实验二 影响酶促反应的因素

影响酶促反应的因素——温度,ph,激活剂及抑制剂,生化实验报告(共8篇) 影响酶促反应速度的因素生化实验实验二影响酶促反应速度的因素【目的】观察温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

【原理】唾液淀粉酶催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖和葡萄糖等。

淀粉及其水解产物遇碘会呈现不同的颜色。

在不同温度，不同PH值下，唾液淀粉酶活性不同，催化淀粉水解程度不一，生成的产物也就不同。

此外，激活剂、抑制剂也能影响淀粉酶活性，影响淀粉的水解。

因此可根据在不同反应条件下，溶液加碘呈现的不同颜色来判断淀粉的水解程度，从而验证了温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

淀粉I2 【操作】1. 温度对酶促反应速度的影响取3支试管，编号，按下表操作：2. PH对酶促反应速度的影响取3支试管，编号，按下表操作：3．激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响取4支试管，编号，按下表操作：【结果及分析】观察各管颜色变化，说明温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。

【实验注意事项】篇二：生化实验思考题参考答案生化实验讲义思考题参考答案实验一淀粉的提取和水解1、实验材料的选择依据是什么？答：生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。

从科研工作的角度选材，还应当注意具体的情况，如植物的季节性、地理位置和生长环境等，动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等，微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。

2、材料的破碎方法有哪些？答：(1) 机械的方法：包括研磨法、组织捣碎法；(2) 物理法：包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等；(3) 化学与生物化学方法：包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。

实验二总糖与还原糖的测定1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定？两种滴定方法各有何优缺点？答: 我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。

间接法的优点是操作简便、反应条件温和，缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差；直接法的优点是反应原理直观易懂，缺点是操作较复杂，条件剧烈，不易控制。

酶促反应动力学实验报告14301050154 杨恩原实验目的：1.观察底物浓度对酶促反应速度的影响2.观察抑制剂对酶促反应速度的影响3.掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值实验原理：一、底物浓度对酶促反应速度的影响在温度、pH及酶浓度恒定的条件下，底物浓度对酶的催化作用有很大的影响。

在一般情况下，当底物浓度很低时，酶促反应的速度(v)随底物浓度[S]的增加而迅速增加，但当底物浓度继续增加时，反应速度的增加率就比较小，当底物浓度增加到某种程度时反应速度达到一个极限值(即最大速度Vmax)。

底物浓度和反应速度的这种关系可用米氏方程式来表示(Michaelis-Menten方程)即：式中Vmax为最大反应速度，Km为米氏常数，[S]为底物浓度当v=Vmax/2时，则Km=[S]，Km是酶的特征性常数，测定Km是研究酶的一种重要方法。

但是在一般情况下，根据实验结果绘制成的是直角双曲线，难以准确求得Km和Vmax。

若将米氏方程变形为双倒数方程(Lineweaver-Burk方程)，则此方程为直角方程，即:以1/V和1/[S]分别为横坐标和纵坐标。

将各点连线，在横轴截距为-1/Km，据此可算出Km值。

本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同浓度底物时的酶活性，再根据1/v和1/[S]的倒数作图，计算出其Km值。

二、抑制剂对酶促反映的影响凡能降低酶的活性，甚至使酶完全丧失活性的物质，成为酶的抑制剂。

酶的特异性抑制剂大致上分为可逆性和不可逆性两类。

可逆性抑制又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制等。

竞争性抑制剂的作用特点是使该酶的Km值增大，但对酶促反映的最大速度Vmax值无影响。

非竞争性抑制剂的作用特点是不影响[S]与酶的结合，故其Km值不变，然而却能降低其最大速度Vmax。

本实验选取Na2HPO4作为碱性磷酸酶的抑制物，确定其抑制作用属于哪种类型。

实验步骤：实验一:底物浓度对酶促反应速度的影响1.取试管9支，将0.01mol/L基质液稀释成下列不同浓度：管号试剂2.另取9支试管编号，做酶促反应：管号试剂3.混匀，37 ℃水浴保温5分钟左右。

竭诚为您提供优质文档/双击可除影响酶活性的因素实验报告篇一：实验报告-不同因素对酶的影响实验报告课程名称：生物化学实验（甲）指导老师：成绩：实验名称：酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型：分离鉴定实验同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）三、主要仪器设备（必填）五、实验数据记录和处理七、讨论、心得二、实验内容和原理（必填）四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析（必填）Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性一、实验目的和要求1.了解酶的专一性。

2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。

3.学会排除干扰因素，设计酶学实验。

二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。

酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的反应（酶促反应）要比相应的没有催化剂的反应快103-1017倍。

酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。

根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。

2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。

如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。

如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。

3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。

如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。

本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。

采用benedict试剂检测反应产物。

benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。

na2co3+2h2o2naoh+h2co3cuso4+2+na2so4还原糖(—choor—c=o)+2cu(oh)2cu2o(砖红色或黄色)+2h2与benedict试剂无呈色反应。

实验报告课程名称： 指导老师： 成绩： 实验名称：实验类型： 分离鉴定实验 同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性一、实验目的和要求1. 了解酶的专一性。

2. 掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。

3. 学会排除干扰因素，设计酶学实验。

二、实验基本原理 酶是一种具有催化功能的蛋白质。

酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的反应（酶促反应）要比相应的没有催化剂的反应快103-1017 倍。

酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。

根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性 一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。

2.绝对专一性： 有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。

如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。

如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。

3.立体异构专一性 有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。

如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。

本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。

采用Benedict 试剂检测反应产物。

Benedict 试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。

Na 2CO 3+ 2H 2O 2NaOH + H 2CO 3 CuSO 4+ 2NaOH Cu(OH)2+ Na 2SO 4 还原糖(—CHO or —C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu 2O (砖红色或黄色) + 2H 2O + 糖的氧化产物在分子结构上，淀粉几乎没有，而蔗糖、棉子糖全无半缩醛基，它们均无还原性，因此它们与Benedict 试剂无呈色反应。

酶动力学综合实验实验(一)一一碱性磷酸酶值的测定【目的要求】1.了解底物浓度对酶促反响速度的影响2.了解米氏方程、值的物理意义及双倒数作图求值的方法。

【实验原理】1、碱性磷酸酶：碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其屮以肝脏为最多。

其次为肾脏、骨骼、肠和胎盘等组织。

但它不是单一的酶，而是一组同功酶。

本实验用的碱性磷酸酶是从大肠杆菌屮提取的。

2、米氏方程：在研究底物浓度与酶促反响速度的定量关系时，导出了酶促反响动力学的根本公式，即：V二卩机0卅[S]—K池十⑸(1)式屮：V表示酶促反响速度，也丈表示酶促反响最大速度,[S]表示底物浓度，心表示米氏常数。

3、心值的测定主要采用图解法，有以下四种：①双曲线作图法（图1-1, a）根据公式（1〕，以v对［s］作图，此时1/2$^时的底物浓度［s］值即为值，以克分子浓度W表示。

这种方法实际上很少采用, 因为在实验条件下的底物浓度很难使酶到达饱和。

实测是一个近似值，因而1/21^不准确。

此外由于v对［S］的关系呈双曲线, 实验数据要求较多，且不易绘制。

②作图法双倒数作图法（图1-1, b）实际工作屮，常将米氏方程（式（1）〕作数学变换，使之成为直线形式，测定要方便、准确得多。

其中之一即取（1〕式的倒数, 变换为方程式：丄=旦*丄+亠v Vmax ［S］ Vmax（2）以決堆1作图，即为形式。

此时斜率为怦，纵截距为产。

把直线U U V E*V EX外推与横轴相交，其截距相交，其截距即为一亡。

③作图法（略）把（2）式等号两边乘以V max,得：輕V+1v = —Km * 占 + V max（3）以V对着作图，这时斜率为-心，纵截距叽,横截距为-兽。

［AJ④作图法(略)把(2)式等号两边乘以［S］,得:以旦对［s］作图，这时斜率为宀，纵截距为严。

I? V mar(b)本实验主要以双倒数法，即作图法来测定碱性磷酸酶值。

具体原理如下：本实验以碱性磷酸酶为例，用磷酸苯二钠为其作用物，碱性磷酸酶能分解磷酸苯二钠产生酚和磷酸，在适宜条件下(10.0,和60°C),准确反响13分钟。

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2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。

3.学会排除干扰因素，设计酶学实验。

二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。

酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的反应（酶促反应）要比相应的没有催化剂的反应快103-1017倍。

酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。

根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。

2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。

如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。

如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。

3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。

如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。

本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。

采用benedict试剂检测反应产物。

benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。

na2co3+2h2o2naoh+h2co3cuso4+2+na2so4还原糖(—choor—c=o)+2cu(oh)2cu2o(砖红色或黄色)+2h2与benedict试剂无呈色反应。

温度对酶活性的影响实验报告一、实验目的探究温度对酶活性的影响，了解酶在不同温度条件下的催化效率变化，加深对酶的性质和作用的理解。

二、实验原理酶是一种具有生物催化功能的蛋白质，其活性受到多种因素的影响，其中温度是一个重要的因素。

在一定范围内，温度的升高会增加酶促反应的速率，但超过一定温度后，酶的活性会迅速下降，甚至完全失活。

这是因为温度的升高一方面会增加分子的热运动，使酶与底物的碰撞频率增加，从而提高反应速率；另一方面，过高的温度会破坏酶的空间结构，导致其失去催化活性。

本实验通过检测在不同温度条件下淀粉酶对淀粉的水解程度，来反映酶活性的变化。

淀粉在淀粉酶的作用下会被水解为麦芽糖和葡萄糖，这些产物可以与碘液发生反应，从而使溶液的颜色发生变化。

三、实验材料和设备1、材料新鲜的淀粉酶溶液质量分数为 3%的淀粉溶液碘液热水、冰水、温水（37℃左右）2、设备试管、试管架量筒、移液器恒温水浴锅温度计计时器四、实验步骤1、准备 5 支洁净的试管，分别编号为 1、2、3、4、5。

2、向 5 支试管中分别加入 2mL 质量分数为 3%的淀粉溶液。

3、将 1 号试管置于冰水浴中，2 号试管置于室温（约 25℃）环境中，3 号试管置于 37℃恒温水浴锅中，4 号试管置于 50℃恒温水浴锅中，5 号试管置于 80℃恒温水浴锅中，保温 5 分钟。

4、向 1 号试管中加入 1mL 预先在冰水中冷却的淀粉酶溶液，向 2号试管中加入 1mL 室温下的淀粉酶溶液，向 3 号试管中加入 1mL 37℃预热的淀粉酶溶液，向 4 号试管中加入 1mL 50℃预热的淀粉酶溶液，向 5 号试管中加入 1mL 80℃预热的淀粉酶溶液，摇匀后立即开始计时。

5、每隔 1 分钟，从各试管中取出 1 滴反应液，滴加在白瓷板上，然后滴加 1 滴碘液，观察颜色变化。

6、记录各试管中反应液不再使碘液变蓝的时间，即为反应完成所需的时间。

五、实验结果｜试管编号|温度（℃）｜反应完成时间（分钟）｜｜：：｜：：｜：：｜｜1|0|15|｜2|25|8|｜3|37|5|｜4|50|7|｜5|80|未完成|六、结果分析1、从实验结果可以看出，在 0℃时，酶的活性很低，反应完成所需的时间较长，这是因为低温会降低酶的活性，分子的热运动减缓，酶与底物的结合和催化反应受到抑制。

实验酶促反应的影响因素此实验可以根据酶的特性，设计影响酶促反应的各种因素，并进行实验检验。

（一）酶的激活剂和抑制剂一、实验目的1．了解酶促反应的激活与抑制。

2．学习鉴定激活剂和抑制剂影响酶反应的方法和原理。

二、实验原理酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。

例如，氯化钠为唾液淀粉酶的激活剂，硫酸铜为其抑制剂。

通常少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且常具有特异性。

但是，值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。

例如氯化钠达到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活性。

三、器材1．试管及试管架 2．烧杯、椎形瓶和量筒（100mL）3．玻璃漏斗 4．吸管 5．滤纸 6．恒温水浴锅四、试剂1． 1% 淀粉溶液2．稀释100~200倍的新鲜唾液3． 1%氯化钠溶液4．0.1 %硫酸铜溶液5．碘化钾-碘溶液：将碘化钾20g 和碘10g 溶于100 mL水中，使用前稀释10倍。

五、操作方法取3支试管，向第一支试管中加入1%氯化钠溶液1 mL，向第二支试管中加入 0.1%硫酸铜溶液1 mL，向第3支试管中加入蒸馏水1mL作对照。

再向每支试管各加入 0.1%淀粉溶液3 mL和稀释的唾液1 mL。

摇匀各管，充分混合，一起放入37℃恒温水浴中保温10~15分钟后取出。

冷却后，各滴入2-3滴碘化钾-碘溶液。

混匀。

观察比较3支试管颜色的深浅，并解释之。

如果激活剂或抑制剂的作用不明显，主要可能原因是唾液淀粉酶的活性不够高，可以适当延长反映时间或者降低唾液稀释的倍数。

思考题1．激活剂可以分为哪几类？本实验中氯化钠属于其中的哪一类？2．抑制剂和变性剂有什么不同？试举例说明。

3．酶反应的抑制作用有哪些类型？根据什么划分的？它们都有什么特点？（二）温度对酶活性的影响一、实验目的通过检验不同温度下唾液淀粉酶的活性，了解温度对酶活性的影响。