结核分枝杆菌FurB(Zur)研究进展
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结核分枝杆菌分子生物学研究的现状及展望
实用医学杂志2010年第26卷第23期doi：10．3969／j．issn．1006-5725.2010.23.003作者单位：100091北京市，解放军第309医院全军结核病研究所·专题笔谈·结核病是发展中国家较为严重的传染病之一，我国结核病疫情和耐药情况相当严重。
自柯赫发现结核分枝杆菌以来，科学界一直将有效疫苗、药物和诊断技术作为其研究的重要目标，目前又面临耐多药结核病（MDR－TB）、结核病与HIV双重感染等新难题。
分子生物学的诞生与迅猛发展，使我们从分子水平上研究和认识结核分枝杆菌（M．tb）的遗传本质，通过揭示核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用，拓展了结核病的研究领域。
随着M．tb基因组的破译，先进的分子生物学方法的建立，耐药分子机制的阐明，新药物分子靶位的探索，M．tb 特异性分子标记物的确定，致病机制和保护性机制的认识，新疫苗的构建，将为结核病的防治提供有力的新武器。
1M．tb分子生物学研究的现状［1］1．1基因组学的研究［2－3］M．tb H37Rv、CDC1551菌株全基因组测序的完成成为M．tb研究的又一里程碑，标志着M．tb 的研究进入一个崭新的后基因组研究阶段。
H37Rv全基因组序列约4411529bp，4000个基因，G＋C含量较高（平均65．6％），其基因序列高度保守。
3924个可读框（ORF）中参与脂类代谢、细胞壁合成187个，细胞壁代谢360个，脂类合成66个，能量代谢287个，氨基酸合成95个，毒力38个，DNA合成69个，约10％编码两大类不相关的富含甘氨酸的酸性蛋白。
所编码的蛋白约40％有功能，44％可能有功能，而16％是首次发现的。
通过蛋白质组学的研究又发现了一些基因组中不存在的新基因，进一步补充和验证了基因组学的研究。
M．tb不同菌株之间存在多个差异基因，牛结核分枝杆菌缺失11个区段；而卡介苗（BCG）共缺失了16个区段（命名为RD1-RD16），比较基因组学的研究发现了一些M．tb毒力相关基因。
结核分支杆菌耐药性快速检测的研究进展
一
近 年来从 分 子生 物学 水 平研 究 发现 ，结 核 分支
杆 菌 耐异 烟 肼 （Ｎ 氢 酶一过 氧 化物 酶 的编 码基 因 Ｉ Ｈ）
（ａ ） 或 ） ｋｔ 和（ 参与分支菌酸生物合成 的烯酞基还原 Ｇ 酶 编码 基 因 （ ｈ ｉ Ａ）改变 及 烷基 过 氧化 氢酶 的 编码 ｍ
基 因（ｈＣ） 关 ４结 核分 支杆 菌耐利 福平 （ Ｆ ） ａｐ 有 】 。 Ｒ Ｐ 是 由于其 作 用 于靶 分 子 Ｒ Ａ 多 聚酶 的 Ｂ亚 单位 编 Ｎ 码 基 因 （ｐＢ 突 变所 致 ６ ｒｏ ） ］ 。耐药 结 核 菌 ｒｏ ｐＢ基 因
９． ％和 ９％圊 ５１ ７ ０ 。有 人构建了另一类 噬菌体 ， 并建立 了 噬 菌 体 生 物 扩 增 试 验 （ｈｇａ ｉｅ ｉｏｉａｙ ｐ ａｅｍｐｌ ｄｂｏ ｇ ｌ ｔ ｆ ｌ ｃｌ
的治疗方案 ， 判断治疗是否失败并产生耐药性 ， 也便
于进 行 较大 规模 的结 核 分支 杆菌 耐 药性 调查 。近 几 年耐 药性 快速 检测取 得 了很 大进展 ， 现综 述 如下 。
核 分支杆 菌对 Ｒ Ｐ耐 药性 。Ｐ Ｒ— Ｓ Ｐ技 术是快 速 Ｆ Ｃ ＳＣ 检 测基 因突 变的重要 方法 之一 ，已成 功 地应用 于结 核 分支杆 菌 ｒｏ 、ａＧ及 ａ ｐ ｐ Ｂ ｋｔ ｈ Ｃ基 因突变 的检测 。利
３ 聚合酶链反应一 单链构 象多态性分析 （ ｉｇｅｓｒ ｎ ｏ ｐ ｓ ａ ｌ ｓｓ ｏ ｌ ｏ ｏｒ ｔｏ ｏｌ ｍ ｒ ｈｉｍ ｎａ ｙ ｉ ｆｐｏｙｍｅ ａ ｅ ｒ ｓ
将重组结核分支杆菌噬菌体和发光 自显影联合使 用， 可用于结核分支杆菌的快速药 敏试验。其检验基础
杆菌的数量进行定量 。由于噬菌体仅在 活菌 中方可增
近 年来从 分 子生 物学 水 平研 究 发现 ，结 核 分支
杆 菌 耐异 烟 肼 （Ｎ 氢 酶一过 氧 化物 酶 的编 码基 因 Ｉ Ｈ）
（ａ ） 或 ） ｋｔ 和（ 参与分支菌酸生物合成 的烯酞基还原 Ｇ 酶 编码 基 因 （ ｈ ｉ Ａ）改变 及 烷基 过 氧化 氢酶 的 编码 ｍ
基 因（ｈＣ） 关 ４结 核分 支杆 菌耐利 福平 （ Ｆ ） ａｐ 有 】 。 Ｒ Ｐ 是 由于其 作 用 于靶 分 子 Ｒ Ａ 多 聚酶 的 Ｂ亚 单位 编 Ｎ 码 基 因 （ｐＢ 突 变所 致 ６ ｒｏ ） ］ 。耐药 结 核 菌 ｒｏ ｐＢ基 因
９． ％和 ９％圊 ５１ ７ ０ 。有 人构建了另一类 噬菌体 ， 并建立 了 噬 菌 体 生 物 扩 增 试 验 （ｈｇａ ｉｅ ｉｏｉａｙ ｐ ａｅｍｐｌ ｄｂｏ ｇ ｌ ｔ ｆ ｌ ｃｌ
的治疗方案 ， 判断治疗是否失败并产生耐药性 ， 也便
于进 行 较大 规模 的结 核 分支 杆菌 耐 药性 调查 。近 几 年耐 药性 快速 检测取 得 了很 大进展 ， 现综 述 如下 。
核 分支杆 菌对 Ｒ Ｐ耐 药性 。Ｐ Ｒ— Ｓ Ｐ技 术是快 速 Ｆ Ｃ ＳＣ 检 测基 因突 变的重要 方法 之一 ，已成 功 地应用 于结 核 分支杆 菌 ｒｏ 、ａＧ及 ａ ｐ ｐ Ｂ ｋｔ ｈ Ｃ基 因突变 的检测 。利
３ 聚合酶链反应一 单链构 象多态性分析 （ ｉｇｅｓｒ ｎ ｏ ｐ ｓ ａ ｌ ｓｓ ｏ ｌ ｏ ｏｒ ｔｏ ｏｌ ｍ ｒ ｈｉｍ ｎａ ｙ ｉ ｆｐｏｙｍｅ ａ ｅ ｒ ｓ
将重组结核分支杆菌噬菌体和发光 自显影联合使 用， 可用于结核分支杆菌的快速药 敏试验。其检验基础
杆菌的数量进行定量 。由于噬菌体仅在 活菌 中方可增
结核分枝杆菌抗原及其在结核病诊断中的研究进展
好转率提高，死亡率明显下降。
4．讨论中医认为脾胃为后天之本，为气血生化之源，而气与血是构成人体和维持人体生命活动的重要物质基础，它来源水谷，为水谷所化，人绝水谷则死。
气就是指脏器的功能活动，胃气是脾气和胃气的统称，人有胃气则生，无胃气则死，人以胃气为本，胃气的盛衰对疾病的预后具有决定性作用，也因而使顾护胃气成为中医临床上的重要治疗法则之一。
中医脾气和气血的关系十分密切，气为血之帅，血为气之母，与现代医学的血液一样，中医的血也含人体所需的营养物质，它循经脉运行全身。
血还必须在气的统摄下循经脉运行，如果气虚不能摄血，则血液就会溢出脉道而形成出血，此外热邪外迫，瘀血内阻等均可导致出血。
急性脑血管意外患者由于进食少或禁食后,水谷精微即断,精血无以产生和充血, 必致精血亏虚,精血为有形的阴质,阴虚则生内热，热邪迫血妄行；气血均为水谷化生，水谷既绝，气无以化，血无以统，就会溢出于经脉之外；气无以化则气虚，气虚则血瘀，瘀血内阻，逼血外溢亦为出血。
总之，从中医理论分析，应激性溃疡出血与胃气衰弱具有不可分的直接关系。
《内经》曰:人以水谷为本,故人绝水谷则死。
谷不入半日则气衰，一日则气少矣。
因而我们认为禁食是导致胃气衰败的主要原因之一。
因而保得一分胃气，便有一分生机。
方参、术、苓、山药等健脾益气，三七粉止血活血,可去瘀血生新血；少量佐大黄可通腑降浊，通过上述健脾益胃不但对已发生应激性溃疡的患者有以显治疗作用，还可预防应激性溃疡的发生，从而降低中风患者因发生应激性溃疡的死亡率，说明顾护胃气在急性脑血管意外病人的治疗中占有重要的地位，值得临床借鉴。
结核分枝杆菌抗原及其在结核病诊断中的研究进展王 霖(昆明市第三人民医院<昆明结核病防治院> 云南昆明 650301)【中图分类号】R825.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）28-0079-02【摘要】 本文选取2011年5月—2012年5月由某地肺科医院、结核病防治机构等提供的临床上确认为结核病和非结核病患者，以及从社会上招募而来的健康志愿者，共计720例作为研究对象。
结核分枝杆菌FurB基因真核表达质粒的构建及表达
结核分枝杆菌FurB基因真核表达质粒的构建及表达姜泓;高雪;张海;李元;徐志凯;薛莹【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2005(021)011【摘要】目的构建结核分枝杆菌铁调控基因furB真核表达载体.方法以BamHⅠ和HindIII双酶切pQE-80L-furB获得furB基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),重组质粒酶切鉴定后以阳离子聚合物转染COS-7细胞, 分别以RT-PCR方法检测mRNA表达和间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达.结果构建了重组质粒pcDNA3.1(-)-furB,RT-PCR结果证明furB可在COS-7细胞中转录,用间接免疫荧光检测,显示COS-7细胞内有FurB蛋白的表达.结论成功构建了结核分枝杆菌furB基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-furB, furB基因可以在COS-7细胞中表达.【总页数】3页(P958-960)【作者】姜泓;高雪;张海;李元;徐志凯;薛莹【作者单位】第四军医大学微生物学教室;第四军医大学微生物学教室;第四军医大学微生物学教室;第四军医大学微生物学教室;第四军医大学微生物学教室;第四军医大学微生物学教室【正文语种】中文【中图分类】R378.91【相关文献】1.结核分枝杆菌Rv1009基因真核表达质粒的构建及表达 [J], 薛莹;柏银兰;高辉;王丽梅;徐志凯2.结核分枝杆菌Rv2389基因真核表达质粒的构建及表达 [J], 薛莹;柏银兰;高辉;王丽梅;徐志凯3.结核分枝杆菌Rv1884基因真核表达质粒的构建及表达 [J], 薛莹;柏银兰;高辉;王丽梅;徐志凯4.结核分枝杆菌Rv2450基因真核表达质粒的构建及表达 [J], 薛莹;柏银兰;高辉;王丽梅;徐志凯5.结核分枝杆菌CFP10基因真核表达质粒的构建及表达 [J], 李跃峰;张俊波;监通;贺志锐;王讲德;张辉;陈创夫;曹旭东因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
结核分枝杆菌的研究进展
结核分枝杆菌的研究进展摘要：结核分枝杆菌是一种引起人类结核病的病原菌，其致病机理也是与众不同的。
本文对结核分支杆菌的生物学特性、致病机理做了简单的介绍，并对结核杆菌与巨噬细胞的相互作用、结核杆菌耐药机制、抗结核药物等的最新研究进展做了小结。
关键词：结核分枝杆菌致病机制耐药抗结核药物Advances in the study of Mycobacterium tuberculosis Abstract Mycobacterium tuberculosis is a pathogen that can lead to Human tuberculosis and its its pathogenic mechanism is also different from many other.In this paper,we introduce the the biological characteristics and the pathogenic mechanism of Mycobacterium tuberculosis.Then we also make a summary of the research progressn of the interaction of Mycobacterium tuberculosis and macrophages,mechanisms of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis and some new Antituberculous drugs.Key words Mycobacterium tuberculosis; pathogenesis; Drug resistance; Antituberculous drugs一、结核分枝杆菌的生物学特性1、结核分枝杆菌的细胞结构结核分枝杆菌是一种抗酸阳性棒状杆菌，主要包括人型、牛型、非洲型和鼠型，其中对人致病的主要是人型结核菌。
结核杆菌的研究进展
创新技术应用
利用基因编辑、合成生物学等前沿技术，开发出 更加安全、有效的结核病疫苗。
个性化疫苗
根据不同人群的免疫特点和流行病学特征，开发 出更具针对性的个性化结核病疫苗。
05
结核杆菌的治疗方法和药物研究
传统治疗方法及其局限性
传统治疗方法
结核病主要通过使用抗生素进行治疗，如异烟肼、利福平、 乙胺丁醇等。
耐药性的机制和类型
耐药性机制
结核杆菌的耐药性机制主要包括药物 外排、药物作用靶点的改变、药物作 用机制的改变等。
耐药性类型
结核杆菌的耐药性主要分为单药耐药 和多药耐药，其中多药耐药是指结核 杆菌对多种药物同时产生耐药性。
耐药性的挑战和应对策略
耐药性的挑战
结核杆菌耐药性的挑战主要包括治疗难度增加、治疗费用增加、患者死亡率增 加等。
局限性
传统治疗方法的疗效受到药物耐药性的影响，部分结核病菌 株对现有药物产生抗药性，导致治疗失败。
新药研究进展和临床试验
新药研究
针对结核病的新型药物研究正在进行，包括新型抗生素、免疫疗法和疫苗等。
临床试验
新药在临床试验阶段，以评估其安全性和有效性，对抗耐药结核病菌株。
联合治疗和优化治疗方案
联合治疗
应对策略
针对结核杆菌耐药性的挑战，需要采取一系列应对策略，包括加强耐药性监测、 规范治疗和管理、加强疫苗接种等。
04
结核杆菌的疫苗研究
结核病疫苗的种类和特点
卡介苗（BCG）
是全球使用最广泛的结核病 疫苗，对儿童结核病有较好 的预防效果，但对成人结核 病预防效果有限。
重组蛋白疫苗
基于结核杆菌的抗原蛋白开 发的疫苗，具有良好的安全 性和有效性，但免疫原性相 对较弱。
利用基因编辑、合成生物学等前沿技术，开发出 更加安全、有效的结核病疫苗。
个性化疫苗
根据不同人群的免疫特点和流行病学特征，开发 出更具针对性的个性化结核病疫苗。
05
结核杆菌的治疗方法和药物研究
传统治疗方法及其局限性
传统治疗方法
结核病主要通过使用抗生素进行治疗，如异烟肼、利福平、 乙胺丁醇等。
耐药性的机制和类型
耐药性机制
结核杆菌的耐药性机制主要包括药物 外排、药物作用靶点的改变、药物作 用机制的改变等。
耐药性类型
结核杆菌的耐药性主要分为单药耐药 和多药耐药，其中多药耐药是指结核 杆菌对多种药物同时产生耐药性。
耐药性的挑战和应对策略
耐药性的挑战
结核杆菌耐药性的挑战主要包括治疗难度增加、治疗费用增加、患者死亡率增 加等。
局限性
传统治疗方法的疗效受到药物耐药性的影响，部分结核病菌 株对现有药物产生抗药性，导致治疗失败。
新药研究进展和临床试验
新药研究
针对结核病的新型药物研究正在进行，包括新型抗生素、免疫疗法和疫苗等。
临床试验
新药在临床试验阶段，以评估其安全性和有效性，对抗耐药结核病菌株。
联合治疗和优化治疗方案
联合治疗
应对策略
针对结核杆菌耐药性的挑战，需要采取一系列应对策略，包括加强耐药性监测、 规范治疗和管理、加强疫苗接种等。
04
结核杆菌的疫苗研究
结核病疫苗的种类和特点
卡介苗（BCG）
是全球使用最广泛的结核病 疫苗，对儿童结核病有较好 的预防效果，但对成人结核 病预防效果有限。
重组蛋白疫苗
基于结核杆菌的抗原蛋白开 发的疫苗，具有良好的安全 性和有效性，但免疫原性相 对较弱。
结核杆菌的研究进展-PPT课件
结核疫苗研究进展
第二种策略是对已接种卡介苗的儿童进行强化免疫，进而加强免疫应答并将免疫保护力延续至成人阶段。这一策略目前公认的最佳方案是应用亚单位疫苗加强免疫。亚单位疫苗组成明确，结构简单，可应用于有免疫缺陷的人群，倍受人们关注。亚单位疫苗主要是由有限数量的抗原构成，所引起的保护性免疫应答也高度集中。但其在体内滞留时间短，免疫应答的持续时间也较短，必须与佐剂联用才有效，使其应用受到限制，几种主要的候选疫苗均采用了将单抗原与多聚蛋白融合的方法，这样不仅增强了单抗原的免疫力，也易于进行规模化生产。所以佐剂的发展对强化免疫策略的实现功不可没。
结核杆菌诊断技术研究进展
4、噬茵体报告技术 该技术原理为，萤光素酶指示的分枝杆菌噬菌体与在含抗结核药物培养基中短暂培养的待检菌混合后，能感染活的耐药菌，使之表达萤光素酶基因，再加入萤光素底物，活菌会产生荧光，而敏感菌无荧光产生。此办法直观性高、用时短，但如要被广泛应用于结核杆菌的快速检测还需要进一步的探索．必须使用标准化的细菌、标准化的萤光素酶系统，以及标准化的培养基和发光检测仪，并能与用常规方法所测最低抑菌浓度值相符。
结核疫苗研究进展
第三种策略是将重组BCG 和亚单位疫苗或两种以上的疫苗结合到一起，从而解决结核疫苗免疫效果低下这一难题，虽然这个方法要求至少需要几年的时间进行第三期临床试验，这就需要做一个时间计划表来设法减少疫苗期试验，做一个成功的疫苗接种计划。
结核疫苗研究进展
从疫苗结构完整性来看一般可分为：重组BCG、亚单位疫苗、DNA 疫苗基因和缺失疫苗等。
结核杆菌诊断技术研究进展
3、MB／BacT系统 MB／BacT系统是由德国Heipha—Biotest公司生产的一种液体培养基系统，该系统对标本中结核分枝杆菌复合群(MTBC)初代分离率高于全自动分枝杆菌检测系统(BACTE)TB460，可以通过肉眼观察到细菌生长，且无放射性污染.但不能用于分支杆菌的菌型鉴定。
结核分枝杆菌的研究历史及生物学性状！
结核分枝杆菌的研究历史及⽣物学性状！结核分枝杆菌的研究历史及⽣物学性状！！结核分枝杆菌的研究历史及⽣物学性状的研究历史结核分枝杆菌的⼀、⼀、结核分枝杆菌结核分枝杆菌（M. tuberculosis）简称为结核杆菌（tubercle bacilli）。
早在1882年，德国细菌学家柯赫（Robert Koch，1843-1910）就已证明结核分枝杆菌是结核病的病原菌。
本菌可侵犯全⾝各组织器官，但以肺部感染最多见。
随着抗结核药物的不断发展和卫⽣⽣活状况的改善，结核的发病率和死亡率曾⼀度⼤幅下降。
20世纪80年代后，由于艾滋病和结核分枝杆菌耐药菌株的出现、免疫抑制剂的应⽤、吸毒、贫困及⼈⼝流动等因素，全球范围内结核病的疫情骤然恶化。
据WHO统计，全世界约每3个⼈中就有1个⼈感染了结核分枝杆菌，在某些发展中国家成⼈中结核分枝杆菌携带率⾼达80%，其中约5%～10%携带者可发展为活动性结核病。
近⼆⼗年由于艾滋病的流⾏，感染了HIV的结核分枝杆菌携带者，由于病毒破坏了机体的免疫功能，发展为活动性结核病的可能性⽐未感染HIV者⾼30～50倍，且结核的病程发展更快。
此外，在HIV感染的发展进程中，结核是最早发⽣的⼀种机会性感染，结核病加重了HIV感染者或艾滋病⼈的疾病负担，使其更易死亡。
21世纪以来全球每年约出现8百万结核新病例，并导致约3百万⼈死亡。
中国每年死于结核病的⼈约25万之多，是各类传染病死亡⼈数总和的两倍多。
因此，结核病⼜成为了威胁⼈类健康的全球性卫⽣问题，并成为某些发展中国家和地区，特别是艾滋病⾼发区⼈群的⾸要死因。
⼆、结核分枝杆菌⽣物学性状形态与染⾊结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，⼤⼩1～4X0.4µm。
⽜分枝杆菌则⽐较粗短。
分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较⾼，约占⼲重的60%，特别是有⼤量分枝菌酸（mycolic acid）包围在肽聚糖层的外⾯，可影响染料的穿⼊。
分枝杆菌⼀般⽤齐尼（Ziehl- Neelsen）抗酸染⾊法，以5% ⽯炭酸复红加温染⾊后可以染上，但⽤3%盐酸⼄醇不易脱⾊。
结核分枝杆菌FurB蛋白的表达及其单克隆抗体的制备
结核分枝杆菌FurB蛋白的表达及其单克隆抗体的制备姜泓;高雪;张海;李元;徐志凯;薛莹【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2007(18)1【摘要】目的:制备针对结核分枝杆菌FurB蛋白的单克隆抗体(mAb)并分析其特性.方法:利用Ecoli DH5α表达含有6×His的融合蛋白FurB;采用小鼠腹股沟皮下包埋硝酸纤维素膜的方法免疫小鼠,然后进行细胞融合、克隆化制备抗FurB mAb,用ELISA法初步鉴定其特异性位点和相对亲和力.结果:获得了高表达的融合蛋白,经SDS-PAGE分析,在相对分子质量15.0×103处有特异的目的蛋白条带.用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了抗FurB mAb.结论:所获得的抗FurB mAb效价高、特异性强,为进一步研究FurB在结核分枝杆菌铁调控和致病过程中的作用提供了有效工具.【总页数】3页(P41-43)【作者】姜泓;高雪;张海;李元;徐志凯;薛莹【作者单位】第四军医大学,微生物学教研室,陕西,西安,710032;第四军医大学,微生物学教研室,陕西,西安,710032;第四军医大学,微生物学教研室,陕西,西安,710032;第四军医大学,微生物学教研室,陕西,西安,710032;第四军医大学,微生物学教研室,陕西,西安,710032;第四军医大学,微生物学教研室,陕西,西安,710032【正文语种】中文【中图分类】Q786;Q813.2【相关文献】1.牛型结核分枝杆菌ESAT-6原核表达载体的制备和蛋白纯化 [J], 谷晨晨;李海涛;朱言柱;常彤;苗利光;刘艳环;董昕瑜;刘爱萍2.日本血吸虫重组蛋白SjGST的表达纯化及单克隆抗体的制备和特性鉴定 [J], 刘文;游牧;饶圣宏;徐振山;宋礼华3.结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64小鼠单克隆抗体制备、纯化及鉴定 [J], 马荣;陈振;黑龙;赵志军;徐广贤;戈朝晖4.Mer免疫球蛋白样区原核蛋白表达和单克隆抗体制备 [J], 范磊;沈飞;谢丽倩;周梦云;阮长耿5.牛朊蛋白和酵母朊毒体结构域融合蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备 [J], 李炎鑫;马贵平;杨汉春;刘全国;史喜菊;李冰玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
结核分枝杆菌furB基因的克隆、表达和纯化
结核分枝杆菌furB基因的克隆、表达和纯化姜泓;薛莹;高雪;师长宏;柏银兰;张海;李元;徐志凯【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2004(025)018【摘要】目的: 从H37Rv基因组中扩增furB并高效表达和纯化. 方法: 用PCR技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增furB序列,将其与pGEM-T-Easy载体连接转化E.coli DH5α,构建重组克隆载体pGEM-T-Easy/furB,测序正确后将目的基因片断克隆入pQE-80L原核表达载体并转化E.coli DH5α,IPTG诱导目的蛋白表达. 经Western blot鉴定目的基因与(His)6融合表达,将已表达的蛋白质通过Ni2+-NTA亲和色谱柱进行纯化. 结果: PCR得到结核分枝杆菌furB,测序结果与Genbank中报道的完全一致. SDS-PAGE显示,在Mr为15.0×103处有相应的蛋白质表达条带,Western blot鉴定为(His)6融合表达蛋白. 经Ni2+-NTA亲和色谱柱进行纯化后可得到纯化的蛋白. 结论: 成功克隆了铁调节蛋白基因furB序列,并在E.coli DH5α高效表达,亲和层析后获得了纯化目的蛋白.【总页数】4页(P1641-1644)【作者】姜泓;薛莹;高雪;师长宏;柏银兰;张海;李元;徐志凯【作者单位】第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033【正文语种】中文【中图分类】R378.91【相关文献】1.结核分枝杆菌Rv3803c、Rv3846基因的克隆、表达、纯化与鉴定 [J], 孙毅凡;周琳;李海成;周杰;钱明;陈涛;江勇;赖赛麟;江振友;钟球2.结核分枝杆菌培养滤液蛋白21(CFP21)的基因克隆、表达及纯化 [J], 谢富佳;谭继英;梁正羽;乔梅;祝秉东;吴玉敏;杨燕;章国平3.结核分枝杆菌FurB基因真核表达质粒的构建及表达 [J], 姜泓;高雪;张海;李元;徐志凯;薛莹4.结核分枝杆菌FurB蛋白的表达及其单克隆抗体的制备 [J], 姜泓;高雪;张海;李元;徐志凯;薛莹5.结核分枝杆菌硫酸化酶基因的克隆及其原核表达、鉴定及纯化 [J], 唐莉娟;马博;刘景;周鸿淼;张振因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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结 核病是 由结核 分枝杆 菌 （ ｃｂｃｅｉ ｔｂｒｕ ｓ ） 致 的 以呼 吸 系 统感 染 为 主 的慢 性 传染 病 ． 目 Ｍｙｏ ａｔｒ ｍ ｕ ｅｃ ｌ ｉ 所 ｕ ｏｓ
前全球 每年有 ８ ０万 新感染 患者 和 ３ ０万 患者 死亡 ，表 明结 核病 仍是 影 响全球 人类 健康 的一个 主要 公共 ０ ０ Ｊ 卫生 问题 ．但是 ，有 关结 核毒力 和致 病 因素 的基础研究 却进 展缓 慢 ． 近年来 ，随着基 因组 学的发 展 ，结核 分枝 杆菌 的基 因全 序列 已完 成测 序 ，并且 证 明结核 分枝杆 菌在 Ｊ 结 核病患 者体 内的生 长及致 病 与很多 微量元 素有 关 ．后 基 因组学 分析表 明 ，结 核分 枝杆 菌 中存 在与 铁的代
王 奇
（ 顺 师 专 ，辽 宁 抚 顺 １ ３ ０ ） 抚 １０ ６
摘
要 ：在 结核 分 枝 杆 菌 中存 在 与 铁 的代 谢 相 关 的基 因． 铁 是 多种 酶 的 辅 因子 ，在 结 核 分 枝 杆 菌 的生 长 过
程 中发 挥 了重 要 作 用 ．Ｆ ｒ 结 核 分 枝 杆 菌 中存 在 的铁 依 赖 调 节 因子 ，包 括 Ｆ ｒ 和 Ｆ ｒ 两 种 类 似 蛋 白，其 中 ｕ是 ｕＡ ｕＢ
Ｆｒ ｕＢ被 认 为 还 具 有 锌 依 赖 性 ． 对 近 年 来 Ｆ ｒ 的相 关研 究进 展 情 况 进 行 综 述 ． ｕＢ 关键 词 ：结 核 分 枝 杆 菌 ；Ｆ ｒ ｕＢ；锌 依 赖 性
中 图分 类 号 ：Ｑ ３ ． ３ ９ ９ １ １ 文献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ —５ ８ （ ０ ８ ０ —０ ３ — ４ ０ ８ ６ ８ ２ ０ ）４ ０ １ ０
１ Ｆ ｒ与 铁 的 关 系 ｕ
Ｆ ｒ 因控制 铁调 节蛋 白质 基 因 的表 达 ． 鼠疫 菌 （ ｌ ｕ ａｉｕ ） ｕ基 Ｐａ ｅｂ ｃ ｌｓ 至少 有 ２ ｇ ｌ ５种 铁 制 约 的蛋 白质 ，少 量 的１ ７种铁制 约蛋 白质和 ６种 铁诱 导的 多肤 中的 ４种 受 Ｆ ｒ ｕ 调节 ；幽 门螺 杆菌 （ ｌ ｏ ａｔｒｐ ｌ ｉ的Ｆ ｒ Ｈｅ ｃｂ ｃｅ ｙ ｒ） ｕ 基 ｉ ｏ
被两 个氧化应 激反应 的调 控 因子所 调节 ，由氧和铁 产生 的危 险的 自由基 是这 种双 向调节 的基础 ． Ｆｒ ｕ 包含 有两个 金属 结合 位点 ，一 个 是 Ｆ 结 合位 点 ，一 个 是 ｚ 结 合 位 点 ．Ｆ ｒ 因 的表 达 产 ｅ ｎ ｕ基 物 Ｆ ｒ 白与 Ｆ ２ 结 合 ，可形 成 一个复 合物 ，这个 复合 物可 以抑制 多种 基 因的表 达 ．Ｆ ｒ ｕ蛋 ｅ ｕ 在染 色体 、质 粒 上都 可以与 Ｄ Ａ上 的特 定 区域结 合 ． Ｎ 在低 铁 的条 件下 ，Ｆ ｒ ＿ ｅ 复合 体不 会 形成 ，这 样 各 个基 因就 不 会 被 抑 制 表达 ．Ｆ ｒ 因 的 调节 还 ｕ＿Ｆ ｕ基 同时受代 谢物 的调节 ，这样 可 以防 止 Ｆ 广 Ｆ ２ ｕ ｅ 复合 物作 用于 自身 而形成 基 因 闭锁 ． 在高 铁 环 境 下 ，转 录 抑 制 基 因 Ｆ ｒ与 一 个 保 守 的 ２ ｂ 的 回 文 序 列 ５—— Ｇ ＡＡ Ｇ ｕ ６ｐ ＡＴ Ｔ Ａ
谢相关 的基 因 ．铁是 多种酶 的辅 因子 ，参 与 电子转运 和氧化 还原 反应 ，在 结核 分枝 杆菌 的生 长过程 中发挥 了重要作 用Ｈ ．限制铁 的利 用可 以延缓 结核 分枝杆 菌 的生长 ，同 时铁 的利用 情况 可作 为反 映多种 毒性 因子 表达水平 的指标 ．然 而 ，摄 取过 量 的铁会 导致 细胞 铁 中毒和 氧化应 激从 而 抑制 细菌 生长 ．结 核分枝 杆菌 基 因组 中包 括 四种 铁依 赖 的调节 因子 ，它们 分属 两个家 族 ，分 别 为 Ｆ ｒ ｕ 家族 和 ＤｔＲ家族 ．其 中 ，Ｆ ｒ ｘ ｕＡ和 Ｆ ｒ 因属 于编码 Ｆ ｒ ｕＢ基 ｕ 家族 蛋 白 ，而 Ｉｅ ｄ Ｒ和 Ｓｒ ｉ Ｒ则 属于 Ｄ ｘ ｔＲ家族 成 员 ． Ｆｒ ｕ 是广泛 存在 于革 兰 氏阴性菌 和 阳性菌 中的铁依 赖调 节 因子 ，是 细 菌 毒力 因子 和铁 摄取 系统 蛋 白的 负 性调节 因子 ．在 结核 分枝 杆 菌中 ，Ｆ ｒ 】 ｕ 可调节 多个基 因 的表达 ，对 菌 体 内 铁和 其 它一 些金 属 离子 的平 衡 起到 了重要作 用 ．结 核分 枝杆 菌基 因组包 含 了两个相 似 的铁摄 取基 因 Ｆ ｒ ｕ Ａ和 Ｆ ｒ ｕＢ．Ｆ ｒ ｕＡ位于 ＫａＧ上 ｔ 游 并参 与调 控 Ｋ ｔ ＿ 因 的表达 ，而 Ｋ ｔ 与异 烟 肼耐 药 密切 相关 ；Ｆ ｒ 的基 因产 物 Ｆ ｒ ａＧ 长 ａＧ ｕＢ ｕＢ被 认 为是 涉 及 到与锌 的吸收 和从储存 空 间转 运相关 基 因的 去阻遏 作用 的锌 吸 收 调节 因子 ，故 有研 究 者提 出 Ｆ ｒ 被 ｕＢ应 命 名为 Ｚ ｒ ｕｃ 引．
第１ 卷 第４ ０ 期 ２ ０ａ ｎ ｎ ｅ ｃ ｅ ｓＣｏｌｇ ｏ ｒ ａ ｆＬｉｏ ｉ ｇ Ｔ ａ ｈ ｒ ｌ ｅ ｅ
Ｖ０ ．Ｏ Ｎｏ． １１ ４
Ｄｅ ． ｃ ２ Ｏ０ ８
【 学术研 究】
结 核 分 枝 杆 菌 Ｆ ｒ Ｚ ｒ研 究 进 展 ｕＢ（ ｕ ）
因序 列分析表 明 ，其 表达 产物 与其 它细 菌 的 Ｆ ｒ 白具有很 高 的同源性 ，并且 需要 有 培养基 中有铁 存在 才 ｕ蛋 能表 现抑制 活性 ，说 明幽 门螺 杆菌 的 Ｆ ｒ ｕ 也需 要铁作 为共 同作 用 因子ｌ ；在 大肠 杆 菌 中 ，铁调 节 因子 Ｆ ｒ ９ ｕ