实验五微生物数量和大小测定霉菌的观察演示课件

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实验(二) 微生物数量的测定
一、目的要求
1、明确血细胞计数板计数的原理。 2、掌握使用血细胞计数板进行微生物计 数的方法。
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二、实验原理
细胞总数的测定（包括活的和已丧失活力 的细菌）
1、比浊法 2、染色涂片计数法 3、显微直接计数法
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1、比浊法
比浊法的原理是利用细菌细胞在溶液中数量越多， 浊度越大，在光电比色计中测定时所吸收的光线 越多。
2、染色涂片计数法
取0.01ml的菌悬液放在1cm2 的玻片上，让其干燥， 然后固定染色，再置显微镜下计数每一视野中的 菌数，算出视野面积，按下列公式即可求出每ml 原菌液中的含菌数。
每 ml 原 菌 液 中 的 含 菌 数 = 视 野 中 的 平 均 菌 数 ×1cm2/视野面积×100×稀释倍数
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3、显微直接计数法
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮 液置于一种特别的具有确定面积和容积的载 玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数 的一种方法。
显微镜直接计数法的优点是直观、快速。缺 点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的 总和。目前已有一些方法可以克服这一缺点， 如结合活菌染色，微室培养等方法来达到只 计数活菌体的目的。
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血细胞计数板由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横 槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分 为九个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室是由一个大方格 分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；共计400个小 方格。每一个大方格的面积为1 mm2，盖玻片与计数区之间的高度
中格
细胞 记数
记数 1 2 3 4 5
中格
细胞 记数
2、计算酵母菌（以及大肠杆菌）悬液的浓度。稀释 倍数为1
四、思考题
1、根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主 要来自哪些方面？应如何尽量减少误差、力求准确？
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实验（三）霉菌的形态观察
一、实验目的
观察霉菌的形态结构特征 学习掌握霉菌染色的基本方法
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镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片， 一般是将l mm等分为100格，每格长0.01 mm(即10 um) ，用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
目镜测微尺是一块中央有精确的等分刻度的圆形小 玻片，置于接目镜中的隔板上。目镜测微尺每小格所 代表的实际长度不一样，测量前，必须先用镜台测微 尺进行校正。20 Nhomakorabea青霉
属于半知菌亚门,分生 孢子梗基部无足细胞， 孢子梗顶端不膨大成 囊，而是多次分枝形 成扫帚状，小梗末端 形成分生孢子。
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根霉
横向生长的菌丝产生假 根，附着在基质上。
菌丝无隔、无性生殖产 生孢囊孢子，有性生 殖产生接合孢子。
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三、实验材料
1. 黑曲霉、青霉示范片。
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四、实验步骤
主要观察黑曲霉菌丝分生孢 子着生情况（辨认顶囊、 分生孢子梗、足细胞和分 生孢子）
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三、实验步骤
1、在10×和40×下找到计数室。
2、盖上盖玻片将摇匀的酿酒酵母菌（或大肠杆菌）悬 液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用 自动进入计数室。如滴入过多，溢出并流入两侧槽内，使 盖玻片浮起，体积改变，会影响计数结果，需用滤纸把多 余的溶液吸出，以槽内没有溶液为宜。如滴入溶液过少， 经多次充液，易产生气泡，应洗净计数室，干燥后重做。
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目镜测微尺 镜台测微尺
利用镜台测微尺测 定目镜测微尺的每 格绝对值
目镜测微尺测定微 生物大小
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三、实验器材
1、菌种： 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）
2、器材： 显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺
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三、实验步骤
1、目镜测微尺的校正
镜台测微尺有刻度的一面朝上，置显微镜载物台上， 先在低倍镜下，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野 中央。转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的 刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺在某 一区域内两线完全重合，分别数出两重合线之间镜台 微尺和目镜微尺所占的格数。计算10x、40x 、油镜 下目镜测微尺的校正值。
实验五 微生物大小和数量 测定、霉菌的形态观察
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实验(一) 微生物大小的测定
一、目的要求
学习使用镜台测微尺和目镜测微尺在 显微镜下测定微生物大小的方法。
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二、实验原理
• 对于病毒、细菌、放线菌、真菌和原生动物等不同类型的微 生物来说，它们的大小存在很大的差异。
• 在同一类型中不同种类的微生物，或同一种类中不同时期的 微生物个体，它们的大小也存在很大的差异。
为0.1 mm，所以计数室的容积为0.1 mm3 。
计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均 值，以及大方格中的总菌数，再换算成1 ml菌液中的总菌数。
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１个计数室＝１×１mm 包含５×５个中方格
１个中方格＝４×４个小方格 14
三、实验器材
1、菌种： 酿酒酵母
2、器材： 显微镜、血球计数板
主要观察青霉菌丝分生孢子 着生情况（辨认分生孢子 梗和分生孢子）
3、静止5 min（为什么），先用低倍镜将计数室移至 视野中央。
4、在高倍下计数：每个计数室选5个中格(4个角和中央 的一个中格)中的菌体进行计数。对于分布在刻线上的细菌， 依照“数上不数下，数左不数右“的原则进行计数。
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三、实验结果
1、统计每个计数室（五个中格）的细胞数量
记数 1 2 3 4 5
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霉菌：凡在营养基质上形成绒毛状、棉絮状或蜘蛛
网形二丝、状菌实体验的真原菌理，统称为霉菌。霉菌包括分
类学上许多不同纲或类的真菌，它们分别属于藻 状菌纲、子囊菌纲、担子菌纲和半知菌类。霉菌 菌丝分为有隔菌丝和无隔菌丝两类.
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黑曲霉
属于半知菌亚门, 菌丝有隔,细 胞多核；部分气生菌丝细胞 形成特化的厚壁、膨大的足 细胞，由足细胞的中间稍呈 垂直地向上延长，形成分生 孢子梗。
目镜测微尺每格长度（um）＝两重合线间镜台测微尺 格数×10/两重合线间目镜测微尺格数
2、细胞大小的测量
酵母菌悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片，置显微镜
载物台上。用目镜测微尺测量细胞宽和长。
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三、实验结果
计算出目镜测微尺校正结果以及酵母菌大小测 定结果
四、思考题 p51 2(2)
1、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大 倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结 果是否相同？为什么？