第十二章 植物组织培养室的构建及培养基、植物材料消毒液详解

植物组织培养技术
任务一、植物组织培养实验室的构建
主要内容
任务一、植物组织培养实验室的构建 任务二、培养基及其配制 任务三、植物组织培养快繁 任务四、植物脱毒技术
任务五、常见园林植物的脱毒与快速繁殖
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任务一 植物组织培养实验室（车间）的构建
子任务一 实验室的设计与要求 子任务二 主要仪器设备和器皿用具
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子任务一 实验室的设计与要求
❖ 5、辅助实验室 ❖ (2)生化分析实验室 ❖ 以培养细胞产物为主要目的实验室，应建立相应的分析化验实验室，随时
对培养物成分进行取样检查。以大型次生代谢物生产为主要目的组织培养， 还需要有效分离实验室。
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和培养物的转移； ❖ 组织培养的核心工作在此完成。 ❖ 要求：干爽安静、清洁明亮，宜小不宜大。 ❖ 设备：无菌操作室安装有紫外灯和空调，工作台和搁架，还有超净工作台
和整套灭菌接种仪器、药品等。
一般新建实验室的无菌室在使用之前应进行灭菌处 理，处理方法是甲醛和高锰酸钾熏蒸，并需定期灭 菌处理，还可用紫外线照射1-2h/周，或每次使用前 照射10-30min。
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子任务一 实验室的设计与要求
❖ （三）基本组成
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任务一 植物组织培养实验室（车间）的构建
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1植物组织培养实验室的构建引言：植物组织培养实验室是一个能够提供最优化环境以促进植物生长和繁殖的重要设施。

它是一个多功能的实验室，包含各种设备和材料，可用于植物无菌培养、植物细胞和组织培养、诱导和快速繁殖、遗传转化、基因工程等研究。

本文将详细介绍植物组织培养实验室构建所需的关键要素和步骤。

一、基础设施的建设：1.实验室环境：植物组织培养实验室应建在相对封闭、无尘、无菌的环境中，以确保无菌培养的成功。

2.实验室空间：实验室应有足够的空间容纳各种植物培养设备和工作台，同时设有储藏室存放培养基和试剂等物品。

3.空气处理系统：安装空气净化系统，通过合适的过滤器去除空气中的微生物和颗粒，保持实验室的无菌环境。

4.温度和湿度控制：安装温度和湿度控制设备，保持恒定的温湿度条件有利于植物生长和繁殖。

通常，实验室温度控制在20-25°C，湿度控制在60-70%之间。

二、常用设备及仪器的配置：1.生物安全柜：生物安全柜是进行无菌操作和暴露于植物组织培养物的标准操作。

实验室需要配置一台II级生物安全柜，以确保实验者和培养物的安全。

2.恒温培养箱：用于提供恒定的温度和湿度条件。

可根据需要配置多台，同时实验最佳温度选择可依研究对象的特殊要求进行调整。

3.高效洁净工作台：用于进行植物材料的取样和处理，确保操作时的无菌性。

根据需要可配置多台。

4.无菌操作台：用于进行植物组织培养物的分离和培养，保持培养物的无菌状态。

5.显微镜：用于观测植物细胞组织的结构和形态，进行植物培养过程的监测和操作。

6.高速离心机：用于沉淀植物细胞和组织，在分离和培养过程中常常需要进行细胞分离和培养基的制备。

7.培养箱：用于保存培养基和试剂等物品，保持其干燥和无菌状态。

三、试剂和培养基的准备：1.培养基种类：根据研究目的和需要，准备不同种类的培养基，包括无菌试管培养基、无菌培养碟、液体培养基等，以适应不同组织培养和繁殖的需求。

2.培养基配方：根据研究需求和组织培养的目的，准备不同种类的培养基配方，包括基本培养基、选择培养基、植物生长调节剂的添加等。

第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
4、储存室（区）
•存放配制后的培养基 •或未用完的培养基
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5、灭菌室
即消毒室，是培养基、玻璃器皿、塑料 器皿和其他物品消毒灭菌的地方
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6、操作室
思考题 1、一个正规的组织培养实验室应具备哪些房间？ 2、组织培养常用的设备有哪些？各有何用途？ 3、组织培养的环境条件有哪些？
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
培养基的成分 培养基的制备 培养基的选择
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4、超净工作台 •陈列于操作室（接种室）中 •类型：垂直式和水平式 •作用：无菌操作
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5、pH计 •陈列于制备室中 •作用：测定培养基及酶液的pH值
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6、显微镜 •陈列于观察室中 •类型：
倒置显微镜 普通显微镜 荧光显微镜 解剖显微镜
培养基的制备是组培的核心工作，外植体 之所以能沿着不同的组培途径生长、分化、成 苗都取决于选用不同成分的培养基来调节控制 的。
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
培养基的成分
其它添加物
无机营养成分
培养基组成
有机营养成分
固化剂
植物生长调节剂
无机营养成分+有机营养成分=第基十二本章植培物组织养培养基室的构建及培 养基植物材料消毒液
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液

药品柜
冰箱
天
平
磁 力 搅 拌 器
恒温水浴锅
2、洗涤室（区）
功能：完成各种器具的洗涤、干 燥、保存、材料预处理，同时兼 顾试管苗出瓶等。 要求：需安装一个较大的水池， 水泥制作，白瓷砖砌内外表面， 池底放一张橡胶垫，以减少玻璃 器皿的破损。下水道应畅通，以 免妨碍工作。 设备：玻璃器皿、塑料器皿、周 转箱、洗涤刷、洗瓶机、洗涤剂、 晾干台等。

3、培养基制作与灭菌室（区）
要求：20 m2左右，明亮，通风。配置大型 工作台1张。 功能：培养基配制、分装、 高压灭菌，无 菌水的制备以及其它物品的高压灭菌等。 设备：高压灭菌器、电炉、不锈钢锅、培 养基分注器、物品橱1-3个，用以放置线绳、 封口材料等。此外还应有烘箱、天平、酸度 计、盆与桶等。
洗 涤 室
接 种 室
培 养 室
灭 菌 室
驯 化 室
植物组织培养实验室 的组成
分体式-研究性质实验室，分开的若干房间将 准备室分解为药品贮藏室、培养基配制与洗涤室 和灭菌室等，功能明确，便于管理，但不适于大 规模生产。
通间式-规模化实验室，一般设计成大的通间 ，试验操作的各个环节在同一房间内按程序完成 。便于程序化操作与管理，减少各环节间的衔接 时间，提高工作效率。还便于培养基配制、分装 和灭菌的自动化操作程序设计，减少规模化生产 的人工劳动，更便于无菌条件的控制和标准化操 作体系的建立。
9、天平
植物组织培养实验室需要不同精度的天平。 感量0.001g的天平（分析天平）和感量0.0001g 的天平（电子天平）用于称量微量元素和一些 较高精确度的实验用品。 感量0.01g和0.1g的天平，用于大量元素母液配 制和一些用量较大的药品的称量。 陈列于 中