核酸适体
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药物分析中的核酸适体与靶标的结合研究药物分析是一门重要的研究领域,通过对药物的分析与研究,可以深入了解药物在体内的作用机制,进而优化药物设计与研发。
在药物研究中,核酸适体与靶标的结合研究是一个关键的环节。
本文将探讨核酸适体与靶标的结合机制以及在药物分析中的应用。
一、核酸适体及其结合机制核酸适体是一种能够与特定靶标特异性结合的单链寡核苷酸。
它们通过与靶标的特异性结合,也被称为亲和结合,从而发挥其作用。
核酸适体的结合机制主要包括三种类型:碱基配对、碱基三维折叠和碱基序列识别。
1. 碱基配对核酸适体的碱基与靶标上的碱基通过碱基配对相互结合。
这种结合方式非常特异性,可以使核酸适体与靶标之间形成稳定的结合。
2. 碱基三维折叠核酸适体中的碱基序列通过三维空间的折叠形成特定的结构,从而与靶标的结构相匹配。
这种结合方式可以增强核酸适体与靶标的结合能力。
3. 碱基序列识别核酸适体可以通过识别靶标上的特定碱基序列来与之结合。
这种结合方式非常特异性,可以用于检测和分析靶标的存在与活性。
二、药物分析中核酸适体的应用核酸适体在药物分析中有着广泛的应用。
下面将从药物筛选、药物靶标研究和药物传递三个方面介绍其应用。
1. 药物筛选核酸适体可以作为一种分子工具,用于药物筛选。
通过与靶标的结合研究,可以筛选出与靶标结合能力较强的药物候选物,为药物研发提供可靠的依据。
2. 药物靶标研究核酸适体可以应用于药物靶标的研究。
通过分析核酸适体与靶标的结合机制,可以深入了解药物与靶标之间的相互作用,从而为靶标的功能和调控提供重要信息。
3. 药物传递核酸适体还可以用于药物传递。
通过将药物与核酸适体相结合,可以增加药物的稳定性和生物利用度,从而提高药物的传递效率和治疗效果。
三、核酸适体与靶标的结合研究方法核酸适体与靶标的结合研究可以通过多种方法进行,主要包括:荧光共振能量转移技术(FRET)、核磁共振技术(NMR)、表面等离子体共振技术(SPR),以及荧光染料标记等。
核酸适体技术研究发展现状
核酸适体技术是一种基于核酸分子的高度特异性识别和结合其他分子的技术。
它的研究发展现状可以从多个方面来进行分析。
首先,我们可以从技术原理和方法的角度来看。
核酸适体技术主要包括SELEX技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment)和方法的改进。
SELEX技术是通过不断筛选和进化,使得核酸适体与特定的靶分子结合,从而获得高度特异性的适体。
近年来,科研人员对SELEX技术进行了许多改进,如分子进化技术的应用、高通量筛选技术的发展等,使得核酸适体的筛选效率和特异性得到了显著提高。
其次,从应用领域来看,核酸适体技术在生物医药领域具有广泛的应用前景。
例如,核酸适体可以作为药物靶向输送系统的一部分,用于治疗癌症、病毒感染等疾病。
此外,核酸适体还可以用于生物传感器、分子识别和分子成像等领域,为生命科学研究提供了重要的工具和方法。
另外,从研究热点和趋势来看,近年来,随着生物技术和纳米技术的发展,人们对核酸适体技术的研究越来越深入。
例如,一些
学者致力于开发新型的核酸适体筛选平台,以提高筛选效率和特异性;还有一些研究者将核酸适体技术与纳米材料相结合,开发出具
有生物传感和药物释放功能的纳米材料复合物,为生物医药领域带
来新的突破。
总的来说,核酸适体技术在研究发展现状方面取得了许多进展,从技术原理和方法、应用领域以及研究热点和趋势等多个角度来看,都表明了这一技术的巨大潜力和广阔前景。
希望未来能有更多的科
研成果和应用突破,推动核酸适体技术的进一步发展和应用。
核酸适体aptamer:一种具有潜力的肿瘤药物“靶向配基”核酸适体(aptamer)可描述为化学抗体,是用配体指数富集法系统进化(SELEX)技术筛选获得的单链DNA或RNA,借其自身形成的空间结构与靶标分子特异性识别,具有靶分子广、亲和力高、特异性强、易改造修饰等特点。
本文简述核酸适体作为肿瘤药物“靶向配基”的应用研究。
标签:核酸适体;靶向配基;肿瘤药物肿瘤的靶向疗法是利用特异性“靶向配基”的介导,将药物或其他杀伤肿瘤的物质选择性地运送到肿瘤部位、选择性地杀伤肿瘤细胞以提高治疗效果的一种治疗方法。
近年来国内外核酸适体(aptamer)介导的主动靶向给药研究成为热点。
核酸适体(aptamer)是经过一种新的体外筛选技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX),从随机单链寡聚核苷酸文库中得到的能特异结合蛋白或其他小分子物质的单链寡聚核苷酸,可以是RNA,也可以是DNA,长度一般为25~60个核苷酸[1]。
SELEX技术自Tuerk等[2]1990年发明以来,在临床诊断、靶向药物研制方面得以广泛应用。
首个核酸适配体药物”Macugen”[3]由美国FDA在2005年批准上市,成为核酸适配体领域的一个里程碑。
美国Achemix、SomaLogic,德国Noxxon AG等多个公司正在开发核酸适配体药物和诊断试剂。
肿瘤细胞靶向给药是提高肿瘤治疗效果减少毒副作用的有效途径。
将药物偶联于肿瘤细胞特异性配体上是靶向给药的主要方法。
核酸能特异性结合细胞并且随之内化,是理想的靶向细胞输送剂。
核酸适体“靶向配基”介导或修饰的药物及药物纳米制剂,为主动靶向肿瘤细胞给药系统构建开拓了新方向。
本文简要综述适体作为肿瘤药物“靶向配基”的应用研究。
1 核酸适体作为肿瘤药物“靶向配基”的优势具有高特异性与亲和性“靶向配基”的筛选,是制约主动靶向给药系统研究的瓶颈[4-5]。
Quality Control核酸适体在乳及乳制品检测上的运用分析陈姗姗,李 婧,刘李婷,李 超,吴 坤陕西省产品质量监督检验研究院,陕西西安 710048摘 要:我国乳制品行业发展迅速,检测需求逐渐增加。
随着食品安全相关法律法规完善和监管力度加强,传统乳制品检测方法存在诸多不足。
核酸适体在食品和医疗领域应用广泛,具有良好生物相容性、低免疫原性、高稳定性和高特异性等特点,有利于检测体系构建。
核酸适体是一种以指数形式存在的单链DNA或 RNA分子。
利用适配体的特异性识别能力,可通过双链DNA或RNA杂交得到荧光信号,用于检测蛋白质及各种酶等生物材料。
与传统检测手段相比,核酸适体具有可设计性强、合成简便快速、成本较低等优势。
关键词:核酸适体;乳制品检测;运用分析文章编号:1671-4393(2023)05-0060-05 DOI:10.12377/1671-4393.23.05.130 引言近几年来,随着我国居民生活水平的提高和对营养健康需求的日益增长,乳及乳制品越来越受到人们的重视,而我国由于人口众多,人均乳制品消费量还远远低于发达国家。
乳及乳制品市场前景广阔,对其质量安全监管也成为重中之重[1]。
在乳及乳制品的检测上,传统的免疫检测方法操作复杂,耗时长,往往难以快速准确的检测。
核酸适体技术具有操作简单、特异性强、亲和力高等特点,是目前最常用的免疫学检测技术之一。
本文从核酸适体技术在乳及乳制品检测中的应用、核酸适体技术在乳及乳制品中常见污染物检测上的应用及展望等方面进行综述。
1 乳中脂肪和蛋白质检测1.1 在荧光抗体-抗原夹心法中应用1.1.1 用双抗夹心法检测乳中脂肪和蛋白质作者简介:陈姗姗(1987-),女,陕西富平人,本科,工程师,研究方向为食品检测;李 婧(1985-),女,陕西澄城人,本科,助理工程师,研究方向为营养化学检测; 刘李婷(1989-),女,陕西西安人,硕士,工程师,研究方向为食品工程;李 超(1991-),男,陕西西安人,硕士,助理工程师,研究方向为食品检;吴 坤(1985-),女,山东临沂人,本科,工程师,研究方向为食品检测。
核酸适体在生物医学中的应用
核酸适体在生物医学中有着广泛的应用,以下是其主要应用领域:
1. 诊断检测:由于核酸适体能够高特异性和高灵敏度地识别靶标,因此可以用于诊断检测。
例如,可以用来检测癌症、病毒、细菌以及其他病原体。
2. 药物输送:核酸适体可以与特定的靶细胞或组织结合,因此可以被用于药物输送。
通过将药物与核酸适体结合,可以精确地将药物传递到病变的细胞或组织,提高药物的疗效并减少副作用。
3. 基因治疗:核酸适体可以用于基因治疗,通过与特定基因结合来调控基因的表达。
这为治疗遗传性疾病和其他基因相关疾病提供了新的手段。
4. 生物传感器:核酸适体可以与靶标结合的特性使其成为生物传感器的理想选择。
通过将核酸适体固定在传感器表面,可以检测各种生物分子和细胞。
5. 蛋白质组学研究:在蛋白质组学研究中,核酸适体可以用于蛋白质的分离和纯化,以及蛋白质功能的分析。
这有助于深入了解蛋白质的功能和相互作用。
6. 细胞分选:利用核酸适体的特异性结合能力,可以对细胞进行分选。
例如,可以根据细胞的表面抗原或其他标志物,使用核酸适体进行细胞的富集或去除。
7. 疫苗开发:核酸适体可以作为疫苗的佐剂使用,增强免疫反应并提高疫苗的保护效果。
总的来说,核酸适体的特性使得它在生物医学领域具有广泛的应用前景,有望为疾病诊断、治疗和预防提供新的解决方案。
核酸适体技术在生物医药中的应用随着科技的日新月异,生物医学领域的创新不断涌现。
其中,应用广泛的核酸适体技术被认为是未来生物医学领域的重要发展方向之一。
本文将介绍这一技术的原理、应用及未来趋势,以期引人入胜,让更多人了解和关注生物医学领域的前沿技术。
一、核酸适体技术的原理核酸适体技术是一种新型生物分子识别工具,它利用核酸序列与生物分子(如蛋白质、细胞、病毒等)之间的物理化学作用,实现对特定生物分子的高度选择性识别和结合。
其本质是一种人工合成的核酸分子,其三维结构呈环形或类似酶的结构,可以通过选择性缩合而与目标分子紧密结合。
与传统药物不同,核酸适体技术适用于识别几乎所有生物分子,可用于抗体等传统识别工具无法识别的生物标志物。
核酸适体技术的独特性在于其核酸序列具有高度可控的特性,这种可控性可以通过人工合成的方法将其定制为具有高度特异性的适体。
与传统的费用高、耗时、技术门槛高的抗体制备相比,核酸适体技术具有制备简单、成本低、可重复使用、稳定性好等优势。
因此,核酸适体技术被广泛应用于生物医学领域。
二、核酸适体技术在生物医药中的应用1.生物分子识别和监测核酸适体技术可用于检测生物标志物,如肿瘤标志物、病毒标志物等。
它可以与目标分子高度结合形成稳定的配体/受体复合物,从而用于生物分子检测和监测。
利用核酸适体技术可以快速检测肿瘤标志物和HIV等病毒。
这为临床早期诊断和治疗提供了有效的手段。
2.药物递送系统利用核酸适体技术可以制备药物递送系统,该系统可以通过对配体/受体分子亲和性的特异性选择性,实现药物靶向输送的目的。
核酸适体可以通过特异性结合,并激活或直接递送药物到病灶部位,从而提高药物的疗效。
3.基因调控核酸适体技术也可用于基因调控,如小干扰RNA甲基化抑制和基因启动子上的DNA甲基化。
通过特异性结合到特定基因的启动子区域,核酸适体可以调节基因表达,从而实现对特定疾病的治疗。
三、核酸适体技术的未来发展趋势随着生物技术的不断发展,核酸适体技术的应用前景也将更加广阔。
核酸适配体序列
核酸适配体是一种用于连接不同核酸分子(如DNA或RNA)的分子工具。
它由两个互补的序列组成,通常称为前适配体和后适配体。
核酸适配体可以通过杂交与目标核酸序列进行特异性配对,用于引导DNA或RNA的连接、扩增、修饰等各种实验操作。
核酸适配体的实际使用中,其序列会根据具体实验设计和目标的不同而有所变化。
这些序列是由研究人员根据实验需求进行设计和合成的。
适配体的长度通常在10至30个碱基对之间,以便在杂交与目标核酸序列时能够提供稳定的配对。
核酸适配体的序列可以根据实验需求和目标设计,例如,在PCR实验中,核酸适配体的序列必须与待扩增的目标DNA序列的两端互补,以便引导扩增反应的进行。
在连接DNA 分子时,核酸适配体序列的设计必须与待连接的两个DNA分子的序列匹配。
值得注意的是,核酸适配体序列的选择要遵循一定的设计准则,以确保其信号特异性和稳定性。
例如,避免适配体内部的重复序列、避免适配体之间的互补序列或重叠等。
总结起来,核酸适配体的序列是由实验设计者根据具体实验需求进行设计和合成的。
在不同的实验中,核酸适配体的序列会有所变化,以便适应不同的应用场景,例如PCR扩增、DNA连接等。
根据实验需求,科研人员可以设计和合成适合的核酸适配体序列,以实现特定的实验操作和目标。
核酸适配体名词解释
核酸适配体(Aptamer)是指通过指数富集的配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)筛选得到的能够与靶标分子高特异性、高亲和力结合的寡核苷酸序列。
核酸适配体通常是由几十个核苷酸组成的单链 DNA 或 RNA 分子,可以通过 Watson-Crick 碱基互补配对原则与靶标分子结合,形成特定的三维结构,从而发挥生物学功能。
核酸适配体的优点包括:亲和力高、特异性强、制备简单、稳定性好、生物相容性好等。
因此,核酸适配体在生物医学、环境监测、食品安全等领域具有广泛的应用前景。
例如,核酸适配体可以用于药物研发、疾病诊断、生物传感器、分子探针等方面。
在药物研发中,核酸适配体可以作为药物的靶向分子,提高药物的选择性和疗效;在疾病诊断中,核酸适配体可以作为生物标志物,用于检测疾病相关分子;在生物传感器中,核酸适配体可以作为识别元件,用于检测各种分析物。
基于核酸适体的检测方法1. 引言1.1 背景介绍本文旨在探讨基于核酸适体的检测方法,在介绍核酸适体的原理、特点和在疾病检测中的应用的基础上,分析核酸适体在检测领域的优势和未来发展前景,为读者全面了解核酸适体在检测领域的重要性和应用前景提供参考。
核酸适体的出现将为生物分子的检测带来革命性的变化,有望成为未来生物检测领域的重要工具。
1.2 研究目的研究目的是为了探讨基于核酸适体的检测方法在疾病诊断和监测中的应用及优势,以及为未来核酸适体技术的发展提供参考和指导。
通过深入了解核酸适体的原理和特点,可以更好地利用这一技术来解决当前疾病检测中存在的问题,并为提高检测的准确性、灵敏度和效率提供技术支持。
研究目的还包括总结核酸适体在不同疾病检测中的实际应用情况,探讨其在临床诊断中的潜在优势和未来发展趋势,以便为进一步推动核酸适体技术在医学领域中的应用提供理论支持和实践指导。
通过本研究的探讨,可以为加快核酸适体技术在疾病检测领域的推广和应用打下坚实的基础。
2. 正文2.1 基于核酸适体的原理基于核酸适体的原理是一种基于核酸适体与靶分子特异性结合的检测方法。
核酸适体是一种具有高度特异性和亲和性的核酸分子,可以与靶分子形成稳定的复合物。
在检测过程中,利用核酸适体的特异性结合能力,可以将目标靶分子从复杂的生物样本中特异性识别和富集出来。
这种特异性识别和富集的方式保证了检测方法的准确性和灵敏度。
核酸适体的结合是通过碱基间的氢键、磷酸二酯桥和茎环结构等相互作用来实现的。
在适当的条件下,核酸适体可以通过形成稳定的双链结构与靶分子相互作用。
这种结合方式的高度特异性可以确保只有目标靶分子能够与核酸适体结合,从而实现靶分子的快速检测和定量分析。
基于核酸适体的原理不仅可以应用于单一靶分子的检测,还可以通过设计多个核酸适体来实现多靶分子的同时检测。
这种多靶分子的同时检测方式在疾病诊断和药物研发中具有重要的应用前景。
基于核酸适体的检测方法在生物医学领域具有广阔的发展空间和潜力。
核酸适配体在分子医学中的应用一、简介核酸适配体是一类能与特定的目标分子结合的寡核苷酸或寡肽序列。
它们通过与目标分子结合,进行特异性识别和调控,成为分子医学研究和应用的重要工具。
本文将介绍核酸适配体的概念、结构和制备方法,并重点探讨它们在分子医学领域的应用。
二、核酸适配体的结构与制备2.1核酸适配体的结构核酸适配体由寡核苷酸组成,可以是DN A、R NA或D NA-R NA杂交分子。
核酸适配体的结构通常由两个重要部分组成:结构域和配体域。
结构域为核酸适配体提供稳定的空间构象,而配体域则与目标分子特异性结合。
2.2核酸适配体的制备方法核酸适配体的制备方法主要包括体外筛选和化学修饰两种。
体外筛选通过筛选大规模的核酸库,选取具有特异性结合能力的核酸适配体,常用的筛选方法包括S ELE X法和RN A适配体筛选法。
化学修饰则通过改变核酸适配体的碱基序列或化学结构,增强其结合能力和稳定性。
三、核酸适配体的应用3.1肿瘤治疗核酸适配体在肿瘤治疗中发挥着重要的作用。
通过特异性结合肿瘤细胞表面的抗原,核酸适配体可用于靶向传递药物、放射性同位素或光敏物质,实现肿瘤的精确治疗。
此外,核酸适配体还可作为肿瘤标志物的检测工具,帮助早期诊断和预后评估。
3.2感染性疾病检测核酸适配体在感染性疾病的早期检测中具有巨大潜力。
通过与致病微生物或其产物特异性结合,核酸适配体可用于快速、敏感地检测病原体的存在和数量。
这种检测方法对于迅速控制和防止疫情的扩散具有重要意义。
3.3基因治疗核酸适配体在基因治疗中也有广泛的应用。
通过与目标基因或其调控序列结合,核酸适配体可以调控基因的表达,实现基因治疗的精准性和有效性。
此外,核酸适配体还可用于基因编辑和基因传递载体的构建,为基因研究和治疗提供强大的工具。
四、总结核酸适配体作为一类具有特异性结合和调控能力的分子工具,在分子医学中的应用前景广阔。
通过结合不同的配体域,核酸适配体可以用于肿瘤治疗、感染性疾病检测和基因治疗等领域。
核酸适配体的功能
核酸适配体是一类能够与目标核酸序列特异性结合的分子。
它们主要用于进行分子识别、分子检测和分子修饰等应用。
1. 分子识别:核酸适配体可以与目标核酸序列特异性结合,形成稳定的复合物。
通过这种结合,可以识别和辨别目标核酸序列的存在和特性。
2. 分子检测:核酸适配体可用于特定目标核酸序列的检测。
一种常见的应用是核酸适配体作为传感器或探针,在分子生物学和医学诊断中用于检测病原体、致病基因或特定突变。
3. 分子修饰:核酸适配体还可以用来修饰目标核酸序列,如选择性地调控目标基因的表达、修饰或功能。
这种修饰可以通过核酸适配体与目标核酸序列的结合来实现。
总的来说,核酸适配体具有高度的选择性和特异性,能够识别目标核酸序列,并在分子识别、分子检测和分子修饰等方面发挥重要作用。
核酸适体筛选的国外课题组核酸适体筛选是一项在分子生物学和生物化学领域具有重要应用前景的技术,主要用于筛选具有高亲和力和特异性的核酸适体。
核酸适体是由寡核苷酸序列组成的人工分子,能够与目标分子的特定结构相互作用。
通过核酸适体筛选,可以从大量的序列库中选择出对目标分子具有高亲和力和特异性的适体,进而用于分子诊断、抑制剂筛选和靶向治疗等方面。
在核酸适体筛选的国外课题组中,有许多知名的研究机构和实验室致力于相关研究。
以美国为例,多个大学和企业的研究团队在这一领域取得了重要进展。
以下是一些具有代表性的国外课题组的简介:1.美国麻省理工学院(MIT)白建中实验室:白建中实验室是核酸适体筛选领域的先驱之一,该实验室在核酸适体的筛选和进化方面开展了多年的研究。
他们开发了SELEX (Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,即倍增富集法)技术,通过逐步进化的方式从中选择出具有高亲和力和特异性的核酸适体。
2.美国加州大学圣地亚哥分校(UCSD)Ellington课题组:Ellington课题组致力于核酸适体筛选和DNA纳米技术的研究。
他们开发了一种名为RTSA(Random Tethered Selection Amplification)的筛选方法,可以用来寻找特定蛋白质的适体。
此外,他们还开展了核酸适体在癌症诊断和治疗中的应用研究。
3.美国密歇根大学(UM)Hürstel课题组:Hürstel课题组的研究重点是研究DNA和RNA分子的结构和功能。
他们利用核酸适体筛选技术,寻找具有特定结构和特异性的适体,并研究其在生物医学和纳米技术领域的应用。
4.美国斯坦福大学(Stanford)Seelig实验室:Seelig实验室以开发可编程核酸适体和RNA纳米技术而闻名。
他们开发了一种名为RNA纳米技术的方法,用于构建可用于靶向药物传递和基因调控的RNA分子。
核酸适体(Aptamer)是一段寡核苷酸,通过体外人工进化程序(Systematic evolution of ligands by ex—ponential enrichment,SELEX)筛选得到.它能高效、特异性地结合各种配体,具有易合成、易储存和易修饰等优点,在医学诊断治疗、药物分子设计以及分析检测等方面具有广泛的应用前景]1[.目前基于核酸适体的蛋白质检测方法主要有比色法]2[、混合夹心法]3[、电化学法]5,4[和荧光检测法]9~6[等,其中利用信号核酸适体(Signaling Aptamer)的荧光检测法因其无需分离洗脱样品,操作简便快速,从而得到了广泛的研究]10~7[.目前利用信号核酸适体均相检测蛋白质的方法通常是直接在核酸适体上标记荧光基团,利用它与靶分子结合时荧光信号的变化实现对靶分子的检测]7~5[.但对核酸适体的标记有可能影响它与配体的结合,且标记位点往往难以确定.近年来发展了一些不需直接标记核酸适体的蛋白质检测方法.如利用DNA光开关化合物[Ru(phen) dppz]+(RU)与核酸识体复合物作为信号核酸识体的方法对蛋白质进行检测]11~9[,然而这种方法对核酸适体的构象要求较高;采用接近循环延伸核酸适体(Pro—ximity extension of circular DNA aptamers)的方法检测具有二聚体靶位点的蛋白]12[;本实验室发展的基于空间位阻效应的方法虽无需直接标记核酸适体,但须以分子信标为报告分子进行信号的转换]13[.本文建立了一种基于聚合酶反应的发夹型核酸适体均相检测蛋白质的方法.将发夹核酸适体设计成蛋白质配体和聚合反应模板,当蛋白质与核酸适体特异性结合后,发夹构象转变为线性,成为聚合反应的模板而启动聚合反应,聚合反应的进程被荧光染料实时转换为荧光信号,实现了在未直接标记核酸适体的情况下检测蛋白质.与已有的研究方法]12~6[相比,本方法无须直接标记,对核酸适体的空间结构无特殊要求,且只需要一个核酸适体靶位点进行蛋白质检测.对人凝血酶的检测线性范围为0.5~8 nmol /L,检测下限为0.5 nmol/L.参考文献[1] Hermann T.,Patel D.J..Sciencef J],2000,287:820—825[2] Stojanovic M.N.,Landry D.W..J.Am.Chem.Soc.[J],2002,124:9678---9679[3] ZHEN Bei(甄蓓),ZHANG Min—Li(张敏丽),SONG Ya—Jun(宋亚军),eta1..Letters in Biotechnology(生物技术通讯)[J],2002l3(2):l23一l25[4] xu D.,Yu X.,Liu z.,et a1..Ana1.Chem.[J],2005,77:5l07—5ll3[5] ZHENG Jing(郑静),LIN Li(林莉),CHENG Gui—Fang(程圭芳),et a1..Sciencein China,Series B(中国科学,B辑)[J],200636:485—492[6] Nobuko H.,Andrew E.,Martin S.,et a1..Ana1.Biochem_[J],2001,294:l26一l3l[7] U W.,Wang K.M.,Tan W.H.,et a1..Analyst[J],2007,132:l07一ll3[8] Razvan N.,Li Y..J.Am.Chem.Soc.[J],2003,125:4771__4778[9] Jiang Y.X.,Fang X.H.,Bai C.L.,et a1..Ana1.Chem.[J],2004,76:5230--5235[10] Wang J.,Jiang Y.X.,Zhou C.S.,et a1..Ana1.Chem.[J],2005,77:3542--3546[ll]ZHOU Cui—Song(周翠松),JIANG Ya—Xin(江雅新),W ANG Jun(汪俊),et a1..Chem.J.Chinese Universities(高等学校化学学报)[J],2006,27(5):826—829[12] Di Giusto D.A.,Wlassoff W.A.,Gooding J.J.,et a1..Nucleic Acids.Res.[J],2005,33:e64[13] ZHONG Zhi—Hong(仲志鸿),YANG Xiao—Hai(羊小海),W ANG Ke—Min(王柯敏),et a1..Life Science Research(生命科学研究)[J],2006,10:206--209[14] Bock L.C.,Griffin L.C.,Latham J.,et a1..Nature[./j,1992,355:564--566[15] Liu Y.,Lin C.,Yan H.,et a1..Angenwandte Chemie International Edition[J],2005,44:4333--4338。
调控核酸适体的亲和力一、突变核酸适体通过改变核酸适体的碱基序列,可以调控其亲和力。
具体而言,可以针对靶标分子的特定结构,设计出与之互补的碱基序列,从而产生更高的亲和力。
此外,也可以利用突变技术对核酸适体的亲和力进行优化,例如对关键碱基进行突变,以提高其对靶标分子的识别能力和亲和力。
二、化学修饰核酸适体通过化学修饰的方法,可以在核酸适体的特定位置引入一些功能基团或分子,例如氨基、羧基、荧光基团等。
这些基团或分子可以与靶标分子相互作用,从而提高核酸适体对靶标分子的亲和力。
此外,也可以利用化学修饰对核酸适体的构象进行调控,以提高其亲和力。
三、结构优化核酸适体通过对核酸适体的结构进行优化,可以改变其与靶标分子间的相互作用方式,从而提高亲和力。
例如,可以改变核酸适体的链长、链的刚性等性质,以及通过改变适体与靶标分子间的距离和角度等参数,以达到优化亲和力的目的。
四、配体交换法配体交换法是一种通过将原有配体替换为新的配体,从而提高核酸适体亲和力的方法。
具体而言,可以选择与靶标分子具有更高亲和力的配体,将其与核酸适体进行交换,从而提高核酸适体对靶标分子的亲和力。
此外,也可以利用多价配体对核酸适体进行修饰,以提高其亲和力。
五、组合核酸适体组合核酸适体是指将多个核酸适体组合在一起,形成一个多特异性复合物。
通过将多个具有不同靶标分子的核酸适体组合在一起,可以提高复合物对多种靶标分子的亲和力。
此外,也可以将具有相同靶标分子的多个核酸适体组合在一起,以提高复合物对该靶标分子的亲和力。
这种方法的优点是可以同时检测多种靶标分子,提高检测的灵敏度和特异性。
总之,调控核酸适体的亲和力可以通过多种方法来实现。
这些方法可以根据具体的实验需求和条件进行选择和优化,以达到最佳的实验效果。
核酸适体(Aptamer)是一段寡核苷酸,通过体外人工进化程序(Systematic evolution of ligands by ex—ponential enrichment,SELEX)筛选得到.它能高效、特异性地结合各种配体,具有易合成、易储存和易修饰等优点,在医学诊断治疗、药物分子设计以及分析
检测等方面具有广泛的应用前景]1[.目前基于核酸适体的蛋白质检测方法主要有比色法]2[、混合夹心法]3[、电化学法]5,4[和荧光检测法]9~6[等,其中利用信号核酸适体(Signaling Aptamer)的荧光检测法因其无需分离洗脱样品,操作简便快速,从而得到了广泛的研究]10~7[.
目前利用信号核酸适体均相检测蛋白质的方法通常是直接在核酸适体上标记荧
光基团,利用它与靶分子结合时荧光信号的变化实现对靶分子的检测]7~5[.但对核酸适
体的标记有可能影响它与配体的结合,且标记位点往往难以确定.近年来发展了一些不需直接标记核酸适体的蛋白质检测方法.如利用DNA光开关化合物[Ru(phen) dppz]
+(RU)与核酸识体复合物作为信号核酸识体的方法对蛋白质进行检测]11~9[,然而这种方法对核酸适体的构象要求较高;采用接近循环延伸核酸适体(Pro—ximity extension of circular DNA aptamers)的方法检测具有二聚体靶位点的蛋白]12[;本实验室发展的基于空间位阻效应的方法虽无需直接标记核酸适体,但须以分子信标为报告分子进行信号的转换]13[.
本文建立了一种基于聚合酶反应的发夹型核酸适体均相检测蛋白质的方法.将发夹核酸适体设计成蛋白质配体和聚合反应模板,当蛋白质与核酸适体特异性结合后,发夹构象转变为线性,成为聚合反应的模板而启动聚合反应,聚合反应的进程被荧光染料实时转换为荧光信号,实现了在未直接标记核酸适体的情况下检测蛋白质.与已有的研究
方法]12~6[相比,本方法无须直接标记,对核酸适体的空间结构无特殊要求,且只需
要一个核酸适体靶位点进行蛋白质检测.对人凝血酶的检测线性范围为0.5~8 nmol /L,检测下限为0.5 nmol/L.
参考文献
[1] Hermann T.,Patel D.J..Sciencef J],2000,287:820—825
[2] Stojanovic M.N.,Landry D.W..J.Am.Chem.Soc.[J],2002,124:9678---9679
[3] ZHEN Bei(甄蓓),ZHANG Min—Li(张敏丽),SONG Ya—Jun(宋亚军),et
a1..Letters in Biotechnology(生物技术通讯)[J],2002
l3(2):l23一l25
[4] xu D.,Yu X.,Liu z.,et a1..Ana1.Chem.[J],2005,77:5l07—5ll3
[5] ZHENG Jing(郑静),LIN Li(林莉),CHENG Gui—Fang(程圭芳),et a1..Science
in China,Series B(中国科学,B辑)[J],2006
36:485—492
[6] Nobuko H.,Andrew E.,Martin S.,et a1..Ana1.Biochem_[J],2001,294:
l26一l3l
[7] U W.,Wang K.M.,Tan W.H.,et a1..Analyst[J],2007,132:l07一ll3
[8] Razvan N.,Li Y..J.Am.Chem.Soc.[J],2003,125:4771__4778
[9] Jiang Y.X.,Fang X.H.,Bai C.L.,et a1..Ana1.Chem.[J],2004,76:5230--5235
[10] Wang J.,Jiang Y.X.,Zhou C.S.,et a1..Ana1.Chem.[J],2005,77:3542--3546
[ll]ZHOU Cui—Song(周翠松),JIANG Ya—Xin(江雅新),W ANG Jun(汪俊),et a1..Chem.J.Chinese Universities(高等学校化学学报)[J],2006,27(5):826—829
[12] Di Giusto D.A.,Wlassoff W.A.,Gooding J.J.,et a1..Nucleic Acids.Res.[J],2005,33:e64
[13] ZHONG Zhi—Hong(仲志鸿),YANG Xiao—Hai(羊小海),W ANG Ke—Min(王柯敏),et a1..Life Science Research(生命科学研究)[J],2006,10:206--209
[14] Bock L.C.,Griffin L.C.,Latham J.,et a1..Nature[./j,1992,355:564--566
[15] Liu Y.,Lin C.,Yan H.,et a1..Angenwandte Chemie International Edition[J],2005,44:4333--4338。