人教版高中生物选修一专题5课题3《血红蛋白的提取和分离》课件

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. 血红蛋白的提取和分离.

一、蛋白质分离的原理和方法

1．分离原理

依据蛋白质各种特性的差异分离蛋白质，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等。

2．凝胶色谱法

(1)概念：也称为分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。

(2)凝胶：微小的多孔球体，大多数由多糖类化合物构成，内部有许多贯穿的通道。

(3)原理：[填表]

蛋白质类型 能否进入凝胶内部 移动路程 移动速度

相对分子质量较小 能 较长 较慢

相对分子质量较大 不能 较短 较快

1.凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法，相对分子质量大的先洗脱出来，相对分子质量小的后洗脱出来。

2．在电泳中，待分离样品中分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状都会影响分子的迁移速度。

3．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移率完全取决于分子的大小。

4．蛋白质提取和分离的一般步骤是：样品处理及粗分离、纯化和纯度鉴定。

5．透析法可除去相对分子质量较小的杂质。

6．在对蛋白质进行纯度鉴定时，使用最多的方法是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。

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. 3．缓冲溶液

(1)作用：在一定范围内，抑制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。

(2)配制：由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，通过调节缓冲剂的使用比例就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。

4．电泳

(1)概念：指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。

(2)原理：

①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。

②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。

③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。

④方法：常用的电泳方法有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。

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- 1 - 专题5 DNA和蛋白质技术

课题3 血红蛋白的提取和分离

1．下列试剂可用于血红蛋白释放的是( )

①0.9%的生理盐水 ②甲苯 ③磷酸缓冲液 ④蒸馏水 ⑤柠檬酸钠

A．②④ B．①④

C．④⑤ D．①③

[解析]0.9%的生理盐水是洗涤红细胞是应用的试剂，不能用于血红蛋白释放；甲苯的作用是溶解细胞膜的磷脂，加速血红蛋白的释放；磷酸缓冲液用于粗分离蛋白质，不能用于释放血红蛋白；蒸馏水作用是使红细胞吸水胀破，释放其中的血红蛋白；柠檬酸钠的作用是采血时，防止血液凝固，不能用于血红蛋白的释放。

[答案]A

2．在血红蛋白分离过程中如果红色带区歪曲、散乱、变宽，与其有关的是( )

A．凝胶色谱柱的制作 B．色谱柱的装填

C．洗脱过程 D．样品的处理

[解析]在血红蛋白分离过程中如果红色带区歪曲、散乱、变宽，说明色谱柱制作不成功，可能是凝胶装填不紧密、不均匀，或者存在气人教版高中生物选修一

- 2 - 泡，打乱了洗脱次序所致。

[答案]B

3．在蛋白质的提取和分离中，下列关于样品处理及粗分离过程的叙述，正确的是( )

A．洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐

B．洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果

C．洗涤过程选用质量分数为0.1%的NaCl溶液

D．透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质

[解析]洗涤红细胞的目的是去除血浆中的杂蛋白；洗涤时离心速度过高，时间过长，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果；洗涤过程应选用质量分数为0.9%的NaCl溶液。

[答案]D

4．凝胶色谱柱取长为40 cm，内径为1.6 cm，有关说法中，不正确的是( )

A．一般凝胶色谱柱直径的大小不会影响分离的效果

B．凝胶色谱柱过高，超过1 m，不影响分离的效果

C．凝胶色谱柱过矮，则影响混合物的分离度

D．凝胶色谱柱直径过大会耗用过多洗脱液，样品的稀释度过大

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- 1 - 课题3 血红蛋白的提取和分离

课时过关·能力提升

基础巩固

1.电泳过程中,什么样的分子迁移速度最快?( )

A.纤维状、大分子

B.纤维状、小分子

C.球状、大分子

D.球状、小分子

[解析]:电泳是利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同将样品中各分子分离。一般来说,球状分子比纤维状分子移动速度快,小分子比大分子移动速度快。

[答案]:D

2.蛋白质提取和分离分为哪几步?( )

A.样品处理、凝胶色谱操作、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

B.样品处理、凝胶色谱操作、纯化

C.样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定

D.样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定

[答案]:C

3.凝胶色谱法中所用的凝胶的化学本质大多是( )

A.多糖类化合物 B.脂质

C.蛋白质 D.核酸

[答案]:A

4.洗涤红细胞时,所采用的离心方法是( )

A.低速长时间离心

B.低速短时间离心

C.高速长时间离心

D.高速短时间离心

[解析]:高速或长时间离心,会导致白细胞和淋巴细胞等一同沉淀,得不到纯净的红细胞,进而影响血红蛋白的提取纯度。

[答案]:B

5.在蛋白质的提取和分离中,下列关于对样品处理及粗分离过程的分析,正确的是( )

A.洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐

B.洗涤时离心速度过小,时间过短,白细胞等会沉淀,达不到分离的效果

C.洗涤过程选用质量分数为0.1%的NaCl溶液

D.透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质 人教版高中生物选修一

- 2 - [解析]:洗涤红细胞的目的是去除血浆中的杂蛋白;洗涤时离心速度过高、时间过长,白细胞等会沉淀,达不到分离的效果;洗涤过程应选用质量分数为0.9%的NaCl溶液。

[答案]:D

6.下列关于凝胶色谱柱装填的叙述,错误的是( )

A.交联葡聚糖凝胶(Sephadex G-75)中“G”表示凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围,75表示凝胶得水值

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人教版高中生物选修1专题5 课题3《血红蛋白的提取和分离》导学案

一、基础知识

（一）凝胶色谱法

1、凝胶色谱法也称做 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。

2、凝胶实际上是一些微小的 球体，这些小球体大多数是由 构成的，如葡聚糖或琼脂糖。

3、在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ；而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。

（二）缓冲溶液

1、缓冲溶液的作用是 。

2、缓冲溶液通常由 溶解于水中配制而成的。

3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，为了

，必须保持体外的pH与体内的 。

（三）电泳

1、电泳是指 。

2、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上

。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。电泳利用了待分离样品中各分子 的差异以及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。

3、两种常用的电泳方法是 和 ，在凝胶中加入SDS，电泳速率完全取决于