血管生成拟态研究分析

一、实验目的本研究旨在通过体外细胞培养实验，观察和探究血管拟态（Vasculogenic Mimicry，VM）的形成过程，并分析其形成的相关因素。

二、实验材料与试剂1. 材料：人肝癌细胞系HepG2、人皮肤黑色素瘤细胞系A375、人血管内皮细胞系HMEC-1、胎牛血清（FBS）、DMEM培养基、青霉素-链霉素混合抗生素、胰蛋白酶、0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液。

2. 试剂：Matrigel基质胶、Transwell小室、多聚赖氨酸、吖啶橙（AO）、台盼蓝染色剂、免疫组化试剂盒、抗血管内皮细胞标记物抗体（CD31）、抗细胞外基质蛋白抗体（IV型胶原）、荧光显微镜、凝胶成像系统等。

三、实验方法1. 细胞培养：将HepG2、A375、HMEC-1细胞分别接种于培养皿中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。

2. VM形成实验：（1）将Transwell小室置于培养皿中，下室加入含有10%FBS的DMEM培养基作为细胞外基质。

（2）将HepG2、A375细胞接种于上室，上室加入含有10%FBS的DMEM培养基。

（3）将Transwell小室置于培养箱中培养，观察VM形成情况。

3. VM鉴定：（1）取出Transwell小室，用多聚赖氨酸处理，固定细胞。

（2）用胰蛋白酶-EDTA溶液消化细胞，收集细胞悬液。

（3）用台盼蓝染色剂检测细胞活力。

（4）用免疫组化试剂盒对细胞进行染色，检测CD31和IV型胶原的表达。

（5）观察并记录VM的形成情况。

四、实验结果1. 观察到HepG2、A375细胞在Transwell小室中形成VM，表现为细胞在基质胶上形成管状结构。

2. 免疫组化结果显示，VM区域CD31和IV型胶原表达阳性，证实了VM的形成。

3. 细胞活力检测结果显示，VM形成过程中细胞活力保持良好。

五、讨论本研究通过体外细胞培养实验，成功观察到HepG2、A375细胞在Transwell小室中形成VM。

VM的形成可能与以下因素有关：1. 细胞来源：本研究中的VM形成主要来源于HepG2、A375细胞，这些细胞具有较强的侵袭和转移能力，可能与VM的形成有关。

纳米粒疗法对鼠脉络膜黑色素瘤血管生成拟态影响的实验研究摘要】目的研究纳米粒对脉络膜黑色素瘤血管生成拟态的抑制作用及其作用机制。

方法将鼠源性黑色素瘤细胞悬液4ul用10ul微量注射器注射到20支鼠眼脉络膜上腔，2周后处死10只动物，分离肿瘤组织，检测血管生成拟态的存在，免疫组化方法HIF-lα，VEGF的表述。

并以此组作为对照组。

将纳米粒液4ug/ul/每只直接注射到10支长有脉络膜黑色素瘤鼠眼玻璃体腔2周后处死，检测肿瘤组织中HIF-lα，VEGF的表达，并以此组作为实验组。

实验结果采取方差分析q检验进行统计学分析。

结果 HIF-LΑ在实验组表达率为15.79%，对照组为80.19%，VEGF在实验组表达率为20.18%，对照组65.19%，有统计学意义，P<0.05。

结论纳米粒疗法对鼠脉络膜黑色素瘤血管生成拟态有抑制作用，通过下调HIF-lα，VEGF的表达，从而抑制肿瘤的生长，减低侵袭。

【关键词】脉络膜黑色素瘤新生血管缺氧诱导因子血管内皮生长因子肿瘤血管形成是其生长和转移的基础，新近的研究发现脉络膜黑色素瘤组织中存在血管生成拟态[1]，一种新的肿瘤血液供应模式，肿瘤通过血管生成拟态可与宿主血管相连通，从而获得血液供应。

本研究旨在探讨纳米粒疗法对鼠脉络膜肿瘤的治疗提供新的思路。

1 材料和方法1.1实验动物和分组将生长脉络膜瘤小鼠（C57/BL6）20只分成两组，一组在数玻璃体腔注入纳米粒液；另一组未作治疗。

2周后处死，取出肿瘤组织。

1.2方法1.2.1常规HE染色眼球标本经10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片厚度为4um，70℃烤箱烤片20分钟，常规脱脂至水，苏木素复染核10分钟，盐酸酒精分化，氨水返蓝，伊红染色3分钟后脱水透明，中性树胶封片。

1.2.2免疫组织化学sp法检测以二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，3%H2O2溶液灭活内源性酶，将切片进行微波抗原；10%山羊血清封闭，加入HIF-lα多克隆抗体，VEGF多克隆抗体，4℃冰箱过夜。

血管拟态的研究方法血管拟态是指在体内或体外模拟血管环境，培育具有血管相似结构的材料或细胞。

血管拟态研究旨在模拟人体血管环境，促进血管新生、血管再生及组织修复等方面的研究。

本文将重点介绍血管拟态的研究方法。

一、动物实验1. 神经管转染法神经管转染法是将具有小时后功能的神经管内充填有成纤维细胞，表达VEGF等刺激新生血管的蛋白质。

神经管置于背侧的皮下脂肪组织中，可使充填的成纤维细胞及VEGF最终生成结构类似于血管的通透的管状物，与背面的血管相连。

2. 内皮细胞迁移法内皮细胞迁移法是将含有内皮细胞的组织移植到体内，如在裸鼠体内移植血管内皮细胞以上的组织，可形成“祖孙血管”，这种血管新生模式不依赖于成纤维细胞的存在，但需要关闭原有血管。

3. 同种异体再造法同种异体再造法是将孕鼠或成年小鼠运用同样复杂的操作培育出一整副或更多子宫组织，通过手术按照准备好的孔洞将子宫组织注入到一个异常处，细胞生长和再生的过程中，向周围输送所需的养分和信号，这种方法通过子宫多能干细胞的母源进行生殖系统再生，在实验大鼠中建立了一种生殖器再生的效果，这种方法已经有一定的应用前景。

二、细胞培养法1. 三维细胞培养法三维细胞培养法是将细胞转移到生物材料或细胞支架上，培植出更具有三维结构的细胞模型，使细胞趋于生物结构与生理行为上更趋于真实的模拟。

2. 微绝缘区培植法微绝缘区培植法是将细胞种植物种子沉降到微绝缘区培养皿中，采用人工振荡处理技术，使实验动物细胞自然生长，增加细胞细微刺激，加速生长的效果，生成的细胞在三维构造中表现出真实成分及异质性。

三、生物材料修复法1. 人工血管2. 规则微米级纳米级沟槽手术刀刻蚀法这种方法要直接对生物材料进行修改，通过增加纳米级微米级沟槽的数目和大小，来使生物材料达到随机和有序梯度型拟态标准，并且具有生物相容性和生物相似性。

3. 生物相容性材料植入术生物相容性材料植入术是通过将生物材料经过特定物理处理后，植入体内，达到修复或替代受损或缺陷的血管或血管组织。