在遗传性疾病、肿瘤和自身免疫性等疾病的治疗中已广泛应用该项技术[2-3]。自身免疫性疾病(autoimmunediseases，AID)是指人体对自身抗原产生免疫应答致使自身组织器官受损而引起的疾病，主要包括类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)、系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，SLE)、干燥综合征(Sjogren'ssyndrome，SS)、系统性硬化症(systemicsclerosis，SSc)等，临床上表现为产生自身抗体和免疫调节异常[4]。小干扰RNA(smallinterfering，RNA，siRNA)具有带负电荷、相对分子质量大和不稳定的理化特性，在体内易被降解且不易穿过细胞膜，需要与合适的载体相结合才能被运送至靶细胞。目前，常采用的载体递送方式分为病毒载体递送和非病毒载体递送两大类[5]。1siRNA在自身免疫性疾病(autoimmunediseases，AID)研究中的应用

．２６０・　分子诊断与治疗杂志２０１０年７月第２卷第４期Ｊ　Ｍｏｌ　Ｄｉａｇｎ　Ｔｈｅｒ，Ｊｕｌｙ　２０１０，Ｖｏ１．２　Ｎｏ．４　

抗核抗体谱在自身免疫性疾病中的临床应用　

李本忠光辉陈家东　

ｆ摘要】　目的探讨抗核抗体谱在自身免疫病中的应用价值。　方法ＡＮＡ检测采用间接免疫　

荧光法，ＥＮＡ多肽抗体谱用免疫印迹法。　结果７２９例患者中，有５８例自身免疫病患者，其中ＳＬＥ　３１　

例，混合性结缔组织病１２例，干燥综合征１３例，硬皮病和皮肌炎各１例。所有自身免疫病患者的ＡＮＡ均　

为阳性，但ＳＬＥ患者的ＥＮＡ抗体谱中可显示抗ｎＲＮＰ、抗Ｓｍ、抗ＳＳＡ、抗ＳＳＢ、抗ｄｓＤＮＡ等抗体阳性；　而干燥综合征患者仅抗ＳＳＡ或抗ＳＳＢ抗体阳性；皮肌炎患者仅显示抗Ｊｏ．１抗体阳性；硬皮病患者仅显　

示抗Ｓｃ１．７０抗体阳性。　结论ＥＮＡ抗体谱对各种自身免疫病的诊断具有重要意义。　

ｆ关键词】自身免疫病；ＥＮＡ；抗核抗体谱　

Ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｏｆ　ａｎｔｉ—ｎｕｃｌｅａｒ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　

ｄｉｓｅａｓｅｓ　ＬＩ　Ｂｅｎｚｈｏｎｇ，ＧＵＡＮＧ　Ｈｕｉ，ＣＨＥＮＧ　Ｊｉａｄｏｎｇ　（Ｔｈｅ　Ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆＬｉｕ’ａｎ，Ａｎｈｕｉ，Ｌｉｕ　ａｎ　２３７００５，Ｃｈｉｎａ）　

【ＡＢＳＴＲＡＣＴＪ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ—ｎｕｃｌｅａｒ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ＥＮＡ　ｐｒｏｆｉｌｅ　ｉｎ　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　

ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａｎｔｉ—ｎｕｃｌｅａｒ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｉｎｄｉｒｅｃｔ　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ＥＮＡ　

ｐｒｏｆｉｌｅ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｏｌｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｏｆ　７２９　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　５８　ｃａｓｅｓ　ｗｉｔｈ　

检验医学与临床２００８年１２月第５卷第２４期Ｌａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　２００８，Ｖｏｌ，．５，Ｎｏ．２４　

自身抗体联合检测在自身免疫性疾病诊断中的应用价值　

陈　滢，张迎梅，陆俊忠，唐朝贵（南京医科大学淮安第一人民医院检验科．江苏淮安２２３３００）　

【摘要】　目的运用间接免疫荧光法（ＩＩＦ）检测抗核抗体（ＡＮＡ）、抗双链脱氧核糖核酸（抗ｄｓ—ＥＮＡ）及免疫印　

迹法（ＩＢＴ）检测抗可提取性抗核抗体（抗ＥＮＡ）。方法　ＡＮＡ、抗ｄｓ—ＤＮＡ均采用Ｉ］Ｆ，其中ＡＮＡ抗原片同时固定　

有Ｈｅｐ一２细胞和猴肝切片，抗ｄｓ－ＤＮＡ检测抗原片采用绿蝇短膜虫。抗ＥＮＡ检测采用ＩＢＴ。共检测自身免疫性疾　

病患者１７０例。结果ＡＮＡ在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）、干燥综合征、肌炎／皮肌炎、混合性结缔组织病、系统性硬皮　

病、类风湿关节炎、强直性脊柱炎、过敏性紫癜的阳性率分别为９１．６　、１００．０　、１００．０　、８２．４　、６５．４％、３５．７％、　

１６．７　、４２．９　。抗ｄｓ—ＤＮＡ对ＳＬＥ阳性率为６５．１　，特异性为９６．６　。抗ＥＮＡ对自身免疫性疾病（ＡＩＤ）鉴别诊　

断具有重要意义。结论运用Ｈｅｐ－－２／猴肝复合抗原片检测ＡＮＡ有利于ＡＩＤ的初步筛选和判断。抗ＥＮＡ抗体谱　

检测有利于自身免疫疾病的鉴别诊断，抗ｄｓ－－ＤＮＡ可作为ＳＬＥ治疗和监测的指标　

【关键词】　自身免疫性疾病；　抗核抗体；　可提取性核抗原抗体　

中图分类号：Ｒ４４６．６；Ｒ５９３　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７２—９４５５（２００８）２４—１４９４－一０３　

Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ￣ａｌｕｅ　ｏｆ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＮＡ，ａｎｔｉ－．ｄｓＤＮＡ，ａｎｔｉ－ＥＮＡ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｉｎ　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　ｄｆｓ．－　

ｅａｓｅ　ＣＨＥＮ　Ｙｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ｙｉｎｇ　ｒｒ　ｅｉ，ＬＵ　Ｊｕｎ－－ｚｈｏｎｇ，丁ＡＮＧ　Ｃ　０一ｇｕｉ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ＣＨｎｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，