培养基的配制1.2

天麻蜜环菌、萌发菌母种生产技术人工栽培天麻，在有性繁殖过程中，需要萌发菌和蜜环菌两种共生菌。

笔者在生产实践中，摸索出两种共生菌都能生长的培养基及生产技术。

具体做法如下。

1培养基配制1.1液体培养基马铃薯（挖去芽眼、去皮、切片）100g，硬杂木屑、麦麸、玉米面各50g，自来水或天然水1300mL，在双重锅内煮沸30分钟后用双层纱布过滤。

取滤液补水至1000mL，加葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、蛋白胨0.5%、10mLVB1。

全部溶解摇均后，分装于500mL的三角瓶或罐头瓶内，每瓶装150mL左右，也可装于试管内，装入量为试管容积的1/4。

三角瓶和试管用棉花塞口，罐头瓶用2层牛皮纸或4层报纸上盖一层塑料布封口后，用皮筋扎口。

特点：技术含量高，繁殖快，长好即可应用，但不能长期保存。

1.2固体斜面培养基是食用菌生产中常用的培养基，按照“1.1”的操作程序制取滤液，在滤液中加入琼脂18g，加热溶化并补水至1000mL，趁热加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、蛋白胨5g、10mgVB1，全部溶解摇均，分装于试管内，装量为试管容量的1/4，然后用棉花塞口。

1.3木屑培养基硬杂木屑50%、玉米芯（粉碎成小颗粒状）25%、麦麸15%、玉米面10%，外加葡萄糖0.5%、蔗糖0.5%、石膏1%、石灰0.5%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.1%、2%VB1。

将原料和石膏、石灰等干料拌均，再将上述可溶解的所有辅料溶于水中并拌入原料中，使之含水量为70%，充分拌均后装入试管，并适当压实。

装入量为试管容积的1/2，然后用棉花塞口。

特点：耐贮藏，便于邮寄。

2灭菌用手提式高压灭菌锅，也可用民用高压锅代替。

2.1液体和斜面固体培养基灭菌时，蒸汽压力为1.4kg/平方厘米时稳定保持30分钟，待锅内温度降到50～70℃时出锅。

液体培养基出锅后直接放入接种箱中，待温度降到25℃以下时接种；斜面固体培养基需趁液体状态时倾斜成斜面（斜面长度约占试管长的3/5），待培养基自然凝固后移入接种箱。

实验室常用培养基的配制方法Ampicillin (100 mg/ml)IPTG(24 mg/ml)X-Gal (20 mg/ml)LB 培养基■ 组份浓度100 mg/ml Ampicillin■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量5 g Ampicillin 置于50 ml 离心管中。

2. 加入40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3. 用0.22 μm 滤器过滤除菌。

4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。

■ 组份浓度24 mg/ml IPTG■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量1.2 g IPTG 置于50 ml 离心管中。

2. 加入40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3. 用0.22 μm 滤器过滤除菌。

4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。

■ 组份浓度20 mg/ml X-Gal■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量1 g X-Gal 置于50 ml 离心管中。

2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50 ml。

3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。

■ 组份浓度1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract，1%（W/V）NaCl■ 配制量 1 L■ 配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L 烧杯中。

Tryptone 10 gYeast Extract 5 gNaCl 10 g2. 加入约800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH 值至7.0。

4. 加去离子水将培养基定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，4℃保存。

TB 培养基0.5%（W/V）Yeast Extract1%（W/V）NaCl0.1 mg/ml Ampicillin■ 配制量 1 L■ 配制方法 1. 称取下列试剂，置于1 L 烧杯中。

一、哺乳动物培养基1、DMEM培养基DMEM培养基低糖(干粉) D2902 10X1L 含L-谷氨酰胺和1000 mg/L的葡萄糖。

不含酚红和和碳酸氢钠。

50L每升培养基含10.0g干粉。

配制时每升加3.7g碳酸氢钠。

DMEM培养基低糖（干粉）D5523 10×1L 含L-谷氨酰胺和1000 mg/L葡萄糖，不含碳酸氢钠。

2×5L每升培养基含10.0g干粉。

配制时每升加3.7g碳酸氢钠。

5L50L DMEM培养基低糖（干粉）D5030 10×1L 不含L-谷氨酰胺，葡萄糖，酚红，丙酮酸钠和碳酸氢钠。

10L每升培养基含8.3g干粉。

配制时每升加1.0g葡萄糖，0.584g 50LL-谷氨酰胺和3.7g碳酸氢钠。

DMEM培养基低糖（干粉）D5280 10×1L 可以高压消毒。

10L含1000 mg/L的葡萄糖。

不含L-谷氨酰胺和碳酸氢钠。

50L每升培养基含9.6g干粉。

配制时每升加0.584g L-谷氨酰胺和3.7g碳酸氢钠。

DMEM培养基低糖（液体）D5546 500ML 含有1000 mg/L葡萄糖和碳酸氢钠，不含L-谷氨酰胺。

用盐6×500ML 酸维生素B6代替盐酸吡哆醛。

使用前每升加入0.584g L-谷氨酰胺。

24×500ML1L6×1L DMEM培养基低糖（液体）D5921 100ML 含有1000 mg/L葡萄糖和碳酸氢钠，不含L-谷氨酰胺和酚红。

500ML用盐酸维生素B6代替盐酸吡哆醛。

使用前每升加入0.584g L-谷氨酰胺。

6×500MLDMEM培养基低糖（液体）D6046 100ML 含有1000 mg/L葡萄糖，L-谷氨酰胺和碳酸氢钠。

用盐酸维500ML 生素B6代替盐酸吡哆醛。

6×500ML1LDMEM培养基低糖（液体）D2429 100ML 1×的培养基含有1000 mg/L的葡萄糖。

skov3细胞培养技巧Skov3细胞是一种人类卵巢癌细胞系，具有高度的恶性程度。

在研究卵巢癌的发病机制和治疗方案中，Skov3细胞被广泛应用。

本文将介绍Skov3细胞的培养技巧，包括培养基配制、传代方法、冻存和解冻技巧等方面。

一、培养基配制1.1 基础培养基Skov3细胞最常用的培养基为DMEM/F12（1:1）+10% FBS（fetal bovine serum），其中DMEM/F12为无血清培养基，适合于无血清培养实验。

FBS含有丰富的生长因子和营养成分，可以促进Skov3细胞的生长和增殖。

1.2 基础培养基添加物除了FBS外，还可以向基础培养基中添加其他生长因子和营养成分，如EGF（表皮生长因子）、bFGF（碱性成纤维细胞生长因子）、L-谷氨酰胺、钠丙酸等。

这些添加物可以提高Skov3细胞的增殖速度和细胞活性。

1.3 基础培养基调节pH值Skov3细胞的最适生长pH值为7.4，因此在培养过程中需要注意调节培养基的pH值。

如果pH值偏高或偏低，会影响细胞的生长和增殖。

二、传代方法2.1 细胞收获当Skov3细胞生长到80%~90%的密度时，可以进行传代。

首先将培养基倒掉，用PBS（磷酸盐缓冲液）洗涤细胞2~3次，使细胞表面没有残留培养基。

2.2 细胞消化接下来使用0.25% Trypsin/EDTA溶液将细胞消化下来。

加入足够的溶液覆盖细胞表面，放置5~10分钟左右，观察细胞是否开始分离。

如果分离不完全，可以轻轻拍打培养瓶或离心加速分离。

2.3 细胞计数将消化后的细胞转移到新的15ml离心管中，并用PBS洗涤1~2次。

使用显微镜和计数板对细胞数进行计数，并计算出相应的传代倍数。

2.4 细胞接种将细胞重新接种到新的培养瓶中，加入适量的新鲜培养基。

注意不要让细胞密度过高，否则会影响细胞的生长和增殖。

三、冻存技巧3.1 冻存液配制Skov3细胞冻存液配制方法为DMEM/F12+10% DMSO（二甲基亚砜）+10% FBS。