HPLC

２０１５年５月　第ｌ７卷第５期　中国现代中药Ｍｏｄｅｍ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｍａｙ　２０１５　Ｖｏ１．１７　Ｎｏ．５　

・中药工业・　

ＨＰＬＣ同时测定羊藿三七胶囊中朝藿定Ｃ和　

淫羊藿苷的含量　

汪杨丽　，邓开英，郑小平，杨帆　

（重庆市食品药品检验检测研究院重庆　药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆４０１１２１）　

［摘要］　目的：建立同时测定羊藿三七胶囊中朝藿定Ｃ和淫羊藿苷含量的高效液相色谱法。方法：采用Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ，。柱（１５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５　Ｉｘｍ）；流动相为乙腈－０．０５％磷酸溶液（２６：７４）；流速为１．０　ｍＬ・ｍｉｎ～；检测波长为　

２７０　ｎｍ。结果：朝藿定Ｃ进样量在０．２８８～９．１９８　Ｉｘｇ、淫羊藿苷进样量在０．１１１～３．５５８　ｇ与峰面积呈良好的线性关　系（ｒ＝０．９９９　９）；朝藿定Ｃ的平均回收率为１０３．０％，ＲＳＤ＝０．８％（ｎ＝６）；淫羊藿苷的平均回收率为９８．９％，　ＲＳＤ＝１．８％（ｎ＝６）。结论：本方法简便、准确，重复性好，可作为羊藿三七胶囊中淫羊藿的含量测定方法。　

［关键词］　高效液相色谱法；羊藿三七胶囊；朝藿定Ｃ；淫羊藿苷　

Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｐｉｍｅｄｉｎ　Ｃ　ａｎｄ　Ｉｃａｒｉｉｎ　ｉｎ　Ｙａｎｇｈｕｏ　Ｓａｎｑｉ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　

ＷＡＮＧ　Ｙａｎｇｌｉ　，ＤＥＮＧ　Ｋａｉｙｉｎｇ，ＺＨＥＮＧ　Ｘｉａｏｐｉｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｆａｎ　（Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｆｏｒ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　ａｎｄ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０１　１２１，Ｃｈｉｎａ）　

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｆｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｐｉｍｅｄｉｎ　Ｃ　ａｎｄ　ｉｅａｒｉｉｎ　ｉｎ　

Ｙａｎｇｈｕｏ　Ｓａｎｑｉ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｏｎ　Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８　ｃｏｌｕｍｎ（１５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５　ｍ）ｂｙ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－０．０５％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（２６：７４）ａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１．０　ｍＬ・ｍｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　２７０　ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．２８８—９．１９８　ｇ（ｅｐｉｍｅｄｉｎ　Ｃ），　

０．１１１－３．５５８　ｇ（ｉｃａｒｉｉｎ）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｓｅ（ｎ＝６）ｗｅｒｅ　１０３．０％（ＲＳＤ＝０．８％），９８．９％（ＲＳＤ＝１．８％），　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ｗｉｔｈ　ｇｏｏｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｐｉｍｅｄｉｉ　Ｆｏｌｉｕｍ　ｉｎ　ＹａｎｇｈＵＯ　Ｓａｎｑｉ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ．　［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ＨＰＬＣ；Ｙａｎｇｈｕｏ　Ｓａｎｑｉ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ；ｅｐｉｍｅｄｉｎ　Ｃ；ｉｃａｒｉｉｎ　

ｄｏｉ：１０．１３３１３／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４８９０．２０１５．５．０１７　

羊藿三七胶囊由淫羊藿、三七两味中药加工制　

成，具有温阳通脉，化淤止痛的功能　。用于阳虚　

血瘀所致的胸痹，症见胸痛、胸闷、心悸、乏力、　

气短等。《中华人民共和国药典》２０１０版中淫羊藿　

的药用部位由２００５版中的地上部分修订为叶　。　。　

有研究表明　刮淫羊藿的叶中总黄酮含量高于淫羊藿　

的茎。淫羊藿总黄酮的主要成分为朝定藿的淫羊藿　

苷。淫羊藿总黄酮的主要有效成分是朝藿定Ｃ和淫　

羊藿苷　Ｊ，多数淫羊藿药材中朝藿定Ｃ含量较高，　

而淫羊藿苷的含量较低　，　。仅以淫羊藿苷作为其质　

量控制指标不尽合理，本文建立一种以朝藿定Ｃ和　淫羊藿苷为双检测指标的高效液相色谱测定法，以　

期为羊藿三七胶囊质量标准的完善提供参考。　

１仪器与试药　

１．１仪器　

Ｗａｔｅｒｓ　２６９５高效色谱系统；Ｗａｔｅｒｓ　２４８９检测　

器；Ｅｍｐｏｗｅｒ色谱工作站。　

１．２试药　

淫羊藿苷对照品（中国食品药品检定研究院，　批号：１　１０７３７－２００４１５）；朝藿定Ｃ对照品（成都　

曼斯特生物科技有限公司，批号：ＭＵＳＴ一　

［通信作者】　汪杨丽，硕士，主管中药师，研究方向：中药分析；Ｔｅｌ：（０２３）８６０７２７５３，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇｙａｎｇｌｉ２７＠１６３．ｃｏｎ　

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　２０１５年５月　第１７卷第５期　中国现代中药Ｍｏｄｅｍ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｍａｙ　２０１５　Ｖｏ１．１７　Ｎｏ．５　

１３１２２３１２，纯度９８．１７％）；羊藿三七胶囊（重庆　

三峡云海药业公司，批号分别为Ａ０６０１，ＡＩ２０１，　

Ａ１２０２，ＢＯＩＯ１）；乙腈为色谱纯；水为纯化水；　

其余试剂为分析纯。　

２方法与结果　

２．１对照品溶液的制备　

精密称取朝藿定ｃ对照品和淫羊藿苷对照品适　

量，加甲醇制成质量浓度分别为１．８３９　７、　

０．７１１　６　ｍｇ・ｍＬ　的单一成分对照品储备液。　

２．２供试品溶液的制备　

取羊藿三七胶囊装量差异项下羊藿三七胶囊的　

内容物，混匀，取约０．５　ｇ，精密称定，置具塞锥形　

瓶中，精密加入稀乙醇５０　ｍＬ，密塞，称定重量，　

超声（功率：５００　ｗ，频率：４０　ｋＨｚ）处理１　ｈ，放　

冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，　

滤过，取续滤液，即得。　

２．３色谱条件　

Ａｇｉ］ｅｎｔ　Ｃｌ８色谱柱（１５０　ｍｍ×４．６　ＩＴｌｎｌ，５　ｍ）；　

流动相为乙腈－０．０５％磷酸溶液（２６：７４）；柱温为　

３０　ｏＣ；流速为１．０　ｍＬ・ｒａｉｎ～；检测波长为２７０　ｎｍ；　

进样量为１Ｏ　Ｌ。　

２．４阴性对照溶液的制备　

取按处方及工艺制备的缺淫羊藿阴性对照品　

０．５　ｇ，照２．２项下的供试品制备方法处理，制成缺　

淫羊藿阴性对照溶液。　

２．５专属性试验　

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性　

对照溶液各１０　，注入色谱仪，按２．３项下色谱条　

件进行测定，记录色谱图，在与朝藿定Ｃ和淫羊藿　

苷对照品相应的保留时间处没有色谱峰，说明阴性　

对照溶液无干扰，见图１。　

２．６线性关系考察　

精密吸取朝藿定Ｃ、淫羊藿苷对照品储备液各　

２．５　ｍＬ（质量浓度分别为１．８３９　７、０．７１１　６　ｍｇ・ｍＬ　），　

置５　ｍＬ量瓶中，摇匀，即得混合对照品溶液。逐级　

稀释，得质量浓度分别为０．９１９　８、０．４５９　９、０．２３０　０、　

０．１１５　０、０．０５７　５、０．０２８　８　ｍｇ・ｍＬ　朝藿定Ｃ与质　

量浓度分别为０．３３５　８、０．１７７　９、０．０８９　０、０．０４４　５、　

０．０２２　２、０．Ｏ１１　１　ｍｇ・ｍＬ　淫羊藿苷的混合对照品溶　

．４８６・　一ｏ．５　０．４　０＿３　０．２　０．１　０　

ｏ．５　《０．４　０＿３　Ｏ．２　０．１　０　

０．５　Ｏ．４　Ｏ．３　Ｏ．２　Ｏ　１　０　ｏ　２　４　６　８　ｌＯ　１２　１４　１６　１８　２０　ｔ／ｍｉｎ　

注：Ａ．对照品；Ｂ．供试品；Ｃ．阴性样品；　１．朝藿定Ｃ；２．淫羊藿苷。　图１朝藿定ｃ和淫羊藿苷ＩｔＰＬＣ图　

液。精密吸取上述混合对照品溶液各１Ｏ　注入高　

效液相色谱仪，按２．３项下的色谱条件测定，记录　

峰面积。用最小二乘法进行线性回归，得回归方程，　

朝藿定Ｃ：Ｙ：２×１０。Ｘ一２２５　１３７，ｒ＝０．９９９　９；淫羊　

藿苷：Ｙ＝２×１０。　一１２６　８７８，ｒ＝０．９９９　９。结果表　

明，朝藿定Ｃ和淫羊藿苷在０．２２８～９．１９８　ｇ、　

０．１１１—３．５５８　ｇ与峰面积呈良好的线性关系。　

２．７精密度试验　

精密吸取质量浓度为０．４５９　９　ｍｇ・ｍＬ　朝藿定Ｃ　

和质量浓度为０．１７７　９　ｍｇ・ｍＬ　淫羊藿苷的混合对照　

品溶液１０　，连续进样６次，测定峰面积。计算朝　

藿定Ｃ和淫羊藿苷峰面积的ｔｔＳＤ均为０．３％。　

２．８重复性试验　

取同批样品（批号：Ｂ０１０１），按２．２项下的方　

法制备６份供试品溶液，计算含量。结果朝藿定Ｃ　

平均含量为１２．０　ｍｇ／粒，ＲＳＤ为０．４％；淫羊藿苷　

平均含量为４．４　ｍｇ／粒，ＲＳＤ为１．３％。　

２．９稳定性试验　

取同一供试品溶液（批号：ＢＯＩＯ１），分别于０、　

２、４、６、８、１０　ｈ进样１Ｏ　Ｌ，测定峰面积，结果朝　２０１５年５月第１７卷第５期　中国现代中药Ｍｏｄｅｒｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　

藿定Ｃ和淫羊藿苷峰面积的ＲＳＤ分别为０．２％、　

０．９％，表明样品溶液在１０　ｈ内稳定。　

２．１Ｏ加样回收率试验　

精密吸取２．１项下的朝藿定Ｃ对照品溶液　

５．３　ｍＬ、淫羊藿苷对照品溶液５．４　ｍＬ，同时置６个　具塞锥形瓶中，溶剂蒸干，精密称取已测定含量的　

样品（批号：Ｂ０１０１）０．２５　ｇ，共６份，分别加入上述　

具塞锥形瓶中。按２．２项下的方法制备供试品溶液，　

测定朝藿定Ｃ和淫羊藿苷的含量，计算平均回收率，　

见表１。　

表１　回收率试验结果（ｎ＝６）　

２．１１耐用性试验　

采用Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００色谱仪、Ｗａｔｅｒｓ　Ｃｌ８（１５０　ｍｍ　Ｘ　

４．６　ｍｍ，５　ｍ）和Ｗａｔｅｒｓ　２６９５色谱仪、Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃｌ８　

（１５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５　ｍ），按２．３项下谱条件分别　

测定同批样品（批号：Ｂ０１０１），结果显示：供试品　

溶液均得到很好地分离，朝藿定Ｃ的含量分别为　

１２．０３、１１．９９　ｍｇ／粒，淫羊藿苷的含量分别为４．４９、　

４．４４　ｍｇ／粒。　

２．１２样品测定　

取４批羊藿三七胶囊（批号分别为Ａ０６０１，　

Ａ１２０１，Ａ１２０２，Ｂ０１０１），按２．２项下方法制备供试　

品溶液，按２．３项下色谱条件测定，结果见表２。　

表２样品测定结果　（ｍｇ／粒）　３讨论　

３．１参考文献　川试验中比较了甲醇、５０％甲醇、乙　

醇、稀乙醇４种提取溶剂，提取时间分别考察了２０、　

４Ｏ、６０、８０　ｍｉｎ。结果表明，稀乙醇超声处理１　ｈ的　

提取效果好。试验又考察了稀乙醇超声提取１　ｈ和　

原标准的甲醇索氏提取４　ｈ两种方法，结果表明２种　

方法提取效率均可，但超声提取操作相对简单、　

快捷。　

３．２试验曾选用了乙腈．水、乙腈　１％冰醋酸¨　、乙　

腈＿Ｉ）．０５％磷酸等流动相，结果乙腈一水系统使样品中　

淫羊藿苷的保留时间不稳定；与乙腈一１％冰醋酸相　

比，乙腈－０．０５％磷酸系统中朝藿定Ｃ和淫羊藿苷２　

个色谱峰的分离效果更好，且保留时间适宜。　

３．３　４批羊藿三七胶囊中朝藿定ｃ含量基本比淫羊　

藿苷含量高一倍，印证了朝藿定Ｃ是淫羊藿总黄　

酮类的主要有效成分之一，初步认定以朝藿定ｃ　

和淫羊藿苷的总量评价该制剂中淫羊藿的质量更　

合理。　

（下转第４９６页）　

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