下载文档原格式
第三节动物细胞工程动物细胞与组织培养、细胞核移植与动物体细胞克隆学习目标：1.简述动物细胞培养的过程、条件及其应用；2.简述克隆动物的概念含义和基本原理；3.简述体细胞核移植技术和动物克隆技术，以及应用前景；课前导学：一、动物细胞工程包括的主要技术动物细胞工程的主要技术包括____ 、_____ 、___ ___、_______________、________________等技术。
其中_________________________是其他动物细胞工程技术的基础。
二、动物细胞与组织培养1．概念：动物细胞与组织培养是指在体模拟____ _ __，将动物细胞或组织在无菌、温度适宜和营养充足的条件下培养，使其、并维持原有和的技术。
2. 材料：动物或出生不久的的器官或组织。
3. 过程：（1）动物细胞培养：（2）动物组织培养：（3）动物细胞培养和动物组织培养的区别：动物细胞培养过程中需要用__________________等使________________________________________________。
4.培养条件：（1）温度：最适温度是°C左右。
（2）PH：最适PH范围是_______。
（3）气体：主要是和，气体的含量不仅影响培养环境的，还直接影响。
（4）营养物质：如、无机盐、氨基酸、维生素、核酸、嘌呤、嘧啶、和生长因子等。
5.培养基的种类：天然培养基：主要取自动物血清、动物组织提取液和鸡胚汁等，具有营养价值高、成分复杂的特点。
合成培养基：人工配制的，具有成分明确、便于控制实验条件的特点。
缺点是缺乏天然培养基中的某些无法代替的成分，因此需要加入。
6.培养类型：⑴原代培养：直接从动物体内取出的组织块，用胰蛋白酶使其分散成单个细胞，然后用培养基配成一定浓度的细胞悬浮液，转入培养瓶中进行培养的过程。
即初次培养。
⑵传代培养：原代培养到一定程度，细胞会出现，将原代细胞_________后转入新的培养瓶中继续培养的过程。
植物叶片的脱分化和再分化培养[实验目的]掌握无菌操作方法，将烟草叶片培养成愈伤组织并进一步分化成幼苗。
[实验用品]1.仪器：超净工作台、无菌滤纸、剪刀、镊子、大培养皿、无菌烧杯。
2.材料：烟草无菌苗和室外培养的烟草幼苗。
3.试剂：75%酒精、0.1%升汞、无菌水。
[实验步骤]1）操作前用温水和肥皂将手充分擦洗干净，再用75%酒精消毒，尽量做到不带菌；2）将装有无菌苗的培养瓶用75%酒精消毒后放在超净工作台上备用。
将室外培养的烟草先用自来水洗净后，用75%酒精消毒30~60s，于0.1%升汞中消毒5~10min，在于无菌条件下用无菌水冲洗4~5遍，用无菌滤纸吸干后备用；3）将上述材料在无菌条件下剪成0.5cm×0.5cm大小，接种于诱导培养基MS+BA1.0+NAA0.1中诱导愈伤组织，在此培养基上能诱导出愈伤组织并能长出小芽；4）将培养的带有愈伤组织的小芽接种在MS基本培养基中，芽能长成幼苗并且能生根。
[注意事项]1.操作前要洗手，进入超净工作台后手要用75%酒精擦拭。
试剂瓶等瓶口也要擦拭。
2.点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼后，要冷却后才能夹取组织，以免烧焦组织。
3.不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。
4.升汞是剧毒药品，一定不要直接用手接触，用完后要放在回收的容器中，不能直接倒入下水道中。
[实验报告]观察并记录接种的烟草脱分化的情况，分析讨论下述问题：1.接种的烟草组织有无污染？为什么？2.愈伤组织细胞是否出现绿色？讨论其来源与影响。
3.烟草组织经过分化培养、长出完整的植株，说明什么问题？在理论和实践中有何价值？。
