SRB硫酸盐还原菌测试瓶(企业标准)

中国石头天然气集团公司企业标准Q/SY 49—2010代替Q/SY 49—2007油田用杀菌剂技术要求1.范围本标准规定了油田用杀菌剂的技术要求，实验方法，检验规则，标志，包装、运输和储存，健康、安全、环境控制要求等本标准适用于采购的油田水处理用杀菌剂的质量检验与评价。

2.规范性引用文件下列文件对于文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6680 液体化工产品采样通则GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/T 0532 油田注入水细菌分析方法绝迹稀释法3 技术要求油田用杀菌剂技术指标应符合表1的要求。

表1 油田用杀菌剂技术指标项目指标空白水样含菌量（＜1×10³个/mL）空白水样含菌量（≥1×10³个/mL)外观均匀液体溶解性溶于水对腐生菌杀菌率，% ≥97对铁细菌杀菌率，% ≥97对硫酸盐还原菌杀菌率，% -- ≥99硫酸盐还原菌残余菌数，个/mL ＜25 --4实验方法4.1 外观检验在非直射的自然光线下用肉眼观察。

Q/SY 49--20104.2 溶解性检验在100mL比色管中先加入20mL蒸馏水，翻到摇动比色管10次，静止5min后观察，呈透明相溶液为溶于水，分层为不溶于水.4.3 杀菌率检验4.3.1杀菌率检验方法按照SY/T 0532的规定测定加杀菌剂前后水样中硫酸盐还原菌、腐生菌和铁细菌含量、计算杀菌率。

4.3.2 设备和材料4.3.2.1电热压力蒸汽消毒器；工作压力范围为0.14MPa ～0.17MPa(表压） 4.3.2.2电热恒温培养箱；控温范围为室温～60℃，控温精度为±1℃。

4.3.2.3硫酸盐还原菌测试瓶；SRB-7。

4.3.2.4腐生菌测试瓶。

4.3.2.5铁细菌测试瓶。

4.3.3杀菌率检验条件4.3.3.1杀菌剂加量为50mg/L. 4.3.3.2在25℃±2℃条件下向水样中注入杀菌剂，杀菌4h.同时接种空白含菌水样。

收稿日期:2008-09-09作者简介:王丹(1983-),女(汉族),辽宁盖州人,硕士研究生,E -m ail w angdan0417@yaho o com cn ;游松(1963-),男(汉族),辽宁沈阳人,教授,博士,主要从事天然产物生物学与药学研究,T el .024-********,E -m ail y ousong206@y ahoo com cn 。

文章编号:1006-2858(2009)06-0502-05硫酸盐还原菌的培养及检测方法的研究进展王 丹,贾 贞,游 松(沈阳药科大学生命科学与生物制药学院,辽宁沈阳110016)摘要:目的综述硫酸盐还原菌的培养及其检测方法的研究进展。

方法在查阅国内外文献的基础上,以其中的26篇文献为依据,对硫酸盐还原菌的培养及检测方法进行分析和归纳。

结果与结论由于硫酸盐还原菌自身的特点,尤其在制药等行业废水治理方面的优势,硫酸盐还原菌的研究已引起人们的广泛关注。

通过综述硫酸盐还原菌的培养方法及其检测技术,为该菌的进一步研究打下了基础。

关键词:硫酸盐还原菌;培养;检测;废水处理中图分类号:Q 81 文献标志码:A硫酸盐还原菌(su lfate -reduc i n g bacteria ,SRB)是一类形态、营养多样化,利用硫酸盐作为有机物异化作用的电子受体的严格厌氧菌。

1895年首先由Be ij e rinck 发现,1903年De l d en 发表了有关海水中耐盐菌种的报道。

1925年E lion 发现了一种嗜热的SRB [1]。

SRB 生长能力顽强,生存环境广泛,是引起钢铁、金属等材料腐蚀的重要原因之一。

据估计,在美国,油井的腐蚀77%以上由SRB 造成[2]。

然而,由于SRB 可将硫酸盐异化还原生成硫化氢,硫化氢又能与废水中的许多重金属生成沉淀,使得SRB 在废水处理方面表现出很大的优越性和可行性[3-4]。

制药等行业排出的废水属于高硫酸盐有机废水,利用SRB 可有效去除废水中的硫酸盐,SRB 法得到了越来越多的重视。

SRB实验缺点硫酸盐还原菌 (Sulfate-Reducing Bacteria，简称SRB) 是一种厌氧的微生物。

广泛存在于土壤、海水、河水、地下管道以及油气井等缺氧环境中。

它能利用金属表面的有机物作为碳源，并利用细菌生物膜内产生的氢，将硫酸盐还原成硫化氢。

硫酸盐还原菌腐蚀的形成：在某些环境中，硫酸盐还原细菌（SRB）能够在管道壁上聚集，使管道可能发生局部点蚀。

硫酸盐还原菌与有机物质和硫酸盐反应生成硫化氢和二氧化碳会与管道壁中的铁反应，产生不同形式的硫化铁。

硫化铁和管道中其他形式的沉积物形成大量的黑色粉末，这些黑色粉末比管道碳钢硬度大，故会对管道部件造成严重的腐蚀危害。

硫酸盐还原菌的危害：仪器和控制阀的污染 - 结垢可能导致测量结果不良，腐蚀会导致的部件损；堵塞过滤系统—当管道系统中含有过量的黑色粉末时，可能会导致过滤器寿命缩短；管道—黑色粉末增加了管道内壁表面的粗糙度，可能会引起严重或不受控制的腐蚀以至于导致管道失效。

对于SRB，水是其存在且发生代谢活动的主要因素，要减少SRB 的腐蚀影响，就需要对管道中的水汽进行控制或消除，并用适当的生物杀灭剂进行控制。

硫酸盐还原菌的检测：SRB的生物腐蚀带来的危害和损失是巨大的，然而在对SRB进行控制和消除之前，需要对相关可能会发生腐蚀的场合进行SRB检测，以判断SRB是否存在以及含量多少，从而制定适当的治理方案。

目前，国内外学者对硫酸盐还原菌的检测方法进行了许多探索和研究，发明了许多检测技术，从原理上讲，主要分为：（1）培养法；（2）免疫学法；（3）atp法；（4）代谢产物定量法。

培养法主要有测试瓶法、琼脂深层培养法和溶化琼脂管法。

这些方法都是根据API RP-38美国石油学会推荐的地下注入水分析方法中的3管平行绝迹稀释法（Disappearing Dilution Method）进行的。

其中测试瓶法是利用瓶装的含乳酸盐、硫酸盐和fe2+（或金属铁）的培养基对待测水样进行接种培养，当待测样品中存在SRB时，经过培养瓶底会出现黑色的沉淀（FeS），以此作为SRB生长指示，从而确定水样中srb的含量。

一种硫酸盐还原菌测试瓶的生产方法摘要：本文介绍了一种硫酸盐还原菌测试瓶的生产方法。

该方法采用聚丙烯材料制造测试瓶的底部和盖子，瓶身采用玻璃材料制造，以确保瓶内细菌的正常生长和观察。

同时，对测试瓶进行了严密封装，以防止外界污染。

该方法制备的硫酸盐还原菌测试瓶具有结构坚固、封装性好的特点，有助于进行硫酸盐还原菌的检测。

关键词：硫酸盐还原菌；测试瓶；生产方法1.引言硫酸盐还原菌是一类菌群，具有重要的生态学意义。

测定硫酸盐还原菌含量是环境监测和地质勘探等领域的重要内容。

为了方便研究人员进行硫酸盐还原菌的检测，需要设计一种方便使用、结构坚固的测试瓶。

本文介绍了一种硫酸盐还原菌测试瓶的生产方法。

2.材料与仪器2.1材料（1）聚丙烯材料（2）玻璃材料（3）硫酸盐还原菌培养基2.2仪器（1）注塑机（2）玻璃吹塑机（3）灭菌器（4）电子天平（5）显微镜3.生产方法3.1制备测试瓶底部和盖子（1）准备聚丙烯材料和注塑机。

（2）将聚丙烯材料放入注塑机中进行熔化。

（3）将熔化的聚丙烯注入测试瓶模具中，待其凝固。

（4）取出测试瓶底部和盖子，进行修整和打磨，确保其平整。

3.2制备测试瓶瓶身（1）准备玻璃材料和玻璃吹塑机。

（2）将玻璃材料熔化，并吹制成测试瓶的瓶身。

（3）对测试瓶进行修整和打磨，确保其平整。

3.3封装硫酸盐还原菌培养基（1）准备好硫酸盐还原菌培养基。

（2）将硫酸盐还原菌培养基倒入测试瓶中。

（3）将测试瓶放入灭菌器中进行灭菌处理，以杀灭其中的细菌。

3.4细菌检测（1）将待测物样品接种到灭菌过的测试瓶中。

（2）将测试瓶放入恒温培养箱中进行培养。

（3）培养一定时间后，取出测试瓶进行观察。

使用显微镜观察瓶内的硫酸盐还原菌数量和形态。

4.结果与讨论通过本实验制备的硫酸盐还原菌测试瓶结构坚固，封装性好。

经过灭菌处理后，在测试瓶内培养硫酸盐还原菌，能正常生长和观察。

5.结论本实验制备的硫酸盐还原菌测试瓶具有结构坚固、封装性好的特点，可用于硫酸盐还原菌的检测。

第一篇：水质检测第一章：碎屑岩油藏注水水质推荐指标第一节：注水水质的基本要求在油田注水中水质必须符合以下几方面的要求1、水质稳定，与油层水相混不产生沉淀。

2、水注入油层后不使粘土矿物产生水化膨胀或悬浊。

3、水中不得携带大量悬浮物，以防堵塞注水井渗滤端面及渗流孔道。

4、对注水设施腐蚀性小。

5、当采用二种水源进行混合注水时，应首先进行室内实验，证实二种水的配伍性好，对油层无伤害才可注入。

6、评价注水水源，确定注水水质应按第二篇，第二章的要求进行。

第二节：推荐水质主要控制指标推荐水质主要控制指标见下表注：1、1≤n≤10。

2、清水水质指标中去掉含油量。

第三节：注水水质辅助性指标注水水质辅助性指标，包括溶解氧、硫化氢、侵蚀性二氧化碳、铁、ＰＨ值等。

规定注水水质辅助性指标主要是由于以下几方面的原因。

1、水质的主要控制指标已达到注水要求，注水又较顺利，可以不考虑辅助性指标，如果达不到要求，为查其原因可进一步检测辅助性指标。

2、采出水中溶解氧浓度最好是小于0.05mg/L，不能超过0.10mg/L。

清水中的溶解氧要小于0.50 mg/L。

3、侵蚀性二氧化碳含量等于CaCO3达到溶解平衡所需的量时此水稳定；大于溶解平衡所需的量时此水可溶解碳酸钙并对注水设施有腐蚀作用；小于溶解平衡所需的量时有碳酸盐沉淀出现。

4、系统中硫化物增加是细菌作用的结果。

硫化物过高的水也可导致水中悬浮物增加。

清水中不应含硫化物，油层采出水中硫化物浓度应小于2.0mg/L。

5、水的ＰＨ值应控制到7±0.5为宜。

6、水中含亚铁时，由于铁细菌作用可将二价铁转化为三价铁而生成氢氧化铁沉淀。

当水中含硫化物（Ｓ２－）时，可生成ＦeＳ沉淀，使水中悬浮物增加。

第四节：标准分级及使用说明1、从油层的地质条件出发，将水质指标按渗透率小于0.1、0.1~0.6、大于0.6um2分为三类。

由于目前水处理站的工艺条件和技术水平有差异，对标准的实施有困难，所以又将每类标准分３级要求。

第3卷第3期2007年6月南　方　水　产South China Fisheries ScienceVol 13,No 13Jun 1,2007收稿日期:2006205219;修回日期:2006211207资助项目:科技部社会公益研究专项(2000D I B 50175)作者简介:胡德蓉(1982-),女,硕士研究生,从事海洋渔业资源与生态环境研究。

E 2mail:xiaohu458@hot m ail 1com 通讯作者:林钦,E 2mail:linqinscs@21cn 1com・综述・硫酸盐还原菌(S RB )的生态特性及其检测方法研究进展胡德蓉1,2,林　钦1(11农业部渔业生态环境重点开放实验室,中国水产科学院南海水产研究所,广东广州510300;21上海水产大学,上海200090)摘要:文章从碳源、氮源利用以及溶解氧、pH 值、温度和其它环境因子对其影响等方面综述了环境中硫酸盐还原菌(SRB )的生态特性,重点介绍了S RB 的检测方法,并讨论了各种检测方法的优缺点,以及随着科学技术和实验条件的进步对各种检测方法的改进。

另外还介绍了SRB 对水产养殖业发展所造成的危害。

关键词:硫酸盐还原菌(SRB );生态特性;检测方法中图分类号:Q93919 文献标识码:A文章编号:1673-2227-(2007)03-0067-06Detecti on and ecology character isti c of sulfate 2reduci n g bacter i aHU Der ong1,2,L I N Q in1(11Key L ab 1of M arine Fishery Ecology Environm ent and Pollution M onitoring &Control Techniques ;South ChinaSea F isheries R esearch Institute,Chinese A cade m y of Fishery Sciences,Guangzhou 510300,China;21Shanghai Fishery U niversity,Shanghai 200090,China )Abstract:This paper revie wed the ecol ogy characteristic of sulfate 2reducing bacteria (SRB )in the envir on ment fr om carbon s ource,nitr ogen s ource,oxygen,pH value,te mperature and other fact ors 1It als o e mphasized on the detecti on of SRB,and discussed the ad 2vantage of each detecti on method,and intr oduced the i m p r ove ment of detecti on method with the devel opment of technol ogy and experi 2mental con 2diti on 1I n additi on,the har m of S RB t o aquaculture devel opment was described 1Key words:sulfate 2reducing bacteria (SRB );ecol ogy characteristic;detecti on technique 硫酸盐还原菌(sulfate 2reducing bacteria,SRB )是生态系统中土著微生物类群,是一类形态各异、营养类型多样、能利用硫酸盐或者其它氧化态硫化物作为电子受体来异化有机物质的微生物,在其代谢活动中,除CO 2和水外,还产生高浓度的H 2S 为呼吸终产物[1-5]。

硫酸盐还原菌( Sulfate-Reducing Bacteria,简称SRB) 是一种厌氧的微生物；广泛存在于土壤、海水、河水、地下管道以及油气井等缺氧环境中。

在伯杰细菌鉴定手册第九版中SRB被归纳到第7类群中，有4组14个属。

早在1924年，BENGOUGH和MAY 就认为SRB产生的H2S对埋在地下的铁构件的腐蚀起着重要作用，1934年，荷兰学者库尔和维卢特提出了SRB对金属腐蚀作用的机制；随后，邦克（1939）、HEDELAI （1940）、史塔克和威特（1945）也证实腐蚀的主要细菌有铁细菌（好氧）和SRB(厌氧)，土壤中钢铁的腐蚀主要是后者[2]。

研究表明在无氧或极少氧情况下,它能利用金属表面的有机物作为碳源,并利用细菌生物膜内产生的氢,将硫酸盐还原成硫化氢,从氧化还原反应中获得生存的能量[3]。

根据硫酸盐还原菌的生长繁殖条件、腐蚀活动机制和作用对象等因素,SRB 腐蚀的防治可以分为物理方法、化学方法、阴极保护方法、微生物保护方法和防腐材料保护方法等几种[4]。

但上述一些方法不是杀菌效率降低、就是花费较为昂贵。

而且像某些化学方法(杀菌剂)的使用，也给环境治理带来新的负担。

随着人们环保意识日益加强，研制和开发新的高效环保型防治方法就显得尤为重要，防止SRB腐蚀已是腐蚀科学和微生物学共同关注的课题。

一些防腐专家认为从环境的角度考虑，SRB的防治有必要从微生物学自身去寻找新的方法。

SRB-HX型硫酸盐还原菌测试瓶1.范围本标准规定了油田注入水用SRB-HX型硫酸盐还原菌测试瓶的技术要求、检测和试验方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存。

本标准适用于SRB-HX型硫酸盐还原菌测试瓶的质量检验。

2.引用标准下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版本均不适用于本标准。

凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 14643.5 工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定MPN法SY/T 0532 油田注入水细菌分析方法绝迹稀释法3.定义本标准采用以下定义：MPN法即最可能数法。

最可能数法的原理是将同一水样的几份试样或水样的稀释液接种于培养基中。

假设在培养过程中，接种的一个或多个微生物将表现出具有特征变化或非特征变化的生长。

如果这些培养基出现阴性结果，那么，在一特定体积的样品内，有机体的最可能数（MPN数）可以从阳性结果的数量分布来估测。

4.技术要求SRB-HX型硫酸盐还原菌测试瓶的技术指标应符合表1的技术要求。

表1 SRB-HX型硫酸盐还原菌测试瓶指标项目技术指标培养基外观无色、淡黄色透明溶液pH值7.0～7.5培养基体积（mL) 8.8～9.2精密度同一样品进行平行测定，结果误差不大于±5%5.检测和试验方法5.1试验用设备和器材a) 75%酒精溶液；b) 无菌注射器，1mL；c) 恒温培养箱，工作温度30℃～37℃，控温精度土2℃d）精密pH试纸，范围4.6～8.0；e）量筒，10mL。

5.2培养基外观检查取多个测试瓶，采用目视法观察其颜色。

5.3 pH值测定取多个测试瓶，任取一个打开后，用精密pH纸测定pH值，应重复测量3次，以平均值为准。

5.4培养基体积测定取多个测试瓶，任取一个打开后，将培养基全部倒入10mL量筒中，读出体积测量结果。

应重复测量3次，以平均值为准。

5.5精密度测定同一操作者在同一实验室连续时间内，按以下方法对同一样品进行硫酸盐还原菌总数平行测定，计算其结果误差。

硫酸盐还原菌（SRB）⽣存条件及危害硫酸盐还原菌（SRB）⽣存条件及危害这是—种在厌氧条件下使硫酸盐还原成硫化物的细菌。

它们以有机物为营养源，⼴泛存在于污⽔中缺氧的地⽅以及⼟壤中。

因此，凡是⼟壤中埋设管线、地下油⽔井、污⽔处理系统中缺氧的部位，都可能受到硫酸盐还原菌的危害。

(1)硫酸盐还原菌的⽣长条件硫酸盐还原菌严格厌氧，所以当它⽣长繁殖时，要求较低的氧化还原电位，且氧化还原电位越低，其繁殖速度越快。

油⽥⽔中最常见的且对腐蚀影响较严重的硫酸盐还原菌是去磺弧菌．其⽣长温度属于中温性，30—35℃为最适温度，⾼于45℃则停⽌⽣长。

在油⽥⽔中最适宜的⽣长温度范围为20⼀40℃。

去磺弧菌⽣长的pH值范围很⼴，则⼀般在5．5—9．0之间都可⽣长，最适宜的PH值为7．0⼀7．5。

去磺弧菌所需营养物⼩，除⼀般细菌要求的Na 、K 、Mg2、Ca2、SO4—、CL—、CO3-、H2PO4—、NH4外，还要求铁的存在。

其⽣长繁殖时为了构成菌体，要⽐其他细菌多固定2—3倍的CO2。

需要的有机碳素化合物中以醉母汁最为有效，⽽作为能源利⽤的碳素源最好是乳酸盐。

(2)硫酸盐还原菌的危害在⽆氧的中性环境中，钢铁的腐蚀是很微弱的，因为这种环境⼀般对阴极去极化是不利的。

但由于硫酸盐还原菌的存在、使这种环境中的腐蚀很严重、这是因为硫酸盐还原菌起了阴极去极化的作⽤，加速⼚腐蚀过程。

近年来的研究认为，硫酸盐还原菌腐蚀主要还是由于氢化酶的作⽤，有些细菌中的氢化酶可以把氢直接氧化成⽔，⽽硫酸盐还原菌的氢化酶可在⾦属表⾯上的阴极部位把硫酸根⽣物催化成硫离⼦和初⽣态氧，初⽣态氧在阴极使吸附于阴极表⾯的氢去极化⽽⽣成⽔，因此去极化剂并不是细菌，⽽是初⽣态氧。

杀菌剂、防腐剂、防霉剂、消毒剂、抗菌剂联系⼈：宋先⽣电话133********。

第36卷第3期2019年9月25日油田化学Oilfield ChemistryVol.36No.325Sept，2019文章编号：1000-4092（2019）03-456-03细菌瓶法用于反硝化菌菌量的测定*易绍金，邢燕青，余灿（长江大学化学与环境工程学院，湖北荆州434023）摘要：在微生物采油（MEOR ）研究、菌液产品质量检测、现场试验监控及环保领域，采用费时费事的最大概率数法（MPN 法）测定反硝化菌（DNB ）菌量。

为了更简便准确的测定DNB 的菌量，推荐使用含碳源、氮源、磷源及化学脱氧剂等培养液的DNB 专用测试瓶。

结果表明，将欲测水样注入测试瓶逐级稀释，并在30℃培养5d 后，培养液变浑浊并出现气泡表示有DNB 菌生长。

DNB 的计数按常规细菌瓶法进行。

用该细菌瓶法测定了某油田采出液、生物抑菌剂及微生物清防蜡菌剂中DNB 菌数，所得结果与MPN 法基本相同。

与传统的MPN 法相比，细菌瓶法具有生长指示明显、操作简单和工作效率高等优点。

表4参17关键词：反硝化菌（DNB ）；菌量；细菌瓶法；最大概率数法；微生物采油中图分类号：TE357：Q93-332文献标识码：ADOI：10.19346/ki.1000-4092.2019.03.014*收稿日期：2018-09-27；修回日期：2018-12-21。

基金项目：国家自然科学基金“油藏条件下微生物与原油的相互作用研究”（项目编号51474034）。

作者简介：易绍金（1963-），男，教授，1984年毕业于同济医科大学环境微生物专业，从事石油与环境微生物学和油气田环境保护教学与科研工作，通讯地址：434023湖北荆州长江大学化学与环境工程学院，E-mail ：759531738@ 。

反硝化菌（denitrifying bacteria ，简称DNB ）是一群能在厌氧条件下将硝酸盐还原成亚硝酸盐进而还原成氮气的一类细菌的总称［1-4］。

ICSQ/SY DQ0605-2006代替Q/SY DQ0605-2000大庆油田油藏水驱注水水质指标及分析方法Indexes and analytical method of injected water quality in reservoir water flooding in daqing oil field2006-05-30 发布2006-06-30 实施中国石油天然气股份有限公司大庆油田有限责任公司发布中国石油天然气股份有限公司企业标准大庆油田有限责任公司前言本标准代替Q/SY DQ0605-2000《大庆油田油藏水驱注水水质指标及分析方法》。

本标准与Q/SY DQ0605-2000相比主要变化如下：——修改了Q/SY DQ0605-2000中不含聚合物注入水水质控制指标；——修改了Q/SY DQ0605-2000中含聚合物注入水水质控制指标。

本标准内有关信息是保密的，其版权属于大庆油田有限责任公司（以下简称油田公司）所有。

未经油田公司质量安全环保部的许可，该标准的任何一部分均不得泄露给第三方，或复制、或储存于可检索系统，也不允许以任何形式或任何方法（电、机械复制、抄录）传播……。

标准使用的管理权属油田公司，用户分两类：a) 油田公司和所属单位在其管理、科研、生产和经营活动中有权使用本标准；b）承包商/分包商、制造厂/供方，以上述第一类组织的名义，为达到下述目的也可被授权使用本标准：——为项目做准备或被授权使用本标准；——确实为这些组织执行任务。

本标准的提供程序是在获得充分的保密保证后才予以提供，并且是永不更改的须知程序，被授权使用本标准的单位，有责任安全保管并保证标准不被用于油田公司之外的目的。

油田公司将寻访这些组织，以确认他们是如何执行这些要求的。

本标准由大庆油田有限责任公司开发部提出。

本标准由大庆油田有限责任公司批准。

本标准由大庆油田有限责任公司开发地质专业标准化技术委员会归口。

对返排液杀菌效果的测试方法实验原理：推测返排液主要的细菌为硫酸盐还原菌、铁细菌和腐生菌。

通过加入不同杀菌剂，测量加入前后细菌含量，得出不同杀菌剂的杀菌率，优选效果最好的杀菌剂。

实验仪器：1)硫酸盐还原菌（SRB）测试瓶；2)铁细菌（IB）测试瓶；3)腐生菌（TGB）测试瓶；4)注射器：1ml；5)恒温培养箱；6)电热消毒器。

实验步骤：1)将测试瓶排成两组，并编号；这是二次重复法，三次重复法方法类似，不过要把测试瓶分为三组。

2)用120℃消毒20min的无菌注射器取1.0ml水样注入第一组1号瓶内，充分震荡；3)用另一只无菌注射器从第一组1号瓶中取1.0ml水样注入第一组2号瓶；4)再更换无菌注射器从第一组2号瓶取1.0ml水样注入第一组3号瓶；5)以此类推一只稀释到最后一瓶为止。

根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；6)将杀菌剂加入到所测试的水样，用无菌注射器去1.0ml杀菌后的水样注入到第二组1号瓶内；7)用另外一只无菌注射器从第二组1号瓶去1.0ml水样注入第二组2号瓶；8)以此类推。

根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；9)将上述测试瓶放入放入恒温培养箱中培养，温度控制在37℃，7d后读数；10)用下列公式计算杀菌率：×100%Y=B1−B2B1Y——杀菌剂的杀菌率，%；B1——加杀菌剂前水样中细菌含量，个/ml;B2——加杀菌剂后水样中细菌含量，个/ml。

备注：一、注意事项1)SRB测试瓶变黑或者有黑色沉淀，表示有硫酸盐还原菌；TGB测试瓶由红变为黄或浑浊，表示有腐生菌；IB测试瓶出现棕红色沉淀，表示有铁细菌。

2)杀菌剂的加量为50mg/L;3)在室温下向水样注入杀菌剂，杀菌时间为4h；4)腐生菌的培养时间是5d~7d；铁细菌的培养时间是7d~14d，硫酸盐还原菌的培养时间是14d~21d。

5)测试瓶大概为3元/瓶。

二、读数方法：1.生长指标的确定原则：1)全部呈阳性反应的最后一列平行样应为生长指标的第一位数。