免疫组化实验结果分析

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石蜡切片免疫组化实验步骤

石蜡切片步骤按照晓峰整理的步骤进行（From 徐晓峰、朱老师的“石蜡切片”方案）：

1）材料的准备

在本实验室条件下推荐使用FAA（50% ethanol, 5% acetic acid,

3.7% 甲醛）固定材料。

FAA固定液（100ml），室温保存 ：

无水乙醇 50ml

冰醋酸 5ml

37%甲醛 10ml

水 35ml

第一天：组织固定

用FAA固定，详见“石蜡切片”protocol。

第二天：脱水

Solution time number of changes

50% ethanol 60 minutes one

60% ethanol 60 minutes one

*70% ethanol 60 minutes one

以上所有步骤中每换好一步乙醇均置于4℃冰箱等待，并不时轻摇。

* 组织可在70% ethanol 4℃可存放几个月

第三天：进一步脱水和浸蜡 2

以下所有步骤在4℃进行并不时轻摇

Solution time number of

changes

85% ethanol 60 minutes one

95% ethanol 60 minutes one

以下所有步骤在室温进行并不时轻摇

Solution time number of

changes

100% ethanol 30 minutes two

100% ethanol 60 minutes two

25%二甲苯, 75% ethanol 30 minutes one

50%二甲苯, 50% ethanol 30 minutes one

75%二甲苯, 25% ethanol+番红 30 minutes one

100%二甲苯 60 minutes two

免疫组化技术和常规技术在肿瘤病理诊断中的效果比较

目的：比较免疫组化技术和常规技术在肿瘤病理诊断中的效果。方法：选取笔者所在医院于2015年10月-2016年10月收治的52例肿瘤患者来进行研究。将收治的肿瘤患者随机分为观察组和对照组，每组26例。对照组采用常规技术来为肿瘤患者进行诊断，观察组则采用免疫组化技术进行诊断。对比两组患者的诊断阳性率、满意度及诊断相关评分。结果：观察组患者的诊断阳性率（92.31%）、满意度（96.15%）及诊断相关评分均优于对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：免疫组化技术在肿瘤病理诊断中的效果更为显著，值得在临床中借鉴、推广及应用。

标签： 免疫组化技术； 常规技术； 肿瘤； 病理诊断； 效果

肿瘤在临床中属于较为常见的疾病之一，并且肿瘤的发病概率相对较高，近年来，该疾病发病概率有明显的提升。肿瘤患者发病后的临床症状并不显著，患者在确诊后，其发病阶段已经进入中、晚期，早已错过治疗的最佳时期。就目前而言，临床中对肿瘤的诊断方法并不理想，较为常用的诊断方法为磁共振成像以及CT诊断等，虽然常规的诊断方法确诊概率相对较高，但是常规方法发生误诊的概率也相对较高。近年来，临床中较常采用病理诊断的手段来为患者确诊，诊断的效果相对理想。而病理诊断中的不同技术得出的效果存在较大的争议。笔者所在医院本次主要对免疫组化技术和常规技术在肿瘤病理诊断中的效果进行比较，并且取得了良好的效果，详见下文。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取笔者所在医院于2015年10月-2016年10月收治的52例肿瘤患者进行研究，所有患者经CT诊断确诊存在肿瘤病灶。将收治的肿瘤患者随机分为观察组和对照组，每组26例。观察组中男15例，女11例，年龄24～36岁，平均（30.14±1.52）岁。对照组中男16例，女10例，年龄25～38岁，平均（30.87±1.70）岁。两组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

ER、PR：正常乳腺上皮细胞内存在ER、PR。当细胞发生癌变时，ER和PR出现部分和全部缺失。如果细胞仍保留ER和（或）PR，则该乳腺癌细胞的生长和增殖仍然受内分泌的调控，称为激素依赖性乳腺癌；如果ER和（或）PR缺失，则该乳腺癌细胞的生长和增殖不再受内分泌的调控，称为非激素依赖性乳腺癌。

C-erbB2癌基因：在正常乳腺组织中呈低表达，在乳腺癌组织中表达率可增高，其表达与乳腺癌分级、淋巴结转移和临床分期呈正相关，表达率越高，预后可能也就越差。

P53基因：p53突变率高的乳腺癌细胞增殖活力强、分化差、恶性度高、侵袭性强和淋巴结转移率高。

COX-2(cyclooxygenase-2)：乳腺癌组织中存在COX-2的表达。COX-2可能是临床评价病人预后、识别术后复发的高危险性病人很有实用价值的指标。

Ki-67：与乳腺癌尤其是淋巴结转移阴性患者的预后相关，有助于确定是否采用辅助性化学治疗。

E-cadherin：黏附分子，可作为乳腺癌的判断预后指标。

PS2：在预测内分泌治疗反应方面，PS2比ER测定可能更有用，PS2的表达是乳腺癌内分泌治疗反应的最好指标。

p63： p63基因本身是一个抑癌基因，p63在乳腺癌的发生、发展过程中起着重要的作用；检测可为乳腺癌的早期诊断、及时治疗及预后判断提供必要的理论依据。

Calponin:在乳腺正常组、增生组、不典型增生组中,几乎所有的肌上皮细胞表达ｐ63、α-SMA和Calponin,而所有的腺上皮细胞3种抗体均为阴性；有助于判断浸润癌、原位癌及不典型增生。

SMA（smooth muscle actin）：平滑肌肌动蛋白是可靠的标记抗体。从乳腺正常组织、良性病变到原位癌,早期浸润和浸润性癌，ME的消失是一逐渐发展的过程。

Cyclin D1：Cyclin D1的高表达可能在人乳腺癌的发生、发展中起重要作用。在乳腺癌中高表达的临床意义是：Cyclin D1的表达与肿瘤大小、TNM分期及腋淋巴结转移相关

免疫组化技术在病理研究中的应用

在1842年，世界上首次有人提出，“组织学”，与此同时，相关专家还进行了大量的正常组织与病态组织在显微镜下的研究，经过长达10多年的研究，终于在1856年，医学界相关人士发表了：“细胞病理学”。随着经济的发展，医疗设施先进性、精良型的配置，在最近的时间里，组织病理学得到了迅速发展。但是，喜忧参半的忧是，在应用和解释形态标准时，仍然面对许多难以克服的难题，因为，我们仅仅依赖组织切片检查，那是不能对组织病态理学做出全面的诊断的。

标签：疫组化技术；移瘤；微小转移灶

为了解决以上的难题，1941年，有关医学院的精英人才首次提供一种根据，细胞抗原及细胞产物来识别细胞的手段。此手段在对肾脏病、皮肤病的研究方面取得了较大的成功。但是此方法也存在明显的弊端，那就是此方法在研究时，需要最新鲜的细胞组织来作为冰冻切片。因为新鲜的组织结构要求较高，所以当时此项技术并没有得到大面积的推广。但是由于荧光抗体技术简便而快速地特点，此技术在肾小球肾炎、皮肤病的研究中，依然发挥着不能忽视的作用。

一免疫组化技术

所谓的免疫技术，其实就是利用可以和异性抗体结合的酶，在酶的抗体、抗原的反应点上，利用技术对底物或者是显色剂进行诱导，这样酶的抗体反应点上，就能完成我们所需要的变色反应。其实，此反应原理在别的试验中也得到应用，例如，辣根过氧化酶就是此免疫酶的最初原型。其他的酶系统其实目前也得到成功的应用。例如，葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酶等等。

1.1酶桥法

酶桥法是利用酶链抗体将酶和组织切片中的抗原进行结合，在进行反应时通过与适当的底物的反应（一般是H2O2）以及二氨基联苯胺的显色剂，反应中会产生一种特殊的不溶性棕色反应产物。这种方法被多国使用，并且在使用过程中一步步改进，最终发展为更加敏感的多级桥联法，这种桥联法有利于提高在抗原部位的反应产物的沉积能力。

1.2 PAP法

PAP法是过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物，其中包括了辣根过氧化物酶抗体，以及由辣根过氧化物酶抗原组成的可溶性复合物，其为五环状结构，它由三个分子辣根过氧化酶及两个抗体分子共同组成，非常的稳定，甚至超过免疫荧光法敏感度的100—1000倍，比酶桥法敏感20倍，它的原理很复杂，是特异性初级抗体（一抗）的Fab段和组织抗原的结合，随后二抗（桥抗）在一抗和PAP复合物之间形成分子桥联，在反应过程中，一抗和 PAP中的免疫球蛋必须要是同样的种属，从而可以衍生自其它种属的二抗，对一抗分子的稳定成分及PAP