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一、实验背景黄连，学名Coptis chinensis，是毛茛科黄连属植物，具有清热燥湿、泻火解毒的功效，是中医药中常用的药材之一。
黄连的有效成分主要为生物碱，其中小檗碱是其主要活性成分，具有抗菌、抗病毒、抗炎等药理作用。
为了确保药材的质量和安全性，本实验对黄连进行了鉴定，以下是我对本次实验的心得体会。
二、实验过程1. 实验材料与仪器实验材料：黄连药材、水、乙醇、石油醚、苯、三氯甲烷、盐酸、硫酸、枸橼酸等。
实验仪器：电子天平、烧杯、锥形瓶、冷凝管、蒸馏装置、分光光度计、显微分析系统等。
2. 实验步骤（1）黄连药材的采集与处理：选取干燥的黄连根茎，除去杂质，洗净，晾干。
（2）小檗碱的提取：将黄连药材研磨成粉末，加入适量水，加热煮沸，过滤，得到黄连水提液。
（3）小檗碱的精制：将黄连水提液加入适量的硫酸，调节pH至2.5，静置，沉淀，过滤，得到小檗碱沉淀。
（4）小檗碱的鉴定：采用紫外-可见分光光度法对精制后的小檗碱进行含量测定，并与标准品进行对比。
三、实验结果与分析1. 黄连药材的性状鉴定通过观察黄连药材的性状，如颜色、气味、质地等，初步判断其品质。
本实验选取的黄连药材呈黄色，气味苦，质地坚实，符合黄连药材的特征。
2. 小檗碱的提取与精制实验中，通过加热煮沸、过滤、沉淀等步骤，成功提取并精制出小檗碱。
提取率较高，表明实验操作较为合理。
3. 小檗碱的鉴定采用紫外-可见分光光度法对精制后的小檗碱进行含量测定，结果表明，本实验提取的小檗碱含量较高，与标准品相近，证明实验操作正确。
四、实验心得1. 实验操作要严谨在实验过程中，要严格按照实验步骤进行操作，确保实验结果的准确性。
例如，在提取过程中，要控制好温度和时间，避免过度加热或加热不足，影响提取效果。
2. 注意实验安全实验过程中，要严格遵守实验室安全规定，如佩戴防护眼镜、手套、口罩等，避免意外伤害。
3. 培养团队协作精神实验过程中，团队成员要相互配合，共同完成任务。
HPLC测定黄连中盐酸小檗碱含量
尹清
【期刊名称】《上海中医药杂志》
【年(卷),期】2003(37)7
【摘要】为测定黄连中盐酸小檗碱含量 ,用耐酸性ZOBAXEclipseXDB -C8色谱柱 ,在较低pH下 ,以乙腈 -0 0 5mol磷酸二氢钠 (磷酸调pH为2 5 ) (30∶70 )为流动相 ,于 345nm处测定。
结果显示盐酸小檗碱平均回收率为99 31 %。
此法简便快速 ,准确稳定 ,重现性好。
【总页数】3页(P53-55)
【关键词】HPLC测定;黄连;盐酸小檗碱;含量;中药
【作者】尹清
【作者单位】上海浦东养和堂饮片厂
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.HPLC法测定额勒更口服液黄连中盐酸小檗碱含量 [J], 李雨生
2.RP-HPLC定量三乙胺法测定中药黄连中盐酸小檗碱的含量 [J], 李彩虹;彭罡;周克元
3.HPLC法测定虎黄烧伤搽剂中盐酸小檗碱的含量 [J], 赵东;郑维兵;陈志平;钟旭
4.HPLC法同时测定黄柴安胃胶囊中盐酸小檗碱和黄芩素的含量 [J], 张苇苇
5.HPLC同时测定翻黄合剂中芍药苷和盐酸小檗碱含量 [J], 陆凤琪; 周海嫔; 陈文成; 甘斌艳; 王亚芳
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HPLC法鉴定不同产地黄连饮片中含生物碱的研究摘要】目的：研究高效液相色谱法（HPLC）在不同产地黄连饮片中生物碱检测中的价值。
方法：选择HPLC法分别检测各区域黄连中生物碱情况。
结果：不同区域黄连中小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀生物碱以及总含量具有一定差别，其中四川洪雅县的黄连生物碱含量较高，而云南德钦县较低。
结论：HPLC在不同区域黄连生物碱的检验中效果显著，操作较为方便，具有一定重复性，鉴定结果的准确率较高，值得广泛推广及应用。
【关键词】生物碱；黄连；高效液相色谱法；饮片【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）21-0362-01黄连属于常见的中药饮片，具有泻火解毒、清热燥湿的功效，取得了较高的临床价值。
黄连的主要成分为生物碱，若能够准确掌握黄连中有效成分，选择疗效确切的鉴定方式在保证饮片质量中具有重要意义。
临床上常采取紫外分光光度计或者薄层扫描方式进行鉴定，虽然取得过一定检验价值，但效果并不明显[1]。
其中薄层扫描鉴定结果的准确性较低，而紫外分光光度计仅能够检出黄连中生物碱的总含量。
随着鉴定技术不断完善，临床认为采取HPLC法鉴定效果显著，不仅能够检出各生物碱含量，同时能够保证结果准确[2]。
因此本文展开研究，探讨HPLC法在不同区域黄连生物碱的检验中的价值，现作出如下报道。
1.资料与方法1.1 仪器与试剂日本日立公司生产的高效液相色谱仪器、色谱柱、超声波清洗器、电子分析天平、色谱数据工作站、乙腈色谱纯试剂、盐酸小檗碱以及双蒸水等。
1.2 方法将盐酸小檗碱判定为对照，按照HPLC法分别检测黄连中各生物碱含量。
1.3 色谱条件色谱柱为4.6mm*250mm，5um；流动相50:50的乙腈-0.1%磷酸液体，与0.1g/100ml的十二烷基磺酸钠混合，柱温设置为30℃，检验波长345nm，流速1.0ml/min。
1.4 配置溶液将100℃干燥后的盐酸小檗碱放入流动相中，浓度设置成240.6ug/ml；取0.1g黄连粉末，放置于锥形瓶中，加入流动相（80ml），采取超声处理，频率200W，功率40kHz，时间控制35min左右。
黄连五种主要生物碱的提取纯化及含量测定张纯刚;唐静雅;于琛琛;程兰;康廷国【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2018(020)009【摘要】目的:探索出黄连五种主要生物碱的最优提取纯化方法及含量测定方法,为制剂研究奠定基础.方法:采用HPLC进行生物碱的含量测定,以黄连五种主要生物碱加和得率为指标,优选黄连五种主要生物碱提取及纯化工艺.盐酸药根碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的浓度,分别在0.48～4.80、3.52～35.2、2.04～20.4、1.72～17.2、10.2～102μg·mL-1(r均大于0.999)范围内,与峰面积呈良好的线性关系.结果:黄连提取最优的条件为黄连饮片,加8倍量1.5％的硫酸溶液,煎煮3次,每次40 min.纯化最佳工艺为黄连提取液用Ca(OH)2调节pH 5～6,滤液加HCl调节pH 1～2,加5％NaCl,冰箱冷藏静置过夜,沉淀物干燥.结论:所建立的黄连五种主要生物碱提取纯化工艺及含量测定方法简单可靠.【总页数】5页(P1146-1149,1156)【作者】张纯刚;唐静雅;于琛琛;程兰;康廷国【作者单位】辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 116620;大连医科大学附属第一医院药学部,辽宁大连 116620;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 116620;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 116620;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 116620【正文语种】中文【相关文献】1.黄连总生物碱的提取纯化及含量测定 [J], 张中华;赵亚兰2.正交试验设计筛选黄连总生物碱的提取纯化工艺研究 [J], 熊玲;覃瑶;罗维早;肖坤全;王欣3.黄连生物碱的提取纯化及降脂作用 [J], 侯宏;李学刚;李平;王小华;冯平4.黄连总生物碱的提取纯化及含量测定 [J], 张中华;赵亚兰;5.正交试验设计筛选黄连总生物碱的提取纯化工艺研究 [J], 熊玲;覃瑶;罗维早;肖坤全;王欣;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一、实验目的1. 了解黄连的化学成分及其检测方法。
2. 掌握高效液相色谱法检测黄连中有效成分含量的原理和方法。
3. 评价黄连药材的质量。
二、实验原理黄连是中药材中常用的清热燥湿、泻火解毒药物，其主要有效成分包括小檗碱、黄连碱和巴马汀等。
本实验采用高效液相色谱法（HPLC）对黄连中的有效成分进行定量分析，通过比较样品与标准品的峰面积，计算出黄连中有效成分的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 黄连药材：购自药店，经鉴定为黄连科植物。
- 标准品：小檗碱、黄连碱和巴马汀标准品。
- 甲醇、乙腈：色谱纯。
- 水为超纯水。
2. 实验仪器：- 高效液相色谱仪（HPLC）。
- 色谱工作站。
- 超声波清洗器。
- 电子天平。
- 旋转蒸发仪。
四、实验方法1. 样品制备：- 将黄连药材研磨成粉末，过筛。
- 取适量粉末，用甲醇溶液提取，超声处理。
- 提取液过滤，滤液旋转蒸发浓缩至近干。
- 用甲醇溶解残渣，定容至一定体积，得待测溶液。
2. 标准品溶液制备：- 分别精密称取小檗碱、黄连碱和巴马汀标准品适量，用甲醇溶解，制成每毫升含1mg的标准溶液。
3. 色谱条件：- 流动相：甲醇-水（体积比70:30）。
- 流速：1.0ml/min。
- 柱温：室温。
- 检测波长：265nm。
4. 实验步骤：- 启动高效液相色谱仪，设置实验参数。
- 分别注入标准品溶液和待测溶液，记录峰面积。
- 根据标准品的峰面积和浓度，计算出待测溶液中有效成分的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：- 以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
- 计算线性回归方程，相关系数R²应大于0.99。
2. 待测样品分析：- 按照实验方法，对黄连样品进行检测。
- 根据标准曲线，计算待测样品中有效成分的含量。
3. 结果分析：- 比较不同批次的黄连样品中有效成分的含量，评价其质量。
- 分析实验误差，找出原因并改进。
六、实验结论本实验采用高效液相色谱法对黄连中的有效成分进行定量分析，实验结果可靠，操作简便。
HPLC法研究黄连中表小檗碱等五种生物碱的含量
向莉;李盾
【期刊名称】《成都中医药大学学报》
【年(卷),期】2004(27)2
【摘要】目的对黄连中的各种生物碱进行全面分析,以开发生药资源。
方法用反相高效液相色谱法分离并测定四川味连中各生物碱的含量。
结果五种生物碱分离良好,小檗碱、黄连碱、巴马亭、药根碱、表小檗碱的含量分别为4.56％、2.43％、1.86％、1.21％、1.17％。
结论在研究黄连属植物中生物碱时,分析小檗碱和占总生物碱含量一半左右的其它四种生物碱均非常有必要,可为黄连进行有效的品质评价提供理论依据。
【总页数】3页(P46-48)
【关键词】HPLC法;黄连;表小檗碱;生物碱;含量测定;反相高效液相色谱法
【作者】向莉;李盾
【作者单位】暨南大学医学院第二附属医院;深圳市人民医院药学部
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71
【相关文献】
1.RP-HPLC法同时测定黄连中四种原小檗碱型生物碱的含量 [J], 袁久荣;魏英勤;袁浩;徐娟;容蓉
2.HPLC测定连栀矾溶液中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和盐酸小檗碱的含量 [J],
袁学刚;王战国;胡慧玲;杨向东;邹亮;余腾江;刘巧
3.HPLC法测定黄连中3种原小檗碱型生物碱的研究 [J], 刘娜;管淑玉;徐鹏;杨然存;于阿娟
4.HPLC法测定黄连、黄柏及其中成药中小檗碱型生物碱的含量 [J], 赵陆华;蔡星瀛;董善士;林似兰;安登魁
5.HPLC法比较不同工艺制备的黄连解毒汤及日本汉方黄连解毒汤中的生物碱含量[J], 沈嘉;孙春梅;徐荣源;王颖
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谈一测多评法测定黄连及其炮制品中6种生物碱本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！黄连为毛茛科(Ranunculaceae)黄连属CoptisSalisb.植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao 或云连Coptis teeta Wall. 的加工品，据文献报道，其化学成分主要为生物碱类物质。
黄连的广泛利用与其所含各种生物碱的药理作用有密切的关系，且研究表明，黄连的药理作用并不是某单一生物碱作用的结果，如黄连中小檗碱具有较强的抗炎作用，但是黄连水提液的最低抑菌能力要强于小檗碱，说明黄连中含有其他抗菌或对抗菌有协同作用的成分。
所以，只有对其主要的多个生物碱(如小檗碱、黄连碱、非洲防己碱、表小檗碱、巴马汀等)的质量分数进行全面控制，才能保证药材的质量。
但对照品来源限制了多个生物碱的含量控制。
有研究者提出了一测多评的多指标质控模式，即在多指标质量控制时，利用中药有效成分内在函数关系和比例关系，以药材中对照品廉价易得的典型成分为内标，建立该成分与其他成分间的相对校正因子，再通过校正因子同步计算出其他成分的量。
在方法实施时，可在只有一个对照品的情况下，实现这些成分的同步测定，并成功应用于薄荷，五味子，白芷、丹参、赤芍、淫羊藿、连翘、黄芩、黄连、人参和枳实等药材的质量控制，以及热毒宁注射液、复方丹参、清开灵注射液等中成药的质量控制。
其中黄连药材的一测多评方法被《中国药典》2010 年版采用，但只对其中 4 种生物碱进行了控制。
同时测定黄连中6 种生物碱更有利于黄连药材质量的控制。
本研究采用一测多评的方法同时检测黄连中6 种生物碱的量，相较于《中国药典》方法增加指标成分的种类，不受对照品来源的限制，更有利于黄连及其炮制品的质量控制。
HPLC法测定不同产地黄连饮片中生物碱的含量罗文汇;李养学;胥爱丽;孙冬梅【摘要】目的考察不同产地黄连饮片中生物碱的含量.方法采用高效液相色谱法测定不同产地黄连饮片中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱4种生物碱的含量,以乙腈-0.1%磷酸溶液(50:50)(每100Ll加十二烷基磺酸钠0.1g)为流动相,Agilent ZORBAx Eclipse XDB C18柱(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,流速为1.0L/min,柱温为35℃,检测波长为345nm.结果盐酸小檗碱在0.096～0.480 μg范围内呈线性关系,回收率为97.95%,RSD为1.03%.结论本法测定黄连饮片中4种生物碱含量简单、快速、准确、重现性好,符合含量测定建立的要求,可以为判断黄连饮片质量的方法之一.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2010(008)030【总页数】2页(P223-224)【关键词】黄连饮片;表小檗碱;黄连碱;巴马汀;小檗碱;高效液相色谱法【作者】罗文汇;李养学;胥爱丽;孙冬梅【作者单位】广东省中医研究所,510095【正文语种】中文【中图分类】R282.710.3黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Fanch.、三角叶黄连Coptis deltoideaC.Y.Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta Wall.的干燥根茎。
具有清热燥湿，泻火解毒的功效，用于湿热痞满，呕吐吞酸，泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛，心烦不寐，心悸不宁，血热吐衄，目赤，牙痛，消渴，痈肿疔疮；外治湿疹，湿疮，耳道流脓。
黄连有效成分为多种生物碱[1]。
本文采用高效液相色谱法以盐酸小檗碱为对照，分别计算表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量，比较了8个产地黄连饮片，为更好的控制黄连饮片质量提供了依据。
1 仪器与试药Agilent 1200高效液相色谱仪（美国）；Mettler-Toledo XS205DU电子分析天平（瑞士）；Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱。
RP-HPLC测定三种黄连中的生物碱含量崔国辉;袁汉尧;周克元【摘要】目的建立反相高效液相色谱法测定黄连中的原小檗碱型生物碱含量的方法;比较云南黄连、北美黄连、四川黄连生物碱含量的差别.方法采用安捷伦C18色谱柱、乙腈-水为流动相、345 nm检测盐酸小檗碱、盐酸巴马亭、盐酸药根碱三种生物碱标准品的出峰时间以及三种黄连三种生物碱含量的多少.并对其进行精密度试验、样品稳定性试验、重现性试验、回收率试验.结果云南黄连、北美黄连、四川黄连三种黄连三种生物碱的含量分别为5.84%、1.26%、0.88%;6.15% 、1.35% 、0.95%和5.78%、1.38%、1.06%.加回收率分别为103.8%、103.8%、117.4%.结论云南黄连、北美黄连、四川黄连生物碱含量的差别没有统计学意义,本方法检测黄连中生物碱含量的方法快速简便,结果准确、可靠,重现性好.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2010(021)016【总页数】3页(P4-6)【关键词】黄连;高效液相色谱;原小檗碱型生物碱【作者】崔国辉;袁汉尧;周克元【作者单位】广东医学院检验学院临检教研室,广东,湛江,524023;广东医学院检验学院临检教研室,广东,湛江,524023;广东医学院检验学院临检教研室,广东,湛江,524023【正文语种】中文【中图分类】R284.1黄连是毛茛科植物黄连(Coptis chinensis franch)的干燥根茎,文献报道,它含有小檗碱、巴马亭、药根碱、黄连碱等多种原小檗碱型生物碱。
祖国医学记载其具有清热、解毒的作用,很早就用于消化系统的治疗和研究。
例如鲁劲松等[1]研究发现黄连总生物碱(TA)通过抑制胃炎时黏膜细胞的凋亡从而对幽门螺旋杆菌脂多糖(Helicobacterpylori,LPS)引起的大鼠胃部炎症有保护作用。
而黄连中的主要成分小檗碱可以诱导人结肠癌细胞株增殖抑制[2]。
利用高效液相色谱可以将黄连中主要的生物碱成分进行分离,可以用于黄连的质量控制以及主要成分含量的测定[3-4],但也存在很多问题,诸如分离差、峰型对称性差、色谱柱寿命短和试剂消耗大的问题。
实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
O ONHCHOOOOCH3OCH3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OOOCH3OCH3小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
N+H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。
讨论HPLC法测定黄连中生物碱的含量引言黄连为多年生毛茛科草本植物，药用部分主要取自黄连、三角叶黄连、峨嵋山野连或云连的根茎。
野生黄连主要产于四川、云南、湖北，现今多采用荫棚栽培。
秋季采挖，除去须根和泥沙，干燥。
黄连作为临床常用药物，用于治疗湿热痞满、呕吐吞酸、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、心烦不寐、血热吐衄、目赤、牙痛、消渴、痈肿疔疮;外治湿疹、湿疮、耳道流脓等。
此外，黄连还具有很多药理作用譬如：抗病毒作用、抗阿米巴作用、抗炎、抗腹泻作用、对心血管作用、降血糖作用、降血脂作用、抗氧化作用、对血液系统的影响、抗溃疡作用。
由于黄连的种类与炮制方法都非常多，地理分布也比较广泛，因此作为药材它们的质量不易控制。
黄连的主要药用成份生物碱的含量的准确测定对评价不同产地黄连与质量监控具有重要意义。
黄连生物碱含量测定的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、薄层扫描法(TLCS)与紫外分光光度法(UV)等，它也是一味具有广泛药效作用的中药，在国内外很多种疾病的治疗都用到了它，且黄连新的药效又不断被发现。
尤其是其是在抗癌、降血糖和改善心脑血管功能等方面均具有较好的药效，越来越受到人们的重视，因此，对黄连进行深入研究，对黄连中的各种生物碱进行全面的分析，以开发生药资源，扩大其药效作用，将有很大的社会效益和广泛的开发前景。
1 实验部分1.1 仪器与试剂日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪、KQ-250DE型数控超声波清洗器、HH数显恒温水浴锅、上海博讯电热鼓风干燥箱GZX-9070MBE、BL电子分析天平FA2204N、容量瓶(10ml、25ml)、烧杯、玻璃棒、移液管、漏斗、微孔滤膜(0.45m)、移液枪;盐酸小檗碱化学对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号：110713-200208)纯度为98%，黄连(味连、过120网目筛)、乙腈均为色谱纯，十二烷基硫酸钠、甲醇、磷酸二氢钾、磷酸、盐酸均为分析纯、水为蒸馏水。
1.2 对照品溶液的制备对照品盐酸小檗碱在105℃下的烘箱中干燥至恒重，精密称取对照品约15.0mg，用甲醇溶解并定容到25.00ml，得对照品溶液的浓度为0.06mgml-1。
HPLC法测定黄连及炮制品中4种生物碱的含量
刘峰;张振秋;赖静怡;胡北
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2010(032)011
【摘要】目的:测定10个省市市售黄连及8种炮制品中4种生物碱的含量.方法:采用Phenomoil-C18 BDS(250 mm×4.6mm,5 μm)色谱柱;流动相为乙腈-水(45:55,内含磷酸二氢钾0.34 g,十二烷基硫酸钠0.17 g);检测波长:345 nm;流速:1.0
mL/min;柱温:25℃.结果:盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸黄连碱和盐酸药根碱4种生物碱可以完全分离,不同炮制品生物碱含量的顺序为酒制、醋制、姜制、萸制、土制、胆制、盐制和炭制.结论:本法灵敏度高,重现性好,可用于黄连等含小檗碱型生物碱中药材及制剂的质量控制.
【总页数】4页(P1925-1928)
【作者】刘峰;张振秋;赖静怡;胡北
【作者单位】辽宁中医药大学,药学院,辽宁大连116600
【正文语种】中文
【中图分类】R283
【相关文献】
1.RP-HPLC法测定黄连及酒黄连中3种生物碱的含量 [J], 罗小泉;吴国庆;河海峰
2.HPLC法测定黄连药材及其炮制品中主要生物碱的含量 [J], 阳勇;李铁刚;朱晶晶;
钟国跃;王欣;王智民;武小赟;罗维早
3.HPLC法测定黄连药材及其炮制品中主要生物碱的含量 [J], 阳勇;李铁刚;朱晶晶;钟国跃;王欣;王智民;武小赟;罗维早;
4.HPLC法测定黄连药材及其炮制品中六种生物碱的含量 [J], 阳勇;罗维早;孙建彬;王欣;花雷;李隆云;覃瑶
5.黄连不同炮制品中3种生物碱含量的高效液相色谱法测定 [J], 宋平顺;卫玉玲;赵建邦;丁永辉
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
讨论HPLC法测定黄连中生物碱的含量
引言
黄连为多年生毛茛科草本植物，药用部分主要取自黄连、三角叶黄连、峨嵋山野连或云连的根茎。
野生黄连主要产于四川、云南、湖北，现今多采用荫棚栽培。
秋季采挖，除去须根和泥沙，干燥。
黄连作为临床常用药物，用于治疗湿热痞满、呕吐吞酸、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、心烦不寐、血热吐衄、目赤、牙痛、消渴、痈肿疔疮;外治湿疹、湿疮、耳道流脓等。
此外，黄连还具有很多药理作用譬如：抗病毒作用、抗阿米巴作用、抗炎、抗腹泻作用、对心血管作用、降血糖作用、降血脂作用、抗氧化作用、对血液系统的影响、抗溃疡作用。
由于黄连的种类与炮制方法都非常多，地理分布也比较广泛，因此作为药材它们的质量不易控制。
黄连的主要药用成份生物碱的含量的准确测定对评价不同产地黄连与质量监控具有重要意义。
黄连生物碱含量测定的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、薄层扫描法(TLCS)与紫外分光光度法(UV)等，它也是一味具有广泛药效作用的中药，在国内外很多种疾病的治疗都用到了它，且黄连新的药效又不断被发现。
尤其是其是在抗癌、降血糖和改善心脑血管功能等方面均具有较好的药效，越来越受到人们的重视，因此，对黄连进行深入研究，对黄连中的各种生物碱进行全面的分析，以开发生药资源，扩大其药效作用，将有很大的社会效益和广泛的开发前景。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪、KQ-250DE型数控超声波清洗器、HH数显恒温水浴锅、上海博讯电热鼓风干燥箱GZX-9070MBE、BL电子分析天平FA2204N、容量瓶(10ml、25ml)、烧杯、玻璃棒、移液管、漏斗、微孔滤膜(0.45m)、移液枪;盐酸小檗碱化学对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号：110713-200208)纯度为98%，黄连(味连、过120网目筛)、乙腈均为色谱纯，十二烷基硫酸钠、甲醇、磷酸二氢钾、磷酸、盐酸均为分析纯、水为蒸馏水。
1.2 对照品溶液的制备
对照品盐酸小檗碱在105℃下的烘箱中干燥至恒重，精密称取对照品约15.0mg，用甲醇溶解并定容到25.00ml，得对照品溶液的浓度为
0.06mgml-1。
1.3 供试品溶液的制备
精密称取黄连粉末样品(过120目筛，80℃干燥)约50mg，加盐酸-甲醇(1：100)溶液45ml，60℃水浴锅中温浸15min，超声处理(功率250W，频率40KHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，用普通滤纸滤过，取滤液，用0.45m滤膜再次过滤，再定容与25ml容量瓶，即得供试品溶液。
1.4 液相色谱分析条件
液相色谱分析条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂;以乙腈、0.05molL-1磷酸二氢钾溶液(V：V=50：50;每100ml中加十
二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0)为流动相;检测波长为345nm;流速：1.0mlmin-1;柱温：30℃;进样量：20L。
理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5 000。
在此色谱分析条件下，待色谱基线走平后，分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各20L，注入液相色谱仪，测定。
1.5 阴性对照试验
按照供试品溶液的制备方法制备不含黄连提取液的空白对照溶液，在上述相同的色谱分析条件下，分别准确吸取对照品溶液、空白对照溶液、供试品溶液各20L，分别注入液相色谱仪。
1.6 提取工艺的研究实验
1.6.1 温浸时间的影响。
精密称取13份黄连粉末样品(过120目筛，80℃干燥)均约50mg，分别加入盐酸甲醇(1：100)溶液45ml，浸泡5min后，分别放入60℃水浴锅中温浸提取，温浸时间分别从0、5、10、15⋯⋯60min，然后各样品溶液进行超声处理(功率250W)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，普通滤纸滤过，取滤液，再用0.45m滤膜过滤，再用25.00ml容量瓶定容到25.00ml，即得提取样品。
测量各样品生物碱的含量，确定最佳提取时间。
1.6.2 温浸温度的影响。
精密称取5份黄连样品粉末(过120目筛，80℃干燥)重约50mg，分别加入盐酸甲醇(1：100)溶液45ml，分别在25℃、40℃、60℃、80℃、100℃水浴锅中温浸提取15min，然后各样品溶液进行超声处理(功率
250W，频率40KHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀并用普通滤纸滤过，取续滤液，再用0.45m滤膜过滤，再定容于25.00ml容量瓶，即得提取样品。
测量各样品生物碱的含量，确定最佳提取温浸温度。
2 结果与分析
2.1 色谱分析条件
在本实验选择的色谱条件下分别检测对照样品溶液与样品溶液，测得色谱图。
样品色谱图、对照品色谱图来看，结果表明该色谱条件适合黄连样品分析检测。
2.2 阴性对照实验结果
将空白溶液、供试品溶液、对照品溶液用进样器各抽取20l，分别注入液相色谱仪。
色谱分析实验。
可以看出：空白溶液对应的曲线a，在色谱图中没有出现明显的色谱峰;黄连样品曲线b中最大峰与曲线c的最大峰保留时间一致，表明，黄连样品中采用该提取方法能提取到小檗碱，且小檗碱在提取物中含量较高，且从峰形来看，其它成分对小檗碱的定量测定无干扰。
2.3 温浸时间分析结果
黄连提取液中盐酸小檗碱的含量与水浴温浸提取时间的检测结果。
随着水浴温浸提取时间的增加提取液中小檗碱的含量也快速增加，当温浸提取时间到15min时小檗碱的含量也达到最高值，温浸提取时间继续增加，提取液中小檗的含量趋平且略有下降。
因此，提取黄连中生物碱的最佳温浸提取时间确定为15min。
2.4 最佳提取温度
不同提取水浴温度下提取液中小檗碱的含量检测结果如图4所示。
结果表明：随着水浴温度升高，提取液中小檗碱的含量也快速升高，当水浴温度升高到60℃时，小檗碱的含量达到最高，继续升高水浴温度后，小檗碱的含量含量反而逐渐降低，因此，提取黄连中生物碱的最佳温浸提取温度确定为60℃。
2.5 标准曲线的绘制将配制好的浓度为0.06mgml-1盐酸小檗碱标准对照品溶液分别进样5l，8l，10l，15l，18l，20l，以进样量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(A)，绘制标准曲线，检测结果与标准曲线。
标准曲线的回归方程为y=179842x-298324，R2=0.9911。
由此可见在该检测方法下，小檗碱含量在0.3～1.2g范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.5 标准曲线的绘制
将配制好的浓度为0.06mgml-1盐酸小檗碱标准对照品溶液分别进样5l，8l，10l，15l，18l，20l，以进样量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(A)，绘制标准曲线，检测结果与标准曲线。
标准曲线的回归方程为y=179842x-298324，R2=0.9911。
由此可见在该检测方法下，小檗碱含量在0.3～1.2g范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.6 加样回收试验结果
精密称取已测含量的黄连粉末供试品9份各50mg，按1.3供试品溶液制备方法提取液，并定容到25ml后，摇匀，各精密量取5ml，其中1、2、3号各精密加入用甲醇配置的盐酸小檗碱对照品溶液(盐酸小檗碱浓度0.06mgml-1)1ml，4、5、6号各加入上述对照品溶液2ml，。
