谷胱甘肽的简便测定法

一、实验背景谷胱甘肽（Glutathione，GSH）是一种非蛋白巯基化合物，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，广泛存在于生物体内。

近年来，研究表明谷胱甘肽具有多种生物学功能，如抗氧化、解毒、免疫调节等。

本实验旨在探究谷胱甘肽的抗氧化活性，为其在医药、食品等领域的应用提供理论依据。

二、实验材料与方法1. 实验材料（1）谷胱甘肽标准品（纯度≥98%）（2）维生素E标准品（纯度≥98%）（3）FeSO4·7H2O（4）EDTA-Na2（5）无水乙醇（6）蒸馏水（7）721分光光度计（8）电子天平2. 实验方法（1）标准曲线绘制①准确称取维生素E标准品10mg，置于100mL容量瓶中，加入无水乙醇溶解，定容至刻度，配制成100μg/mL维生素E标准溶液。

②分别取1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL维生素E标准溶液于10mL容量瓶中，加入0.1mol/L FeSO4·7H2O溶液1.0mL，EDTA-Na2溶液1.0mL，混匀。

室温下放置10min。

③以蒸馏水为空白，于510nm波长处测定吸光度。

④以维生素E浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

（2）谷胱甘肽抗氧化活性测定①准确称取一定量的谷胱甘肽标准品，加入无水乙醇溶解，配制成一定浓度的谷胱甘肽溶液。

②取1.0mL谷胱甘肽溶液于10mL容量瓶中，按照维生素E标准曲线绘制方法进行实验。

③以蒸馏水为空白，于510nm波长处测定吸光度。

④根据标准曲线计算谷胱甘肽的抗氧化活性。

三、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以维生素E浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：y=0.066x+0.0015，R²=0.998。

2. 谷胱甘肽抗氧化活性测定取1.0mL谷胱甘肽溶液进行实验，测定吸光度为0.068。

根据标准曲线计算，谷胱甘肽的抗氧化活性为80μg/mL。

四、结论本实验结果表明，谷胱甘肽具有一定的抗氧化活性，其抗氧化活性为80μg/mL。

土壤谷胱甘肽测定
土壤谷胱甘肽测定是一种分析土壤中谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量的方法。

谷胱甘肽是一种重要的抗氧化剂，对于维持土壤中微生物代谢活性和土壤生态系统的稳定具有重要作用。

谷胱甘肽测定可以通过不同的方法进行，常用的方法包括光谱法、显色法和高效液相色谱法等。

光谱法是一种简便快捷的方法，通过分析土壤中谷胱甘肽的光吸收特性来测定其含量。

在特定波长下，谷胱甘肽分子会吸收一定量的光线，通过测量吸收光的强度可以间接测定谷胱甘肽的含量。

显色法是一种常用的定性定量方法，通过化学反应使谷胱甘肽与某些试剂形成可见色素，然后通过比色测定色素的强度来判断谷胱甘肽的含量。

高效液相色谱法是一种精确和灵敏度高的测定方法，通过将土壤中的谷胱甘肽提取出来，并使用高效液相色谱仪进行分离和定量分析。

这种方法可以准确测定谷胱甘肽的含量，并且可以同时测定土壤中其他相关成分的含量。

土壤谷胱甘肽测定可以帮助研究者了解土壤中谷胱甘肽的含量和变化情况，进而评估土壤的养分供应能力、抗氧化能力以及土壤生态系统的稳定性。

这对于土壤质量评估、环境保护和农业可持续发展具有重要意义。

一种简便廉价的谷胱甘肽测定法
蓝金贵;罗登柏;曹巍
【期刊名称】《化学与生物工程》
【年(卷),期】2004(21)4
【摘要】报道了一种快速、简便和廉价的谷胱甘肽(GSH)含量测定的新方法.利用GSH的还原性将磷钼杂多酸还原成磷钼杂多蓝,在710 nm最大吸收波长处测其吸光度,吸光度与GSH的浓度在3.3×10-7～1.3×10-4mol·L-1范围内呈线性关系,相关系数r=0.9982,方法检测限为1.6×10-7 mol·L-1,相对标准偏差RSD =
1.1 %(n=6),回收率为97.1 %～103.5% .该法应用于药品中GSH含量的直接测定,结果满意.
【总页数】2页(P55-56)
【作者】蓝金贵;罗登柏;曹巍
【作者单位】中南民族大学化学与生命科学学院,湖北,武汉,430074;中南民族大学化学与生命科学学院,湖北,武汉,430074;中南民族大学化学与生命科学学院,湖北,武汉,430074
【正文语种】中文
【中图分类】Q51;Q503
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氧化型谷胱甘肽测定方法引言：氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione, GSSG）是一种重要的抗氧化物质，它在细胞内起到清除自由基和保护细胞免受氧化损伤的作用。

因此，准确测定氧化型谷胱甘肽的含量对于了解细胞氧化状态和维持细胞正常功能具有重要意义。

本文将介绍几种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。

一、梅尔二硫代苯酚法梅尔二硫代苯酚法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。

该方法利用氧化型谷胱甘肽与2,2'-二硫代苯酚反应生成深黄色化合物，通过比色法测定其吸光度来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。

该方法简单、快速，且具有较高的灵敏度和准确性。

二、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。

该方法利用高效液相色谱仪对氧化型谷胱甘肽进行分离和测定。

首先将样品中的氧化型谷胱甘肽与还原剂还原生成还原型谷胱甘肽，然后通过高效液相色谱仪进行分析。

该方法具有分离效果好、灵敏度高、准确性高的优点，但操作复杂，需要专门的仪器设备。

三、酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法是一种基于酶标记技术的氧化型谷胱甘肽测定方法。

该方法利用特异性抗体与氧化型谷胱甘肽结合，然后通过酶标记的二抗与抗体结合，最后通过底物的酶促反应生成产物，通过测定产物的光吸光度来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。

该方法具有高灵敏度、高特异性和较强的抗干扰能力，但需要较长的操作时间。

四、电化学法电化学法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。

该方法利用电极对氧化型谷胱甘肽进行氧化还原反应，并通过测定电流的变化来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。

该方法具有快速、准确、灵敏度高的优点，但需要专门的电化学仪器设备和操作技术。

结论：氧化型谷胱甘肽测定方法有多种选择，每种方法都有其特点和适用范围。

选择合适的测定方法需要根据实际需求和条件来决定。

无论采用哪种方法，都需要严格控制实验条件和操作步骤，以确保测定结果的准确性和可靠性。

希望本文介绍的几种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法对读者有所帮助。

谷胱甘肽（GSH）含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。

谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸（DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG），2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm 处具有最大光吸收。

因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号，按如下表格加入各试剂，反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度，制作标准曲线；2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g，加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取，并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml，8000rpm离心10min,取上清液；b、取上述上清液2ml显色，操作同标准曲线。

3.结果计算：GSH含量（ug/Gfw）= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注：Cx---2ml样品中GSH含量（ug），即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml)；Vs----显色时所取样的体积(ml)；FW---样品鲜重（g）。

五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时，视线要垂直于移液管且与液面凹面水平，不能斜视，以免量取试剂不准确。

2.在提取样品时，最好沉淀出去蛋白质，以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。

3.在研磨叶片时，为方便研磨，刚开始时加入少量的提取液。

食用菌中谷胱甘肽的测定谷胱甘肽是一种重要的抗氧化物质，被广泛应用于食品工业中。

食用菌是一类含有高丰富谷胱甘肽的食材，因此测定食用菌中谷胱甘肽的含量具有重要的意义。

本文将介绍几种常用的测定食用菌中谷胱甘肽的方法。

一、硫巴比妥酸法测定谷胱甘肽含量硫巴比妥酸法是目前测定谷胱甘肽含量最常用的方法之一。

该方法的原理是谷胱甘肽与硫巴比妥酸在碱性条件下反应生成黄色产物，通过测定产物的吸光度可以间接测定谷胱甘肽的含量。

具体操作步骤如下：1. 将食用菌样品粉碎并称取适量，加入酸性溶液中，破坏细胞结构释放出谷胱甘肽。

2. 加入碱性溶液和硫巴比妥酸，使谷胱甘肽与硫巴比妥酸反应生成黄色产物。

3. 使用分光光度计测定产物的吸光度，利用标准曲线计算样品中谷胱甘肽的含量。

二、高效液相色谱法测定谷胱甘肽含量高效液相色谱法是一种常用的分离和定量化合物的方法。

该方法的原理是利用色谱柱对样品中的谷胱甘肽进行分离，通过检测谷胱甘肽的峰面积或峰高来定量谷胱甘肽的含量。

具体操作步骤如下：1. 将食用菌样品制备成适宜的提取液，经过离心等处理步骤，获得待测样品。

2. 使用高效液相色谱仪，将待测样品注入进样器，经过一定的流动相条件下，在色谱柱中进行分离。

3. 通过检测谷胱甘肽的峰面积或峰高，利用标准曲线计算样品中谷胱甘肽的含量。

三、氧化还原法测定谷胱甘肽含量氧化还原法是一种直接测定谷胱甘肽含量的方法。

该方法的原理是利用谷胱甘肽与还原剂在适宜的条件下发生氧化还原反应，通过测定反应前后还原剂的含量变化来确定谷胱甘肽的含量。

具体操作步骤如下：1. 将食用菌样品制备成适宜的提取液，通过离心等处理步骤，获得待测样品。

2. 将待测样品与还原剂在适宜的条件下反应，使谷胱甘肽发生氧化还原反应。

3. 通过测定反应前后还原剂的含量变化，计算谷胱甘肽的含量。

在测定食用菌中谷胱甘肽的含量时，需要注意样品的制备过程，确保提取到的谷胱甘肽是代表样品中真实含量的。

同时，选择合适的测定方法，准确、快速地测定谷胱甘肽含量，有助于评估食用菌的品质和营养价值。

谷胱甘肽（GSH）含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。

谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸（DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG），2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm 处具有最大光吸收。

因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号，按如下表格加入各试剂，反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度，制作标准曲线；2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g，加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取，并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml，8000rpm离心10min,取上清液；b、取上述上清液2ml显色，操作同标准曲线。

3.结果计算：GSH含量（ug/Gfw）= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注：Cx---2ml样品中GSH含量（ug），即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml)；Vs----显色时所取样的体积(ml)；FW---样品鲜重（g）。

五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时，视线要垂直于移液管且与液面凹面水平，不能斜视，以免量取试剂不准确。

2.在提取样品时，最好沉淀出去蛋白质，以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。

3.在研磨叶片时，为方便研磨，刚开始时加入少量的提取液。

实验五植物组织中⾕胱⽢肽含量的测定⾕胱⽢肽含量的测定⼀、实验⽬的1、了解⾕胱⽢肽在植物抗逆中作⽤。

2、了解⽬前⾕胱⽢肽含量的测定⽅法。

3、掌握⽐⾊法测定植物体⾕胱⽢肽含量的原理与技术。

⼆、实验原理还原性⾕胱⽢肽(GSH)作为⽣物体内最主要的⾮蛋⽩巯基以及含量最丰富的低分⼦多肽，是植物细胞重要的抗氧化剂之⼀，在植物抗逆过程中直接或间接地参与了许多植物的功能活动，是⼀个良好的表⽰氧化胁迫的指标。

⾕胱⽢肽(GSH)是由⾕氨酸、半胱氨酸和⽢氨酸结合⽽成的三肽，半胱氨酸上的巯基为其活性基团。

在巯基化合物的存在下，⽆⾊的DTNB将被转变成黄⾊的5-巯基-2-硝基苯甲酸。

由于5-巯基-2-硝基苯甲酸在412 nm处具有最⼤吸收，⽽且DTNB的吸收光谱并不造成⼲扰，所以可以⽤分光光度计进⾏测定。

即：GSH和TDBN在pH=7时⽣成黄⾊物质，其颜⾊深浅与GSH的浓度成线性关系。

三、实验材料、试剂与仪器1、实验材料：⼩麦叶⽚2、实验试剂：（1）GSH标准溶液〔0.01mg/ml GSH标准溶液（=亦即10µg/ml）〕：称取50mg 分析纯GSH，溶于蒸馏⽔中，并定容于100ml，即为0.5mg/ml 之标准母液，⽤稀释10倍（0.05mg/ml=亦即50µg/ml GSH）注：⽤时再稀释5倍即为10µg/ml；（2）5%偏磷酸；（3）0.2mol/L 磷酸钾缓冲液，pH7.0；（4）TDNB试剂：称取39.6mg⼆硫代双-⼆硝基苯甲酸（TDNB），⽤0.2mol/L磷酸钾缓冲液溶解并定容于100ml；（5）1mol/L NaOH溶液。

3、实验仪器：V-1000D型可见分光光度计；离⼼机；离⼼管；刻度试管；研钵；吸⽔纸适量；移液管等。

四、⽅法与步骤1、标准曲线的制作取7⽀刻度试管，编号，按表加⼊试剂：试剂（ml）试管号1 2 3 4 5 6 7GSH标准溶液（10µg/ml）0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0补蒸馏⽔到2ml 2 1.9 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0磷酸缓冲液 4 4 4 4 4 4 4DTNB试剂0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 GSH浓度（µg/2ml即每管含量）0 1 2 4 6 8 10将上述溶液混合均匀，在室温下显⾊5min。

还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的测定关键词：还原型谷胱甘肽GSH氧化型谷胱甘肽GSSG测定2009-04-24 00:00 来源：互联网点击次数：6147GSH和GSSG 参照Anderson等（1992）。

取0.5 g样品，加入3 mL冰冷的6%的偏磷酸（含1 mmol•L-1 EDTA ，pH 2.8），冰浴研磨，匀浆液以20,000 g，4 ℃离心15 min，取上清液来马上测定GSH和GSSG的含量或储存在-20 ℃下等待测定。

总的GSH和GSSG含量测定如下：200 μL提取液加 1.2 mL反应液包含400 μL反应液1（110 mmol•L-1 Na2HPO4•7H20，40 mmol•L-1NaH2PO4•H2O，15 mmol•L-1EDTA，0.3 mmol•L-15,5‘-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）DTNB，0.04% BSA）、320 μL反应液2 （1 mmol•L-1 EDTA，50 mmol•L-1 imidazole 咪唑solution and 0.02% BSA）、400 μL反应液3（5% Na2HPO4，pH 7.5的溶液稀释50倍）、80 μL 9.0 mmol•L-1 NADPH。

测定OD412下的吸收值。

GSSG 含量测定如下：200 μL提取液加入1 mL的2-2乙烯嘧啶（稀释50倍）在25°C下水浴1 h再测定OD412下的吸收值。

GSH的含量可以从总的GSH和GSSG含量中减去GSSG含量获得。

GSH测定方法：取样品0.5 g，加入预冷的5%磺基水杨酸2.5 ml和少许石英砂，充分冰预研磨，转入离心管中，于4℃下20,000×g离心20min，将上清液分装，液氮冷冻后于-20℃保存或直接进行抗氧化剂分析。

取50 μL上清液，用5% 磺基水杨酸定容至100 μL （即加入5% 磺基水杨酸50 μL），加入24 μL 1.84 mol•L-1三乙醇胺triethlene diamine以中和样液，加入50 μL 10% 乙烯吡啶Polyvinyl pyridine （用70% 乙醇配制），25℃水浴1 h，以除去GSH，到时加入706 mL 50 mmol•L-1磷酸缓冲液，pH 7.5，内含2.5 mmol•L-1 EDTA，加入20 μL 10 mmol•L-1 NADPH 和80 μL 12.5 mmol•L-1 DTNB（二硫硝基苯甲酸），混匀，25℃保温10 min，到时加入20μL 50 U•mL-1 GR，总体积为1 mL，立即混匀，读出3 min时的OD值。