EB病毒检测技术进展及临床应用文稿演示

EB病毒检测及其临床应用的研究进展张旭【摘要】Diseases caused by Epstein-Barr virus (EBV) infection are increasing,such as organ transplantation-associated EBV infection. Epithelial cell source tumor is correlated with EBV infection,and it is characterized by recessive infection and is often ignored in clinic. With the development of determination methods for EBV infection,especially quantitative determination of EBV DNA,combined with the results of immunological determination,pathogens could be timely determined in early infection period. It is potential for the dynamic monitoring and prognosis evaluation of EBV-related tumors. This review focuses on the determination methods of EBV from home and abroad and the relationship between EBV-related determination and tumors.%目前临床上由EB病毒(EBV)感染引起的疾病越来越多,如器官移植伴EBV感染.上皮细胞源肿瘤与EBV感染密切相关,常表现为隐性感染,易被临床忽视.随着检验技术的不断成熟,尤其是EBV DNA的定量检测,结合常规的免疫学检测结果,不仅有利于在感染初期及时检出致病原,而且对EBV相关肿瘤的动态监测、预后评估也有积极的意义.文章就国内外EBV的检测方法和EBV相关肿瘤的研究进展作一综述.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2018(033)003【总页数】5页(P259-263)【关键词】EB病毒;检测方法;肿瘤;治疗【作者】张旭【作者单位】绵阳市404医院检验科,四川绵阳 621000【正文语种】中文【中图分类】R446.5EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一种嗜淋巴细胞的双链DNA病毒，属于疱疹病毒γ亚科。

EB病毒感染临床应用研究进展EB病毒感染是儿科比较常见的病毒感染性疾病，感染时其症状轻重不一，可累及全身多个系统，引发多种疾病，主要有传染性单核细胞增多症（ＩＭ）、慢性活动性EB病毒感染（ＣＡＥ－ＢＶ）和噬血淋巴组织细胞增生症（ＨＬＨ）。

很多时候能早期诊断，给临床治疗带来困难，本文就ＥＢ病毒感染相关疾病及临床检测研究进展综述如下。

EB病毒简介。

EB病毒属于疱疹病毒，γ亚科，于１９６４年在非洲儿童的霍奇金病组织培养中发现。

基本结构为核样物、衣壳和包膜３个部分。

EB病毒感染可以出现典型的ＩＭ体征及其他复杂的临床表现或隐性感染。

有文献报道，发展中国家儿童 EB病毒感染的高峰年龄在２～６岁，而发达国家多见于青少年，发病年龄在１０～２０岁。

Ｂ淋巴细胞是其感染的主要宿主细胞，感染的Ｂ淋巴细胞可表达一系列 EB病毒特异性抗原分子，诱导机体产生免疫反应。

近年发现ＥＢ病毒亦可感染上皮细胞、自然杀伤细胞等，引发相关的疾病。

EB病毒感染相关疾病。

①肿瘤性疾病ＥＢ病毒感染与某些肿瘤的发生和发展密切相关，如Ｂｕｒｋｉｔｔ′ｓ淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金病和成人Ｔ细胞淋巴瘤等。

近年来，越来越多的学者把研究重点转移到ＥＢ病毒感染与其他肿瘤之间的相关性，１９９３年，Ｔｏｋｕｎａｇａ等将胃癌细胞内存在 EB病毒者（以 EB病毒基因组中的ＥＢＥＲ阳性为标准）定义为 EB病毒相关胃癌（ＥＢＶａＧＣ）。

目前研究结果显示，约１０％的胃癌组织 EB病毒阳性，ＥＢ病毒感染在胃癌发生和发展中的作用也愈来愈受到重视。

有报道 EB病毒在子宫颈癌中也有表达。

有研究发现， EB病毒感染也与乳腺癌和肺癌等肿瘤发病有一定的相关性。

②慢性活动性 EB病毒感染 EB病毒感染多为急性感染，可无症状或表现为ＩＭ，但是在免疫力低下的患儿，ＥＢ病毒感染后可出现慢性或复发性ＩＭ样症状，伴随ＥＢ病毒抗体的异常改变，称为慢性活动性ＥＢ病毒感染（ＣＡＥＢＶ）。

目前ＣＡＥ－ＢＶ可分为两大类：一类为慢性ＥＢ病毒感染（ＣＥＢＶ），即由ＥＢ病毒引起的具有持续性或复发性ＩＭ样的临床表现，但不伴有异常升高的与ＥＢ病毒复制抗原相关的抗体滴度，预后良好；另一类为严重ＣＡＥＢＶ（ＳＣＡＥＢＶ），具有更严重的多系统并发症和血液学异常表现，以及异常升高的ＥＢ病毒相关抗原的抗体滴度，预后差。

分析仪的不精密度、正确度、携带污染率、临床可报告范围、仪器模式间比对、生物参考区间及仪器分类与人工分类比对等性能指标进行验证，得出以下结论：（１）该仪器精密度高、重复性好，本次精密度验证试验血常规各项指标的批内不精密度和总不精密度均符合评价标准，精密度良好。

（２）本检测系统室间质评成绩合格。

（３）携带污染率小，各项携带污染率均符合仪器的性能要求。

（４）各检测指标的线性试验结果表明，检测系统具有良好的线性，ａ值均在１．００±０．０５范围内，ｒ２≥０．９５，符合要求，各指标线性范围有效。

（５）仪器自动模式与手动模式之间比对结果符合要求，验证通过。

（６）检测系统结果均至少有９５％数据分布在现行生物参考区间内，验证通过。

（７）仪器分类与人工分类比对结果符合要求，验证通过。

综上所述，本室西门子ＡＤＶＩＡ　２１２０ｉ全自动五分类血细胞分析仪通过了对不精密度、可比性、线性范围、临床可报告范围、携带污染率、生物参考区间、不同进样模式间比对、仪器分类与手工分类比对等性能指标的验证，性能良好，可用于临床标本的检测。

参考文献［１］中国合格评定国家认可委员会．ＩＳＯ１５１８９医学实验室质量和能力认可准则［Ｓ］．北京：中国合格评定国家认可委员会，２０１２．［２］Ｈｅｄｌｅｙ　ＢＤ，Ｋｅｅｎｅｙ　Ｍ，Ｃｈｉｎ－Ｙｅｅ　Ｉ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｉｔｉａｌ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｅｖａｌ－ｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＵｎｉＣｅｌ（Ｒ）ＤｘＨ　８００Ｃｏｕｌｔｅｒ（Ｒ）ｃｅｌｌｕｌａｒ　ａｎａｌｙｓｉｓｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｈｅｍａｔｏｌ，２０１１，３３（１）：４５－５６．［３］叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程［Ｍ］．３版．南京：东南大学出版社，２００６：４９６．［４］Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ　ｆｏｒ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ．ＥＰ５－Ａ２Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｄｅｖｉｃｅｓ［Ｓ］．Ｗａｙｎｅ，ＰＡ，ＵＳＡ：ＮＣＣＬ，１９９９．［５］中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会．ＷＳ／Ｔ４０６－２０１２临床血液学检验常规项目分析质量要求［Ｓ］．北京：中国标准出版社，２０１２．［６］Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ　ｆｏｒ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｓｔａｎｄａｒｄｓ．ＥＰ６－Ａ　Ｅ－ｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｏｆ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ：ａ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ［Ｓ］．Ｗａｙｎｅ，ＰＡ，ＵＳＡ：ＮＣＣＬＳ，２００３．［７］Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ　ｆｏｒ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｓｔａｎｄａｒｄｓ．ＥＰ１０－Ａ２Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｓ］．Ｗａｙｎｅ，ＰＡ，ＵＳＡ：ＮＣＣＬＳ，２００２．［８］王治国．临床检验方法确认与性能验证［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００９．（收稿日期：２０１５－１０－２６）△　通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｘｙａｎｇ１７＠１６３．ｃｏｍ。

世界最新医学信息文摘 2018年第18卷第69期 151 PCR精准检测儿童EB病毒感染的临床研究及推广吕敬斌（密山市人民医院分子生物实验室，黑龙江 鸡西 158300）摘要：目的探讨分析PCR精准检测对儿童EB病毒感染的临床诊断研究与推广。

方法选取我院从2017年1月至2017年12月收治的600例儿童EB病毒感染者作为本次临床研究对象，随机分为对照组（n=300）与观察组（n=300）；对照组患儿行血清学检测方式，观察患儿行PCR精准检测，观察患儿血清学检测与核酸EBV-DNA检测阳性率。

结果对照组患儿在血清学检测中患NA IgG的阳性率最低，而观察组患儿行PCR精准检测方式其EBV-DNA阳性率高于全血EBV-DNA阳性率，差异有统计学意义（P<0.05）。

结论对儿童EB病毒感染者行PCR精准检测，在临床检测中准确率更高，值得广泛应用和推广。

关键词：PCR精准检测；儿童EB病毒感染；推广应用中图分类号：R450 文献标识码：B DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2018.69.115本文引用格式：吕敬斌.PCR精准检测儿童EB病毒感染的临床研究及推广[J].世界最新医学信息文摘,2018,18(69):151.0 引言EB病毒感染（Epstein-Barr Virus, EBV）作为一类临床中常见的疱疹类双链DNA病毒，呈全球性分布[1]，且会一直居于感染者体内，而根据EBV的感染时间、特异性抗体谱可以将其分为既往与原发感染、再激活三类；主要是通过唾液传播导致病毒感染，由于儿童抵抗力低，导致这样无症状的感染一般高发于孩童；当前对于EBV感染的临床诊断方式多通过血清学检测和PCR精准检测，血清学检测是常用的一种诊断方式，PCR精准检测特异性较强、敏感性高，在临床诊断中应用越来越广泛；因此，本文根据血清学与PCR不同诊断方式作对比分析，研究PCR精准检测对儿童EB病毒感染的临床应用与所具备的推广性。

EB病毒抗体诊断方法研究进展作者：吴尚文来源：《中国当代医药》2013年第08期[摘要] EB病毒与鼻咽癌密切相关，通过检测血清EB病毒抗体可为鼻咽癌筛查和早期诊断提供辅助性指标。

近年来，各种血清EB病毒抗体检测方法相继产生，全文就EB病毒抗体诊断方法研究进展作一综述。

[关键词] EB病毒；鼻咽癌；抗体诊断；研究进展[中图分类号] R446.6 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）03（b）-0021-02EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一种能普遍感染人类且与多种恶性肿瘤发病有密切关系的DNA病毒。

由于人类容易感染EB病毒，EB病毒感染导致的相关疾病，特别是恶性肿瘤的发病越来越受到研究人员的关注。

自外国医学研究人员Old LJ等[1]报告使用免疫扩散实验确认EB病毒和鼻咽癌的血清学有关以来，后来诸多研究均发现抗EB病毒壳抗原的免疫球蛋白对鼻咽癌诊断有特异性。

近年来，随着检验技术的发展和在临床上的大量应用，国内外学者对鼻咽癌患者血清EB病毒抗体诊断方法作了大量研究。

1 血清EB病毒抗体诊断方法研究进展1.1 EB病毒不同检测方法长期的临床研究发现EB病毒感染人体后，被病毒感染的人体细胞具有EB病毒的基因组，并产生相应的各种抗原，已确定的被病毒感染细胞可合成抗原有：①核抗原（EB virus asso-ciated nuclear antigen，EBNA）；②膜抗原（membrane antigen of Epstien-Barr virus，MA）；③早期抗原（early intracellular antigen，EA）；④衣壳抗原（EB virus cap sid antigen，VCA）；⑤淋巴细胞识别膜抗原（LYDMA）。

由于抗原产生后机体会出现相应的抗体，通过血清EB病毒抗体的检测可为临床诊断提供依据，目前有大量报道显示测定单个EB病毒抗原的抗体相比联合测定多个抗体对鼻咽癌的诊断的特异性及灵敏度偏低，不能为临床诊断提供准确的数据，为提高检验的准确性，现多采用多个抗体联合检测及联合分析的方法。

实时荧光定量检测EB病毒在临床中的应用作者：李玉香解丽丽林丽付杰张睿来源：《中外医疗》2011年第11期【摘要】目的探讨EB病毒(EBV)荧光定量分析,在儿科上呼吸道感染群体和来自肝损害患者标本的的临床诊断、治疗中的意义。

方法检测EB病毒标本102例,病毒拷贝量在103/mL以上32例,阳性率为31.3%。

其中儿科患者91例,病毒拷贝量在103/mL以上26例,阳性率为28.5%,所测阳性病例中2例为传染性单核细胞增多症;消化科10份标本,病毒拷贝量在103/mL 以上6例,阳性率为60%,其中3例为肝损害。

结果32例阳性患者经对症治疗后复查,27例拷贝量在103/mL以下,其余5例拷贝量亦有明显下降。

结论对标本中病毒进行定量检测,具有更高的特异性,可真实反映出患者体内病原体拷贝数的高低和复制情况,有助于判断疾病预后,选择治疗方案及监测治疗效果。

【关键词】荧光检测EBV 应用价值【中图分类号】 R446.1【文献标识码】 A【文章编号】 1674-0742(2011)04(b)-0103-01EB病毒长期潜伏在淋巴细胞内,以环状DNA形式游离在胞浆中,并整合天染色体内。

EB病毒在人群中广泛感染。

根据血清学调查,我国3～5岁儿童EB病毒vca-lgG抗体阳性率达90%以上,幼儿感染后多数无明显症状,或引起轻症咽炎和上呼吸道感染。

青年期发生原发感染,约有50%出现传染性单核细胞增多症。

主要通过唾液传播,也可经输血传染。

EB病毒在口咽部上皮细胞内增殖,然后感染B淋巴细胞,这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染。

并可长期潜伏在人体淋巴组织中,当机体免疫功能低下时,潜伏的EB病毒活化形成得复发感染。

由EBv感染引起或与EBv感染有关疾病主要有传染性单核细胞增多症、非洲儿童淋巴瘤(即burkitt淋巴瘤)、鼻咽癌。

1实验(1)标本来源:消化内科肝损害(肝脾肿大)、恶心发热患者的标本,儿童发热、咽痛、淋巴结肿大或上呼吸道感染的儿科患者血标本10份。

103CH INA FO REIGN MEDIC AL TRE ATMENT 中外医疗临 床 医 学EB病毒长期潜伏在淋巴细胞内,以环状DNA形式游离在胞浆中,并整合天染色体内。

EB病毒在人群中广泛感染。

根据血清学调查,我国3～5岁儿童EB病毒vca-lgG抗体阳性率达90%以上,幼儿感染后多数无明显症状,或引起轻症咽炎和上呼吸道感染。

青年期发生原发感染,约有50%出现传染性单核细胞增多症。

主要通过唾液传播,也可经输血传染。

EB病毒在口咽部上皮细胞内增殖,然后感染B淋巴细胞,这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染。

并可长期潜伏在人体淋巴组织中,当机体免疫功能低下时,潜伏的EB病毒活化形成得复发感染。

由EBv感染引起或与EBv感染有关疾病主要有传染性单核细胞增多症、非洲儿童淋巴瘤(即burkitt淋巴瘤)、鼻咽癌。

1 实验(1)标本来源:消化内科肝损害(肝脾肿大)、恶心发热患者的标本,儿童发热、咽痛、淋巴结肿大或上呼吸道感染的儿科患者血标本10份。

91例为儿科以发热、咽炎、腹泻或上呼吸道感染入院。

(2)仪器:7300实时荧光定量PCR仪。

(3)试剂:广州达安基因公司产EBV试剂盒及配套耗材。

(4)操作:抽取患者静脉血2mL,用EDTA-Na 2抗凝,用淋巴细胞分离液分离抗凝血中淋巴细胞,再用D N A 提取液提取淋巴细胞中的E BV —D NA 为模板进行扩增检测。

2 结果检测EB病毒标本102例,病毒拷贝量在103/mL以上32例,阳性率为31.3%,其中儿科患者91例,病毒拷贝量在103/mL以上25例,阳性率为27.4%。

所测阳性病例中2例为传染性单核细胞增多症;消化科10份标本,6例病毒拷贝量在103/mL以上,阳性率为30%,其中3例为肝损害。

32例阳性患者经对症治疗后复查,27例拷贝量在103/mL以下,其余5例比初次检测拷贝量亦有明显下降。

3 讨论(1)EB病毒一般潜伏期为4～7周。