细胞培养基本知识基本技术ppt课件

净化工作区内不存放物品，保持洁净气流流型不 受干扰
3-6个月更换初效无纺布，3年更换高效过滤器 使用完毕，清理台面上的物品，75%酒精擦洗台
面
定期进行功能测试，检查净化台各项工作指标是 否达标
细胞培养的实验用品
细胞培养瓶
25平方厘米，正方斜颈 25平方厘米，三角斜颈 75平方厘米，正方斜颈 75平方厘米，三角斜颈 150平方厘米，正方斜颈
SKOv3 （卵巢癌细胞）
1.细胞种类：SKOv3（卵巢癌细胞） 2.培养的天数：传代后3d； 3.放大倍速：倒置显微镜 X10； 4.培养基种类：DMEM+5%胎牛血清； 5.细胞状态与特征简述：细胞贴壁生
长，生长速度较快。
CCL-149
1.细胞种类：大鼠肺泡上皮细胞； 2.培养的天数：1d（种在48孔板中）； 3.放大倍速：倒置显微镜 X20； 4.培养基种类：F12K+10%胎牛血清； 5.细胞状态与特征简述：细胞呈梭形，透 亮贴壁生长，3－4天传代一次，Giemsa染 色。
1. 细胞种类：HL-60； 2. 培养的天数：ATRA 1微摩尔作用5天； 3. 放大倍速：倒置显微镜 X10； 4. 培养基种类：1640+8％胎牛血清； 5. 细胞状态与特征简述：悬浮细胞，分化的细胞核浆比例减小，核仁减少或
消失，胞核呈杆状或分叶状。
KU812
1.细胞种类：人嗜碱细胞性白血病细胞系； 2.培养的天数：5d； 3.放大倍速：倒置显微镜 X20； 4.培养基种类：RPMI1640+10%新生牛血清； 5.细胞状态与特征简述：细胞呈圆形，悬浮生长。
授课 6次理论课+2次实验课
细胞培养
细胞培养(cell culture): 动植物细胞在体外培养的条 件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织。

细胞培养过程中产生的废液和 废弃物不可随意处理。实验室 应该制定废物处理计划并妥善 处理、处置，确保环保。
结
1 细胞培养中的安全问题
在进行细胞培养操作时需要注意一些安全问题，如在安全柜操作，穿戴实验外套和化、功能化和量化方向发展，国内企业正加紧提升技术水 平和产业化水平。
细胞培养培训
细胞培养是生物技术和医学研究中不可或缺的重要技术之一。在本次培训中， 我们将全面介绍细胞培养的基本概念、操作流程和常见问题解决方法。欢迎 大家踊跃参与！
介绍
1 定义
2 重要性
细胞培养是指通过在无菌 环境下加入合适的营养液， 使人类或动物细胞在体外 的人工环境中生长和繁殖 的技术。
细胞培养是研究生命科学 和药物研发不可缺少的技 术。它能够帮助我们理解 细胞的生长、分化、凋亡 和信号传导等基本生理过 程。
2
殖，以获得足够的细胞数量用于实验。 细胞传代技术可以使细胞连续繁殖多代
细胞凋亡是指由一系列信号调控的正常
并保持生物学特性。
细胞死亡程序。在细胞培养中凋亡的部
分或全部细胞可能会影响实验结果。因
此，细胞凋亡检测技术成为了细胞培养
3
细胞培养蛋白表达技术
的重要技术方法。
细胞培养蛋白表达技术是指通过转染外
源性质粒或病毒载体进入细胞，使细胞
3 应用场景
细胞培养技术广泛应用于 基础研究、药物筛选、生 物材料研究、环境毒理学 等领域。
细胞培养的基本概念
细胞种类
主要包括原代细胞、细胞株、酶处理细胞等。不 同种类的细胞具有不同的生长要求，因此对于细 胞的选择要根据科学研究的需要作出选择。
细胞培养的条件
温度、CO2浓度和通气等条件对于细胞培养的影 响非常大。合理的培养条件是保证细胞生长和繁 殖的前提。

用品和试剂
培养液、吸管、离心管、培养瓶、CHO/Hela细
胞等。
操作步骤（图）
基础培养基 95％ 发白并出现细针孔空隙时终止消化。
48％（58％）基础培养液。
血清 2％～5％
双抗100u/ml
（13）冻存液：其是配方：
10％DMSO
40％小牛血清（30％FBS） 1％的5.6％NaHCO3
1％双抗
48％（58％）基础培养液。
（14）MEM培养液:其是配方：
63%MEM液 20％的乳蛋白水解物 10％的小牛血清 1％的双抗（P、S）
2.包装：
在消毒前必须进行严格包装，以便消毒及储 存，防止落入灰尘及消毒后再次被污染。包装 纸（盒）表面用油性记号笔标明物品名称、消 毒日期等。
3.消毒:
在组织细胞培养技术中，务必保证组织细 胞在无微生物的条件下生长。防止培养物污染 可通过消毒灭菌（将已存在的微生物去除）和 无菌操作技术（防止已经消毒灭菌的用品被污 染）来完成。
洗净，烘干然后再泡入1％稀盐酸液中30分钟，用自来水彻底冲洗3-5遍，蒸馏水漂洗3遍，三（双）蒸漂洗2遍，烘干备用。
这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化。
（胰酶消化分离法、胶原酶法 ）
离心500～ 1000r/min×1～ 2min，
（12）细胞维持液：用以维持细胞缓慢生长或不 复苏细胞与冻存的要求相反，应采用快速融化的手段。
（11）细胞生长液：是用以维持细胞生长增殖的
液体。其是配方：
(5）封好的冻存管即可直接冻存 标准的冻存程序为降温速率﹣l～﹣2℃／min；
二、材料和试剂
基础培养基 ★ 细胞：贴壁细胞株CHO 80％～90％
★ 试剂：0.
利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。

严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
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见的是贴附于平面支持物细胞。在一般光镜下 生存中的细胞是均质而透明的，结构不明显。
细胞在生长期常有1-2个核仁，在细胞机能 状态不良时，细胞轮廓会增强，反差增大。
若胞质中时而出现颗粒、脱滴和腔泡等， 表明细胞代谢不良。
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倒 置 显 微 镜
back
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液 氮 罐
back
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