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叶酸代谢酶基因筛查项目介绍近年来，不育不孕与新生儿出生缺陷发生率呈逐年上升趋势，引起了医疗及政府相关部门的高度重视。
中国疾病预防控制中心妇幼保健中心于2007年先后三次向全国妇幼保健院发出关于开展“妇幼保健遗传检测服务项目”的函，特别强调：“随着人类基因组计划和国际人类基因组单体型图计划的完成，在发达国家基因检测技术也逐渐成为健康医疗体系中的一部分，并已证明能有效降低个人患病风险，同时节约医疗开支”。
同时指出：“为了提升妇幼保健服务的技术含量，将最新的预防检测技术及时应用于妇幼保健服务。
”首期推出了以“孕期叶酸需求遗传检测”为代表的15项“妇幼保健遗传检测服务项目”。
卫生部于2 009年6月发出了关于《增补叶酸预防神经管缺陷项目管理方案》的通知，进一步加大了预防新生儿出生缺陷宣传和管理力度，对各级卫生部门提出了具体要求。
叶酸缺乏是导致新生儿出生缺陷的主要原因。
导致机体缺乏叶酸有两个方面的原因：一是叶酸摄入量不足，二是由于遗传（基因）缺陷导致机体对叶酸的利用能力低下（叶酸代谢通路障碍）。
科学研究证明，通过基因检测技术手段，对人体MTHFR基因及MTRR基因做检测，可以及早发现不同个体对叶酸的吸收利用水平，从而筛查出容易引起叶酸缺乏的高危人群，实现个性化增补叶酸（因人而异地确切给出叶酸补充计划和补充量），从而增强叶酸补充依从性，同时加强产前检查，以降低新生儿出生缺陷风险。
而现实生活中，有超过50%的女性是在无意中受孕的。
当知道受孕后，增补叶酸的关键期往往已滞后了2-3个月，不利于胎儿神经管缺陷的有效预防。
从另一方面，，叶酸增补不应仅仅局限在女性，男性补充叶酸有着同等重要的意义。
科学研究证明，男性体内缺乏叶酸，会导致精子质量降低，精液中精子携带的染色体数量异常，引起新生儿出生缺陷。
机体叶酸水平低下，也是引起不育不孕、自发性流产的重要原因之一。
因此，新婚夫妇准备怀孕前，至少应该做一项“孕期叶酸需求（女性）”及“高同型半胱氨酸血症（男性）”的基因检测，这样更有利于优孕。
药物与临床57药品评价 2019年第16卷第20期妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是妊娠前糖代谢正常，妊娠期才出现的糖尿病，妊娠合并糖尿病孕妇中90%以上为GDM，对母儿危害较大[1]。
目前已成为全国妇幼卫生系统的一个沉重负担，该病是在妊娠期首次发生和发现的糖尿病或出现的糖耐量受损、代谢紊乱，给母胎带来诸多不良影响，并增加了母胎死亡率，对母胎远期影响大，有GDM病史的女性患糖尿病和心血管疾病的风险更高[2]。
FIGO明确指出，目前在孕前、孕期及产后GDM的预防、诊断和管理，以及母儿近远期结局方面，还存在很大不足[3]，诸多学者从探索GDM的发病机制出发，以达到防治和管理GDM的目的。
已有研究[4-5]认为同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)在GDM的发病机制中起了重要作用，其机理主要为人体内调控MTHFR、MTRR的基因发生变异，从而造成叶酸代谢与利用能力不足增加Hcy的浓度，此外有研究[6]已报道与炎症反应也有关，而关于炎症因子在叶酸代谢能力障碍中是否发挥关键作用，此类国内外文献尚无报道，因此本研究拟检测分析GDM患者叶酸代谢能力障碍与超敏C反应蛋白(hypersensitive C -reactive protein,hs -CRP)之间的关系，为探明妊娠期糖尿病的发病机制提供理论依据。
1 材料与方法1.1 研究对象 选择2018年于邵阳市中心医院接受产检行口服葡萄糖耐量试验( oral glucose tolerance test,OGTT)试验及叶酸代谢能力基因检测的孕妇，被确诊为GDM的患者50例，孕24～28周，年龄(29.68±3.50)岁，排除妊娠前糖尿病、高血压、肝肾疾病等病史。
选择同期在我院产检时行OGTT试验及叶酸代谢能力基因检测的正常孕妇50例作为观察组，孕24～28周，年龄(28.75±2.09)岁。
文章编号：ＷＨＲ２０１８０３２０６４育龄期女性叶酸代谢基因与不良妊娠结局的关系分析李艳 贾丽丽山东省青岛西海岸新区妇幼保健计划生育服务二中心，山东青岛 ２６６６５５５【摘 要】目的：分析育龄期女性ＭＴＨＦＲ、ＭＴＲＲ基因多态性与不良妊娠结局的相关性。
方法：选择本院有不良妊娠结局的１７６例育龄期女性为观察组，另选同期体检正常的１８２例育龄期女性为对照组，应用ＰＣＲ ＲＦＬＰ法检测叶酸相关基因（ＭＴＨＦＲ、ＭＴＲＲ）多态性分布情况，并通过探讨其与叶酸、Ｈｃｙ水平的关系。
结果：ＭＴＲＲ６６ＡＡ型、ＭＴＨＦＲＣ６７７ＴＴ型血清中的叶酸含量均少于其他基因类型，且Ｈｃｙ水平也较其他基因类型高（犘＜０．０５）。
经Ｌｏｇｉｓｔｉｃ多因素分析发现，ＭＴＲＲ６６ＡＡ与ＭＴＨＦＲＣ６７７ＴＴ是导致孕妇不良妊娠结局发生的独立危险因素。
结论：叶酸代谢基因多态ＭＴＲＲ６６、ＭＴＨＦＲＣ６７７在不良妊娠结局的病理机制中发挥了重要的作用，能够明显增加不良妊娠结局的发生。
【关键词】叶酸代谢基因；不良妊娠结局；ＭＴＨＦＲ；ＭＴＲＲ 目前，大多数女性在备孕期和妊娠早期均会服用叶酸以减少自然流产、胎儿先天畸形等不良妊娠结局发生。
然而，在当前研究中，存在不良妊娠结局者的机体叶酸代谢状况及叶酸的作用机制尚未有确切统一的结论。
为此，本研究将重点探析育龄期女性叶酸代谢基因与不良妊娠结局的相关性。
１ 研究对象和方法１．１ 研究对象选择本院２０１６年１月至２０１７年１２月有不良妊娠结局的１７６例育龄期女性为观察组，其中３８例先天性心脏病、８２例反复自然流产、９例脑积水、３８例染色体异常、７例内脏移位、２例存在上述不良妊娠结局两种或以上；年龄均在２２～３８岁，均龄（２９．５３±３．８４）岁；另选同期无不良妊娠结局正常分娩的１８２例育龄期女性为对照组，年龄在２２～３７岁，均龄（２９．２５±３．５８）岁，两组年龄差异不明显（犘＞０．０５）。
叶酸代谢能力评估及亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性检测试剂盒性能验证许晔琼;赵一琳;高曼秋【期刊名称】《实用检验医师杂志》【年(卷),期】2024(16)1【摘要】目的对江西诺德医疗器械有限公司生产的叶酸代谢能力测定试剂盒进行性能验证,评估该试剂盒能否满足江苏省常熟地区患者对亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因A1298C(rs1801131)及C677T(rs1801133)两个多态性位点的检测需求。
方法收集10例临床样本进行测序,将结果作为“金标准”,同时采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)对标本的MTHFR基因多态性位点进行检测,与“金标准”结果比较,验证试剂盒的准确性。
选择测序确定的C677T多态性位点CC及TT基因型标本各1份,A1298C多态性位点AA及CC基因型标本各1例,重复测定5次以验证试剂盒的精密度。
同时对以上4份不同基因型的标本进行DNA浓度测定,根据试剂盒说明书中的性能描述,稀释至最低检出浓度5 mg/L,每例标本各检测3次,要求基因分型结果一致且符合测序分型结果,验证试剂盒的检测下限。
结果所有标本的MTHFR基因多态性位点检测结果与测序结果完全一致,准确率达到100%;对不同基因型的4例标本反复检测5次的结果完全一致,且循环阈值(Ct值)的变异系数(CV)≤5%;而稀释到检测下限的4例标本经过3次重复检测后,仍能准确进行基因分型。
结论采用MTHFR基因A1298C及C677T两个多态性位点检测试剂盒进行基因分型的结果准确、稳定、可靠,能满足实验室对MTHFR基因多态性检测的要求。
【总页数】5页(P73-77)【作者】许晔琼;赵一琳;高曼秋【作者单位】常熟市医学检验所【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.叶酸受体α在胃癌组织中的表达及其与叶酸、亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性以及胃癌生物学行为的关系2.叶酸代谢关键限速酶亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与宫颈癌的关系3.亚甲基四氢叶酸还原酶基因及甲硫氨酸合成酶基因多态性与口服叶酸治疗高同型半胱氨酸血症疗效的关系研究4.四氢叶酸与叶酸对亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性人群妊娠结局影响5.亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性在产前筛查前的性能验证因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
·论著·《中国产前诊断杂志（电子版）》 ２０２２年第１４卷第１期育龄女性叶酸代谢相关基因位点多态性研究陈延冰 梁杰 张艳霞（广东省妇幼保健院，广东广州 ５１１４４０）【摘要】 目的 利用基因检测技术，调查广东地区育龄妇女叶酸代谢相关基因多态性分布，筛查出机体叶酸利用能力有缺陷的高风险个体，为其叶酸增补方案提供科学理论指导。
方法 选取５３８６例育龄妇女作为研究样本，利用ＤＮＡ提取以及多重连接探针扩增（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｌｉｇａｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｂｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＭＬＰＡ）检测技术，检测亚甲基四氢叶酸还原酶（ｍｅｔｈｙｌｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＭＴＨＦＲ）叶酸代谢相关基因多态性分布。
结果 犕犜犎犉犚基因６７７位点ＣＣ、ＣＴ、ＴＴ基因型频率分别为５３．５％、３７．４％、９．１％；犕犜犎犉犚基因１２９８位点ＡＡ、ＡＣ、ＣＣ基因型的频率分别为５９．７％，３５．１％，５．２％。
结论 犕犜犎犉犚基因相关位点的检测可成功筛查出叶酸利用欠缺的高风险育龄妇女，为其叶酸增补方案提供科学量化指导。
【关键词】 叶酸代谢；亚甲基四氢叶酸还原酶；多态现象【中图分类号】 Ｒ３９４．３ 【文献标识码】 Ａ犇犗犐：１０．１３４７０／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｐｄ．２０２２．０１．００９犇犻狊狋狉犻犫狌狋犻狅狀狅犳狋犺犲犳狅犾犪狋犲犿犲狋犪犫狅犾犻狊犿犵犲狀犲狆狅犾狔犿狅狉狆犺犻狊犿犻狀狑狅犿犲狀狅犳犮犺犻犾犱犫犲犪狉犻狀犵犪犵犲犆犺犲狀犢犪狀犫犻狀犵，犔犻犪狀犵犑犻犲，犣犺犪狀犵犢犪狀狓犻犪犌狌犪狀犵犱狅狀犵犠狅犿犲狀犪狀犱犆犺犻犾犱狉犲狀犎犲犪犾狋犺犆犪狉犲犎狅狊狆犻狋犪犾，犌狌犪狀犵狕犺狅狌５１１４４０，犌狌犪狀犵犱狅狀犵，犆犺犻狀犪【犃犫狊狋狉犪犮狋】 犗犫犼犲犮狋犻狏犲 ｉｓｔｏｕｓｅｇｅｎｅｔｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｏｌａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎｗｏｍｅｎｏｆｃｈｉｌｄｂｅａｒｉｎｇａｇｅｉｎＧｕａｎｇｄｏｎｇ，ｓｅｌｅｃｔｈｉｇｈ ｒｉｓｋｇｒｏｕｐｏｆｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｗｈｅｒｅｔｈｅｂｏｄｙｃａｎｎｏｔｕｓｅｆｏｌｉｃａｃｉｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎｄｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｇｕｉｄａｎｃｅｆｏｒｗｏｍｅｎ’ｓｆｏｌｉｃａｃｉｄｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．犕犲狋犺狅犱狊 ｉｓｔｏｓｅｌｅｃｔａｒｅｓｅａｒｃｈｓａｍｐｌｅｏｆ５３８６ｃｈｉｌｄｂｅａｒｉｎｇａｇｅｗｏｍｅｎ，ａｎｄｔｏｄｅｔｅｃｔｆｏｌａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｒｅｌａｔｅｄｔｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＭＴＨＦＲ）ｕｓｉｎｇＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｘｌｉｇａｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｂｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＭＬＰＡ）ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．犚犲狊狌犾狋狊 ｓｈｏｗｓｔｈａｔｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＣＣ，ＣＴａｎｄＴＴａｔＭＴＨＦＲ６７７ｌｏｃｉｗｅｒｅ５３．５％，３７．４％，９．１％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＡＡ，ＡＣａｎｄＣＣａｔＭＴＨＦＲ１２９８ｌｏｃｉｗｅｒｅ５９．７％，３５．１％，５．２％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．犆狅狀犮犾狌狊犻狅狀 ｉｓｔｈａｔｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｌｏｃｉｏｆＭＴＨＦＲｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｓｅｌｅｃｔｈｉｇｈ ｒｉｓｋｇｒｏｕｐｗｉｔｈｔｈｅｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｕｓｉｎｇｆｏｌｉｃａｃｉｄ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎｄｑｕａｔｉｔａｔｉｖｅｇｕｉｄａｎｃｅｆｏｒｔｈｅｉｒｆｏｌｉｃａｃｉｄｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．【犓犲狔狑狅狉犱狊】 Ｆｏｌｉｃａｃｉｄｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ；Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＭＴＨＦＲ）；Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；Ｇｅｎｅｔｉｃ；Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ 《中国出生缺陷防治报告（２０１２）》中提到，我国出生缺陷发生率高达５．６％，叶酸在出生缺陷的防护起到关键作用。
叶酸代谢酶基因筛查项目介绍近年来，不育不孕与新生儿出生缺陷发生率呈逐年上升趋势，引起了医疗及政府相关部门的高度重视。
中国疾病预防控制中心妇幼保健中心于2007年先后三次向全国妇幼保健院发出关于开展“妇幼保健遗传检测服务项目”的函，特别强调：“随着人类基因组计划和国际人类基因组单体型图计划的完成，在发达国家基因检测技术也逐渐成为健康医疗体系中的一部分，并已证明能有效降低个人患病风险，同时节约医疗开支”。
同时指出：“为了提升妇幼保健服务的技术含量，将最新的预防检测技术及时应用于妇幼保健服务。
”首期推出了以“孕期叶酸需求遗传检测”为代表的15项“妇幼保健遗传检测服务项目”。
卫生部于2 009年6月发出了关于《增补叶酸预防神经管缺陷项目管理方案》的通知，进一步加大了预防新生儿出生缺陷宣传和管理力度，对各级卫生部门提出了具体要求。
叶酸缺乏是导致新生儿出生缺陷的主要原因。
导致机体缺乏叶酸有两个方面的原因：一是叶酸摄入量不足，二是由于遗传（基因）缺陷导致机体对叶酸的利用能力低下（叶酸代谢通路障碍）。
科学研究证明，通过基因检测技术手段，对人体MTHFR基因及MTRR基因做检测，可以及早发现不同个体对叶酸的吸收利用水平，从而筛查出容易引起叶酸缺乏的高危人群，实现个性化增补叶酸（因人而异地确切给出叶酸补充计划和补充量），从而增强叶酸补充依从性，同时加强产前检查，以降低新生儿出生缺陷风险。
而现实生活中，有超过50%的女性是在无意中受孕的。
当知道受孕后，增补叶酸的关键期往往已滞后了2-3个月，不利于胎儿神经管缺陷的有效预防。
从另一方面，，叶酸增补不应仅仅局限在女性，男性补充叶酸有着同等重要的意义。
科学研究证明，男性体内缺乏叶酸，会导致精子质量降低，精液中精子携带的染色体数量异常，引起新生儿出生缺陷。
机体叶酸水平低下，也是引起不育不孕、自发性流产的重要原因之一。
因此，新婚夫妇准备怀孕前，至少应该做一项“孕期叶酸需求（女性）”及“高同型半胱氨酸血症（男性）”的基因检测，这样更有利于优孕。
MTHFR C677T , MTHFR A1298C, MTRR A66G基因检测操作流程实验流程一、操作步骤适用仪器：普通PCR仪样本要求：EDTA抗凝剂的静脉全血（100µl），室温保存不超过7天，2～8℃保存不超过1个月，-20℃保存不超过3个月，反复冻融次数不超过5次；DNA的浓度应不低于5ng/μl，A260/ A 280应在1.6~2.0之间。
有血块的样本需经匀浆处理或用组织研磨仪研磨处理后再进行全血DNA的提取。
检验方法：（试剂盒中的检本测卡、阳性/阴性对照卡上标识解释如下：M表示突变型，WT表示野生型，C表示质控线，T表示检测线。
）A：样本DNA的制备试剂盒准备工作：1、清洗液BW-I：用50 ml量筒分别移取35 ml无水乙醇（分析纯）和35 ml异丙醇加入至清洗液BW-I试剂瓶中，颠倒混合均匀，在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期，备用。
2、清洗液BW-II：用50 ml量筒移取49 ml无水乙醇加入至清洗液BW-II试剂瓶中，颠倒混合均匀，在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期，备用。
3、蛋白酶K准备：取出蛋白酶K，室温解冻，涡旋混匀后备用。
4、磁性微粒准备：将磁性微粒涡旋混匀，保证均一。
实验操作步骤：1.将20 μl蛋白酶K溶液加入2 ml 离心管的管底。
依次加入100 μl全血、200 μl裂解液BL，用涡旋振荡器混合15 sec(以下简称涡旋混匀)，56 ℃水浴20 min。
2.向步骤1裂解处理的样品中依次加入300 μl结合液BI、25 μl的磁性微粒（移取前必须充分涡旋混匀），涡旋混匀，室温静置5 min。
磁性分离5 min，弃上清。
3.从磁性分离器上取出离心管，加入400 μl清洗液BW-I，涡旋混匀，磁性分离至上清澄清（期间上下颠倒数次，以清洗离心管管壁），弃上清；重复本步操作，以400μl清洗液BW-I重复清洗一次。
4.从磁性分离器上取出离心管，加入400 μl清洗液BW-II，涡旋混匀，磁性分离至上清澄清（期间上下颠倒数次，以清洗离心管管壁），弃上清（尽可能弃去所有的清洗液BW-II）。
