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第五章微生物的生长及影响因素先介绍如何在实验室或生产实践中使微生物生长，即如何培养微生物；然后介绍微生物生长的规律（包括个体和群体）；以及环境条件对微生物生长的影响；最后讨论控制微生物生长特别是有害微生物生长的方法。
生长：微生物个体重量的增加和体积增大的现象。
繁殖：微生物数量增多的现象。
第一节微生物生长一、微生物的培养方法（一）微生物的纯培养及获得方法1.纯培养：微生物学将从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代叫作纯培养。
2.获得方法（分离方法）：只有分离到微生物的纯菌种，才能研究和利用微生物，目前常用的分离方法有：①释倒平板法：按不同的稀释度将待分离的材料进行稀释（10倍稀释法），然后分别倒平板，培养得到单一菌落，挑取，分离，纯化即得。
②平皿划线法：在培养基表面用接种环平行或连续划线，培养可得单菌落，分离纯化得纯培养。
平行扇形连续③单细胞挑取法：用单细胞挑取仪（显微镜挑取器）在显微镜下直接挑取单个细胞（菌体）进行培养，而获得纯培养的方法。
④选择培养基分离法：用只适于一种微生物生长的培养基培养，结果只有一种微生物生长，挑取即得。
⑤涂抹培养皿分离法：平板上滴0.2ml菌悬液，用玻璃刮棒涂抹，培养后挑取菌落，纯化即得。
另外，有煮沸法分离芽孢杆菌；利用致死温度的不同分离噬菌体。
（二）微生物的培养方法1.好氧培养法：a.实验室：试管斜面，平板。
b.工业：半固体物料（浅盘法，转桶法，厚层培养法）c.食用菌：袋栽法，床栽法。
2.固体培养法：a.实验室：摇瓶培养法，试管液体培养法，三角瓶浅层培养法，小型台式发酵罐等。
b.工业：发酵罐（通用型搅拌发酵罐，气泡塔型发酵罐，其他形式的发酵罐）。
3.厌氧培养法：a.验室：厌氧培养皿，厌氧试管，厌氧罐。
b.工业：液体静置培养法。
二、微生物的同步生长及同步培养方法1.同步培养法：能使培养物中所有的微生物细胞都处于相同的生长阶段的培养方法成为同步培养法。
2.同步生长：培养物中的所有微生物细胞都处于同一生长阶段，并都能同时分裂的生长方式。
第二章 微生物的纯培养和显微技术
[教学目标教学目标]] 通过本章的教学，使学生掌握什么是纯培养？微生物分离纯化的基本技术。
[教学的重点和难点教学的重点和难点]] 纯培养的概念和微生物的无菌操作技术。
[教学方法和手段教学方法和手段]] 应用多媒体授课，主要以讲授为辅，实验教学为主。
[教学内容教学内容]]
第一节第一节 微生物纯培养微生物纯培养
纯培养（（pure culture pure culture）：）：
）：单个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代。
克隆：对于微生物，由于其主要进行无性繁殖，故纯培养即为克隆。
建立纯培养，证实其纯度无可置疑，并保持不受污染是微生物学家最重要的任务之一。
（即控制无杂菌）
一、获得纯培养的方法：
（一）.平板分离法：
1、划线分离法：快速、方便。
分段划线（（适用于浓度较大的样品适用于浓度较大的样品））
连续划线（（适用于浓度较小的样品适用于浓度较小的样品））
扇形划线
方格划线
分段划线法
2、稀释倾注分离法：
可定性、定量。
方法：先取稀释液注入平皿，再注入45℃左右的培养基，将稀释液冲开培养基表面、中间均会出现菌落。
3、涂布平板法（培养基表面出现菌落）
简单易行，但易造成机械损伤
（二）．液体分离法
适用于细胞较大的微生物。
用液体培养基对菌液做10倍系列稀释，使试管中只存在一个细胞，由此繁殖得到的后代必是纯培养。
（三）单细胞（单孢子）分离法
较大的微生物可用毛细管挑取单个个体；个体较小的微生物，需用显微操作仪，在显微镜下进行。
（四）.选择培养分离（通常做成固体的培养基） ：通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术称为选择培养分离。
1、利用选择平板进行直接分离
2、富集培养
主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同，指定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。
固体培养各种微生物形成的菌落特征：
二、纯培养的接种方法
根据菌的生长速度的快慢来选择 斜面接种、液体接种 。
（一）斜面接种：
为保存菌种和获得大量菌种
（1）密涂布法(适用于各种M，可获得大量菌体）
（2）蛇形划线法(适用于易扩散的M）
（3）中央划线法（适用于生长快的M）
（4）点种法（适用于真菌短时间保存菌种）
斜面接种示意图
（二）穿刺接种法：
用于接种试管深层琼脂培养基，以观察细菌运动及鉴定细菌用。
穿刺接种
（三）液体接种法
用接种针在液面边缘-----产生混浊------搅匀、振荡
注意事项：
1、小接种量、
2、用无菌滴管或移液管、
3、直接倒入、
4、利用无菌空气
通过特殊装置压入、5、利用负压吸入液体基中。
三、无菌技术
无菌操作：防止微生物进入物体的技术。
无菌：指没有活的微生物（包括芽孢）。
死亡：指不可逆地丧失了生长繁殖的能力。
除菌：应用机械的方法（过滤、离心分离、静电吸附）除去液体或气体中的微生物。
灭菌操作：杀灭所有微生物
常用 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌
干热灭菌：空气加热灭菌
高温灼烧：用火直接接触烧灭
四、菌种保藏
传代培养保藏
冷冻保藏
干燥保藏
五、二元培养物
如果培养物中只含有二种微生物，而且是有意识地保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。
第二节第二节 显微镜和显微技术显微镜和显微技术
一、显微镜的种类及原理
1.种类
普通光学显微镜
暗视野显微镜
相差显微镜
荧光显微镜
透射电子显微镜(transmission electron microscope TEM )
描电子显微镜(SEM )
扫描隧道显微镜 (STM ） 原子力显微镜(AFM)
早期的光学显微镜
2.原理
显微镜的作用主要是放大作用。
一般利用目镜和物镜两组透镜 来放大成像，组成由机械装置和 光学系统两大部分。
除了放大外，决定显微观察效果的还有两个重要的因素，即分辨率和反差。
分辨率：指辨别两点之间最小距离的能力。
即最小可分辨能力。
0.5λ
分辨率=-----------
nsinθ
显微镜的分辨率的比较图，书 23页图2-10
反差：样品区别于背景的程度。
与显微镜的自身特点有关；
显微观察时对显微镜的正确使用；
良好的标本制作和观察技术。
二、显微技术
1、良好标本的制备
光学显微镜的制样 活体观察：压滴法、悬滴法、菌丝埋片法
染色观察 ：活菌染色和死菌染色（正染色和负染色）
电子显微镜的制样 透射电镜样品的制备
电子的穿透能力有限，需采用覆盖有支持膜的载网来承载被观察的样品。
常用负染技术
投影技术
超薄切片技术
扫描电镜样品的制备:主要要求干燥 ，并且表面能够导电，常用自然干燥、真空干燥、冷冻干燥等。
干燥、喷镀金属导电层后观察。
2、分析技术
（1）对显微镜的正确使用 了解显微镜的构造和性能。
（2）观察技术 不仅观察物体的形态、结构，可进行的摄影技术，而且与计算科学技术结合的图像分析、模拟仿真技术。
（3）对物体的组成成分定性和定量。
