与酵母菌具有共生作用乳酸菌LC5培养基的优化

《抗真菌乳酸细菌培养条件的优化及在乳清防腐中的应用》篇一一、引言随着食品工业的快速发展，乳制品的保存与防腐问题逐渐凸显。

在乳制品的加工和储存过程中，由于微生物的污染和生长，尤其是真菌的滋生，常常导致乳制品的腐败和品质下降。

乳酸细菌作为一种常见的益生菌，具有抗真菌、抗菌等特性，因此其在乳制品的防腐中具有重要应用价值。

本文旨在研究抗真菌乳酸细菌的培养条件优化及其在乳清防腐中的应用。

二、抗真菌乳酸细菌的培养条件优化1. 培养基的选择与配制抗真菌乳酸细菌的培养基选择对于其生长和繁殖至关重要。

我们通过对比不同配方的培养基，包括碳源、氮源、微量元素等，发现以乳清为主要碳源，酵母提取物和蛋白胨为氮源的培养基对乳酸细菌的生长具有较好的促进作用。

此外，添加适量的钾、磷等微量元素也有助于提高乳酸细菌的生长速度和产量。

2. 培养温度与时间培养温度和时间是影响乳酸细菌生长的重要因素。

通过实验，我们发现适宜的培养温度为37℃，在此温度下，乳酸细菌的生长速度较快，且能够保持较高的活性。

此外，适当的培养时间也是关键，过短的培养时间可能导致乳酸细菌数量不足，过长则可能造成营养消耗过多，影响其活性。

3. 培养环境的pH值培养环境的pH值对于乳酸细菌的生长具有重要影响。

我们通过调整培养基的pH值，发现当pH值为6.5-7.0时，乳酸细菌的生长最为旺盛。

因此，在培养过程中需严格控制培养环境的pH 值。

三、抗真菌乳酸细菌在乳清防腐中的应用1. 乳清防腐的必要性乳清是乳制品加工过程中的一种副产品，含有丰富的营养成分，易受微生物污染。

因此，乳清的防腐对于保证其品质和延长保存期限具有重要意义。

2. 抗真菌乳酸细菌在乳清防腐中的应用抗真菌乳酸细菌具有抑制其他微生物生长的特性，因此可应用于乳清的防腐。

通过将优化后的抗真菌乳酸细菌加入到乳清中，可以有效抑制其他有害微生物的生长，延长乳清的保存期限。

同时，乳酸细菌的添加还可以提高乳清的品质和口感。

四、实验结果与分析1. 培养条件的优化结果通过对比不同培养条件下的乳酸细菌生长情况，我们发现优化后的培养条件（如培养基的选择与配制、培养温度与时间、培养环境的pH值等）可以有效提高乳酸细菌的生长速度和产量。

第27卷　第3期 中　国　乳　品　工　业V ol127,N o13　1999年　6月　CHI NA DAIRY I NDUSTRY June1999乳酸菌增菌培养基的优化设计The Design of Orthogonality Test Optimizing of EnrichmentMedium of Lactic Acid B acteria吕加平Lu Jiaping 梁占东Liang Zhandong(东北农业大学・哈尔滨150030) (黑龙江省粮油食品贸易公司) (N ortheast Agricultural University)(Heilongjiang Provincial G rain and Oil T rade C o.)　骆承庠Luo Chengxiang 郭彦友G uo Y any ou(东北农业大学・哈尔滨150030)　(黑龙江味全乳品公司・安达151401) (N ortheast Agricultural University)(Heilongjiang Wei Quan Dairy C om pany)摘　要:采用有交互作用正交试验优化设计了乳酸菌(嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌)增菌液,结果表明,对嗜热链球菌宜采用酪蛋白水解物、乳糖、番茄汁、β-磷酸甘油二钠,而保加利亚乳杆菌则宜采用鱼肉蛋白胨、乳糖、酵母浸膏、K2HP O4-K H2P O4,在37℃下培养24h后菌落总数分别可达5.76×109 cfu/ml和4.69×108cfu/ml。

关键词:乳酸菌;增菌液;正交试验Abstract:T he orth og onality test used to design the opti2 mum enrichment br oth of lactic acid bacteria(streptococ2 cus therm ophilus(ST-1)and lactobacilus bulgaricus (LB-1)).T he best enrichment br oth for ST-1consist of casein hydr olysate lactose、tomato juice,β-glyc2 er oph osphate dis odium,and the optimum enrichment br oth for LB-1consist of peptone(fish powder)、lactose、K2 HP O4-K H2P O4、yeast extract.T w o enrichment medium in oculated with ST-1and LB-1cultivated at37℃24 h,and the viable counts were5.76×109c fu/m l and4.69×108c fu/m l,res pectively.K ey w ords:orth og onality test;enrichment medium;lac2 tic acid bacteria收稿日期　1999—03—18吕加平　男,35岁,教授,从事食品微生物学与乳品工艺学的教学与科研工作.0　引　言 乳酸菌分离培养及其酶学研究、乳酸菌发酵剂的制备等都需要有良好的增菌培养基,使乳酸菌得以大量增殖,从而使乳酸菌在经过喷雾干燥、冷冻、冻干等处理后有足够的活菌数残存。

专利名称：一种乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂的生产方法
专利类型：发明专利
发明人：田建军,贺银凤,张开屏,靳烨
申请号：CN201310433882.6
申请日：20130923
公开号：CN103468615A
公开日：
20131225
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂的生产方法，其特征是将分离自内蒙古民族乳制品酸马奶酒中的乳酸菌和酵母菌进行共生组合筛选，选出一组具有互相促进作用的屎肠球菌HE5和酿酒酵母J-4。

在优化的脱脂乳培养基上培养筛选出的屎肠球菌HE5和酿酒酵母J-4时，乳酸菌活菌数达到2.88×10CFU/mL；酵母菌的活菌数达到3.3×10CFU/mL，双菌培养促进乳酸菌生长作用较好。

将培养收获的双菌冷冻干燥得到一种乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂，所述微生物制剂共生作用好、产酸能力强。

申请人：内蒙古农业大学
地址：010018 内蒙古自治区呼和浩特市昭乌达路306号
国籍：CN
代理机构：北京君智知识产权代理事务所
代理人：田燕
更多信息请下载全文后查看。

酸通常在乳制品发酵过程中占据着主导地位，但是在多种传统发酵乳制品中均有酵母菌的存在，且会与乳酸菌产生相互作用，二者在传统发酵乳制品中均具有重要地位。

在传统发酵乳制品中，乳酸菌和酵母菌相互作用形成一个复杂的菌群，其生态环境稳定，菌种之间的相互作用直接对乳制品的营养特性、风味等方面产生影响。

现对发酵乳制品中乳酸菌与酵母菌相互作用进行研究，为设计出更为优质的发酵产品提供参考资料。

发酵乳制品中乳酸菌与酵母菌相互作用关系拮抗作用。

乳酸菌与酵母菌混合培养时，二者产生的物质会对其他菌群的生长产生抑制作用或与营养素的成长产生竞争作用。

但是酵母菌与乳酸菌之间的拮抗作用机理仍处于研究当中。

相关研究中认为，发酵乳制品中乳酸菌和酵母菌混合会对乳酸菌的生长产生抑制作用，主要是溶脂酵母产生的脂肪酸对乳酸菌进行抑制。

而酵母菌也会对乳酸菌的生长产生抑制作用，主要是乳酸菌产生的4-羟基-苯乳酸、苯乳酸、环肽发挥该抑制作用。

还有学者指出，糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、N-乙酰基β-葡萄糖脱水酶和肽酶活性增强，进而促进乳酸菌生长。

①酵母发酵过程中产生的丙酮酸盐、B族维生素、氨基酸等物质可供乳酸菌生长利用。

②酵母菌产生的物质可诱导乳酸菌中氨基肽酶的合成，能提高小分子缩氨酸的含量，促进乳酸菌生长。

在信号分子方面，相关研究指出，在高渗透压、高氧、高酸条件下混合培养乳酸菌和酵母菌能提高风味和乙醇的含量，酵母菌在该条件下回产生长链不饱和脂肪酸酯，乳酸会产生乙醛、γ-癸内酯，二种菌均会产生乙醇、异戊酸等，这些物质是信号分子的标志。

在基因方面，有研究指出，乳酸菌与酵母菌混合培养时，负责代谢嘧啶的隐形基因占比低于菌株单独培养时，三磷酸胞苷合成量降低，而负责三磷酸尿苷转化为三磷酸胞苷的酶催化反应pyrG基因表达比例增大，出现该情况的原因可能是乳酸菌和酵母菌混合培养时乙醇的积累影响了乳酸菌mRNA水平上基因表达。

乳酸菌利用苏氨酸转化的乙醛是决定酸奶风味的重要物质。

酵母菌与乳酸菌混合培养条件研究周静;肖嫩群【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)015【摘要】[目的]研究酵母菌与乳酸菌混合培养的条件.[方法]对产朊假丝酵母(Candida tails)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)等4种菌的混合培养条件进行了优化,分析了溶解氧、温度、pH值、接种比例及接种量对其菌体生长的影响.[结果]在培养基的起始pH值6.5、酵母菌与乳酸菌混合种子(活菌数约2×10<'9>CFU/ml)中酿酒酵母菌数:产朊假丝酵母菌数:植物乳杆菌数:嗜酸乳杆菌数约为1:2:3:3、酵母菌与乳酸菌混合种子的接种量为0.2%、前期120r/min震荡培养24 h,后期静置培养24 h,培养温度为28℃恒温24 h,32℃恒温24 h条件下,培养液中的总活菌数可达到6.50×10<'8>CFU/ml.[结论]该培养基增殖效果好,适合应用于大规模生产混合发酵酵母菌与乳酸菌的发酵剂.【总页数】3页(P8824-8825,8830)【作者】周静;肖嫩群【作者单位】娄底职业技术学院农林工程系,湖南娄底,417000;湖南中医药大学药学院,湖南长沙,410208【正文语种】中文【中图分类】S132【相关文献】1.酵母菌与乳酸菌混合培养中试研究 [J], 贺月林;郭照辉;谭周进;尹红梅2.乳酸菌和酵母菌混合培养条件优化研究 [J], 李巧云;王潇;卢富山;尹清强3.乳酸菌与酵母菌混合发酵麦芽汁饮料工艺研究 [J], 刘仁禄;陶兴无;许晓梅;岳崟;卞猛4.酵母菌与乳酸菌混合发酵制备酸豆浆酒的研究 [J], 符桢华;王永华;于铁妹;黄强;邵佩霞5.乳酸菌和酵母菌混合发酵制备谷物发酵饮料的工艺研究 [J], 赵修报;程立坤;付强;张莎莎;沈志强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

【word】酵母菌与乳酸菌混合培养条件研究酵母菌与乳酸菌混合培养条件研究安徽农业科学,JournalofAuhuiA.Sci.2011,39(15):8824—8825,8830责任编辑周婷婷责任校对卢瑶酵母菌与乳酸菌混合培养条件研究周静,肖嫩群.(1.娄底职业技术学院农林工程系,湖南娄底41700o;2.湖南中医药大学药学院,湖南长沙4lo208)摘要[目的]研究酵母菌与乳酸茵混合培养的条件.[方法]对产朊假丝酵母(Candidatails),酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae),植物乳杆菌(1xwtobacillusplantarum),嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)等4种茵的混合培养条件进行了优化,分析了溶解氧,温度,pH值,接种比例及接种量对其菌体生长的影响.[结果]在培养基的起始pH值6.5,酵母菌与乳酸茵混合种子(活菌数约2x10CFU/rn1)中酿酒酵母菌数:产朊假丝酵母茵数:植物乳杆菌数:嗜酸乳杆菌数约为1:2:3:3,酵母菌与乳酸菌混合种子的接种量为0.2%,前期120r/min震荡培养24h,后期静置培养24h,培养温度为28?恒温24h,32cc恒温24h 条件下,培养液中的总活茵数可达到6.50x10.CFU/ml.[结论l该培养基增殖效果好,适合应用于大规模生产混合发酵酵母菌与乳酸茵的发酵剂.关键词发酵;混合培养;乳酸茵;酵母茵中图分类号S132文献标识码A文章编号O517—6611(2011)15—08824—02StudyonMixedcultureConditionsofYeastandLacticAcidBacteriaZHOUJingetal(HunflnLoudjVocationalandTechnica1College.Loudj,Honan417 00o)AbstractIObjectivel11heaimwastoresearchthemixedcultureconditionsofye astandlacticacidbacteria.『Method1T}lemixedcultureconditionsofCandidatails,Saccharomycescerevisiae,Lactobacillusplanta rum,,tobacillusacidophiluswereoptimized.Theeffectsofdissolved oxygen,temperahtre,pH.inoculationratioandinoeulumconcentrationonitsc ellgrowthwereanalysed.fResuh}rheresultsshowedtIlatthenumberoftotalviablecellscouldreach6.50×10CFU/mlundertheconditionsof itsoriginalpH6.5.thenupaberofSaceharomycescerevisiae:Candidatails;l_zwtobacillusplantarum:Lactobacillusacidophiluswas1:2 :3:3(2×10CFU/m1),themixedinoculumofyeastandlacticacidbacteriawas0.2%,120r/minfor24hatfirst,thenstaticcuhre24h,28?for24hand32oCfor24h.IConclusionIemuhiplicationeffectofthecUlturemediumwaswellandwassuitableformassproductionofmixe dfermentationofyeastandlacticacidbacteria.KeYwordsFermentation;Mixedculture;Yeast;Lacticacidbacteria酵母菌和乳酸菌在自然界分布很广,主要生长在偏酸性,含糖较丰富的环境中,它们拥有丰富的酶系和多种经济价值很高的生理活性物质,是继动物蛋白和植物蛋白后的另一种重要蛋白质来源,其发酵产品是优质的饲料添加剂,因此,具有良好的开发利用价值.脱脂乳及各菌种的种子培养基营养成分丰富,可满足酵母菌和乳酸菌生长繁殖的需要,但是由于其成本高,不宜用来大规模生产酵母菌和乳酸菌.大豆,玉米花生中也含有丰富的营养物质,可以用作酵母菌和乳酸菌的培养基.一些蔬菜如胡萝卜,黄瓜,番茄等也可作为混合培养酵母菌与乳酸菌增殖培养的培养基,但需添加大量的碳源和氮源,使生产操作过于复杂.笔者通过对4株生产菌混合培养条件的研究,旨在为大规模生产酵母菌和乳酸菌提供理论依据.1材料与方法1.1材料1.1.1菌种.产朊假丝酵母(Candidatails),酿酒酵母(Sac—charomycescerevisiae),植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum),嗜酸乳杆菌(LactobaciUusacidophilus)菌种均购自中国农业微生物菌种保藏中心.1.1.2培养基.MRS液体培养基:蛋白胨10g,酵母提取物5g,柠檬酸二铵2g,葡萄糖20g,牛肉膏10g,吐温一80lJlll,K2HPo42g,bl gSO4?7H200.58g,MnSO’4HO0.25g,水100oInl,pH值6.4,用于制备乳酸菌菌种的种子液;麦芽汁培养基:按照参考文献[1—2]制作.以上培养基均在121?下灭菌20rain.1.1.3主要仪器设备.高压灭菌锅,显微镜,电子天平,超导蔷科:a湖j~$南(涟K源10人010,3讲9-师211974,事微生物生态学及作者简介周静(一),女,湖南涟掠人,讲帅,从中忸植物保护方面研究.收稿日期2011-02—18净工作台,恒温培养箱,榨汁机,pH计,721型分光光度计,L. 2O0型发酵罐,恒温摇床.1.2方法1.2.1溶解氧对菌体生长的影响.采用间歇震荡法,即在MRS液体培养基中按产朊假丝酵母:酿酒酵母:植物乳杆菌:嗜酸乳杆菌=1:1:1:1进行接种,前期120r/min震荡培养, 后期静置培养,总培养时间为48h,培养温度为30?,震荡时间设8,16,24,30h4个处理,培养完后分别检测酵母菌与乳酸菌的数量.1.2.2温度对菌体生长的影响.采用间歇震荡法,在MRS液体培养基中按产朊假丝酵母:酿酒酵母:植物乳杆菌:嗜酸乳杆菌=1:1:1:1进行接种,前期120r/min震荡培养24h,后期静置培养24h,培养温度设28?恒温48h,28?恒温24h,32?恒温24h,32?恒温48h等3个温度梯度.培养完后分别检测酵母菌与乳酸菌的数量.1.2.3pH值对菌体生长的影响.采用pH计测定pH值.在MRS液体培养基中设起始pH值4.5,5.5,6.5,7.54个处理,按产朊假丝酵母:酿酒酵母:植物乳杆菌:嗜酸乳杆菌= 1:1:1:1进行接种,前期120r/min震荡培养24h,后期静置培养24h,培养温度为前期28恒温24h,后期32?恒温24h.培养完后分别检测酵母菌与乳酸菌的数量.1.2.4接种比例对菌体生长的影响.在MRS液体培养基中进行试验,种子为酿酒酵母菌数:产朊假丝酵母菌数=1:2 的混合酵母种子;植物乳杆菌数:嗜酸乳杆菌数=1:I的混合乳酸菌种子.按混合酵母种子(1OCFU/m1)与混合乳酸菌种子(3×109CFU/m1)为0.5%:1%,1%:l%,1.5%:1%,2.0%:l%接种量进行接种,前期120r/rain震荡培养24h,后期静置培养24h,培养温度为前期28恒温24h,后期32.f百温24h.培养完后分别检测酵母菌与乳酸菌的数量. 1I2.5接种量对菌体生长的影响.在MRS液体培养基中39卷1期周静等酵母菌与乳酸茵混合培养条件研究8825 进行试验,种子为酿酒酵母菌数:产朊假丝酵母菌数=1:2的混合酵母种子;植物乳杆菌数:嗜酸乳杆菌数=1:1的混合乳酸菌种子.按混合酵母种子(10CFU/m1)与混合乳酸菌种子(3×10CFU/m1)的比例为1.5%:1%接种量进行接种混合培养,制得4种菌的混合种子,然后将酵母与乳酸菌的混合种子按0.1%,0.2%,0.3%,0.4%,0.5%进行接种,前期120r/min震荡培养24h,后期静置培养24h,培养温度为前期28qC恒温24h,后期32?恒温24h.培养完后分别检测酵母菌与乳酸菌的数量.1.2.6酵母菌与乳酸菌总数的测定.在MRS固体培养基中添加500ppm的硫酸铜来抑制酵母菌的生长,采用稀释平板计数法…测定乳酸菌的总数.在改良的酵母菌固体培养基(YPD)中添加500ppm的农用链霉素,能够排除乳酸菌生长对酵母菌总菌数检测的干扰,得到发酵产品中的酵母菌总活菌数.2结果与分析2.1溶氧对菌体生长的影响由表1可见,随着震荡时间延长,培养物中的酵母菌总数增多,但震荡24,30h的酵母菌的数量增加明显.乳酸菌的数量也随震荡时间的延长而增多,这是由于酵母菌的生长会产生一些代谢活性物质,促进乳酸菌在后期的繁殖,从而说明了酵母菌对乳酸菌生长的促进作用,酵母菌与乳酸菌共培能够取代乳酸菌培养基中的酵母添加物.从2类菌所占总菌数中的比例来看,震荡培养24 h能够达到产品中的比例.因此,前期震荡培养24h,后期静置培养24h能够培养出合格的产品,并且起到降低能耗的作用.表1溶氧对菌体生长的影响Table1Effectofdissolvedoxygenonthebacteriagrowth2.2培养温度对活菌数的影响由表2可见,3个温度处理的总菌数相差不大,但是从总菌数中酵母菌与乳酸菌数量的比例及生产能耗来看,4种菌混合培养时的最佳温度以32? 培养24h较合适.表2培养温度对活菌数的影响Table2Effectoftemperatureonthenumberofviablebacteria 2.3起始pH对菌生长的影响由表3可见,混合发酵培养的起始pH为4.5或5.5时,因混合培养菌在培养的过程可产生酸,使pH值下降较快,影响酵母菌的生长;起始pH为7.5时,酵母菌的代谢特征会发生改变,可能发酵糖产生部分甘油,影响乳酸菌的生长.因此,起始pH调为6.5左右时,有利于4种菌的协调生长.表3起始prl值对菌体的生长的影响Table3EffectoforiginalpHonthebacteriagrowth2.4接种比例对菌体生长的影响由表4可见,以酵母菌:乳酸菌:1.5%:l%进行接种时,产品中的酵母菌数与乳酸菌数的比例较合适,符合生产要求.当酵母菌与乳酸菌比例过高时,虽然总菌数较高,但会影响酵母菌在产品中的比例,当酵母菌与乳酸菌比例过低时,会使总菌数降低,影响生产效果和产品质量,这也证明了酵母菌生长产生的物质对乳酸菌生长的重要性.表4接种比例对菌体生长的影响Table4Effectofinoculationratioonthebacteriagrowth2.5接种量对菌体生长的影响由表5可见,随着接种量的增加,总菌数增加,但是接种量从0.2%增加到0.5%时,总菌数增加的量不大,而在工业生产中种子的制作条件比较苛刻,生产成本相对较高,因此,综合考虑,乳酸菌与酵母菌混合培养的混合种子接种量以0.2%较合适.表5接种量对菌体生长的影响Table5Effectofinoculumonthebacteriagrowth3结论与讨论产朊假丝酵母(CaMidatails),酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum),嗜酸乳杆菌(Laetobaeillusacidophilu~)等4种菌混合培养的摇瓶发酵工艺优化结果表明,4种菌混合培养的条件为培养基的起始pH值6,5;酵母菌与乳酸菌混合种子(活菌数约2X10CFU/m1)中酿酒酵母菌数.产朊假丝酵母菌数:植物乳杆菌数:嗜酸乳杆菌数约为l:2:3:3;酵母菌与乳酸菌混合种子的接种量(下转第8830页)安徽农业科学2o11年2.3.4酶的pH稳定性.将酶液与等体积的pH5.5,10.0的各种缓冲液分别混合,在4?下静置过夜,再将各酶液调至最适作用pH,按标准酶活测定法测定残留酶活,以最适pH条件下保温后所测得的酶活作为100%,其余的残留酶活折合成相应的百分数.从图5可以看出,脂肪酶在中性及偏碱性范围内比较稳定.薹童童粪罢图5pH对酶稳定性的影响Fig.SEffectofpHonlilmsestabmty3结论与讨论从源于油页岩有机堆肥的含菌样品中分离到1株产脂肪酶活性较高的菌株09-7—1,经鉴定为黑曲霉,通过正交试验优化其培养基和培养条件,确定适合菌株09-7—1产脂肪酶的培养基为:5.0g/L可溶性淀粉,8.0L橄榄油,2.0g/L酵母膏,2.0eVE(NH4):HP04,1.0g/LKH2P04,2.0Ll(2HPO4;产酶条件为:250ml三角瓶装液量为35IIll,接种量12%,培养温度32?,培养初始pH5.2,摇床转速160r/min,培养时间5d.在优化条件下,o9.7—1发酵液中粗酶活力可以达24.112U/盯d,与最初的13.164U/ml相比,酶活提高了83.2%;该酶的最适作用温度为30?,最适作用pH为7.0,在40—60?内具有良好的热稳定性.脂肪酶产生菌株的初筛过程中采用了2种初筛培养基,一种是在脂肪酶产生菌分离和初筛培养基中加人12rI1l0.4g/L的溴甲酚紫作指示剂,另一种是以1ml1.6%中性红水溶液作指示剂前者反应灵敏,产脂肪酶菌株菌落周围水解黄色透明圄明显,直径可测,而且其与菌苔直径的比值可以作为初筛依据;后者反应不明显,只能观察到菌落变红,不能测定水解圈,所以该研究的初筛培养基以溴甲酚紫作指示剂,初筛中透明圈直径与菌苔直径比值大小和复筛中摇瓶发酵酶活测定结果基本一致.用摇瓶培养复筛,黑曲霉09—7—1所产脂肪酶活力大于对照菌株解脂亚罗酵母1444,表明此复筛培养基适用于黑曲霉09-7—1,与对照菌株相比,该菌株产酶能力较强.该研究筛选到的黑曲霉O9—7—1,产酶活性高,所产脂肪酶稳定,有潜在的应用价值,其菌种选育及相关功能基因研究正在进行中,以期提高其产脂肪酶能力.参考文献[1]张树政酶制剂工业(下册)[M].北京:科学出版社,1984:655—670.[2】SLIMC,AHMEDF,NABILM,eta1.Crabdigestivelipaseactingat恸temperature:purificationandbiochemicalcharacterization[J].Biochimie, 20O7,89(8):1012—1018.[3]LIUY,WANGF,TANT.Cychcresolutionofl~nicibuprofenviaCOil-piedefficientlipaseandacid—basecatalysis[J].Chirdity,2OO9,21(3):349 —353.[4]YINC,L/UT,TANSynthesisofvitaminAest?byimmobilizedn扛dasp.1ipaseino瑁cmedia[J].ChineseJournal0fChemicalErIing,2006,14(1):81-86.[5]彭立凤,赵汝淇,谭天伟.微生物脂肪酶的应用[J].食品与发酵工业,73. 2000,26(3):68—[6]HEMACHANDERc,PUvANAl(fuSANR.IipasefromRalstoniap擤ettiiasadditiveinIaundrydetergentform,,lations[J].Pfoc(~sltiechemis—try,2OOO,35(8):809—814.[7]谭天伟,鲁吉珂,聂开立,等.酶法合成生物柴油工业化研究进展[J】.生物工程,2010,26(7):903—906.[8]SH/M/ZUS,NAKANOM.Structuralcharacter/zafianofacyfglyceIinseveraloilscontaininggamma-hndemcacid[J].Biascience,Bioteehnolo- gY,andBiochemistry,20O3,67(1):60—67.[9]高修功,章克昌,曹淑贵,等.假单胞菌产脂肪酶条件的初步探索[J].微生物学通报,1997,24(3):152—155.[1O]KANWARL,c0G0IKB,GOSWAMIP.ProductionofaPseudomonasli—paseinn-alkanesubstrateanditsisolationusinganimprovedammoniumsulfateprecipitationtechnique[J].BioresourceTechnology,2002,84(3): 207—211.[11]赵博,陶进,马却生,等.定向进化提高枯草芽孢杆菌脂肪酶的活力[J].催化,2oo9,30(4):291—296.[12]宋庆训,林金萍,戎一平,等.脂肪酶产生菌Cand/danzg’ostl产酶条件研究[J].生物工程,2001,17(1):101—104.I13]MONTESINOSJL,DALMAUE,CASASC.Lipaseproductioninconfinu—OU8cultureofCandh~[J]./oumalofChemicalTechnologyand Biotechndogy,20O3,78(7):753—761.[14]颜兴和,王栋,镲根霉脂叻酶的研究进展[J].工业微生物,2005,35 49. (3):45—[151舒正玉,杨江科,闫云君.黑曲霉Fo44脂肪酶的分离纯化及酶学性质研究[J].生物工程,211o7,23(1):96一lOO.[16]韦裕萍,蒋咏梅,周晓兰,等碱性脂肪酶产生菌扩展青霉W-13R2的诱变育种[J].生物技术,1999,9(4):11—15:I17]WOISKIE,MENUSIE,REMONATrOD,eta1.Pardalcharacterizationof lipasasproducedbyanewlyisolatedPenLd///umsD.ins0lidstateand submergedfermentation:Ao0mparadvestudy[J].LWT-FoodScienceand Technology,2O09,42(9):1557—1560.[18]黄秀梨,辛明秀,夏立秋,等.微生物学试验指导[M].北京:高等教育出版社,2O08:146—149.[19]张苓花,王运吉.高产脂肪酶菌株的诱变筛选[J].生物技术,1996,6 (2):20—22.[2o]张立莹,魏东芝,童望宇.假丝酵母CandidaFllgosa产脂肪酸条件的优化[J].生命科学研究,2003,7(4):320—323.[21]汪小锋,王俊,杨江科,等.微生物发酵生产脂肪酶的研究进展[J].生物技术通报,2o~(4):47—53.[22]GUPTAR,GUI~AN,RATHIP.Bacteriallipases:Anoverviewofpredue-fion,purificationandbiochemicalproperties[J].ApphedMicrobiology andBiotechnology,2OO4,64(6):763,781.[23]董明奇,史岩,姜春雷,等.脂肪酶高产菌株的筛选及酶学特性研究【J].四川大学:自然科学版,2OO8,45(4):985—99O.(上接第8825页)为0.2%;采用前期120r/min震荡培养24h,后期静置培养24h,培养温度为28?恒温24h,32oC恒温24h.培养液中的总活菌数可达到6.50×10.cFU/Hll.该培养基增殖效果好,价格比较低廉,培养条件也简单易行,适合应用于大规模生产混合发酵酵母菌与乳酸菌的发酵剂.有关中试条件有待于进一步验证.参考文献[1]黄秀梨.微生物学实验指导[M].北京:高等教育出版社,1999.[2]俞俊棠,唐孝宣.生物工艺学[M].上海:华东化工学院出版社,1991[3]李季伦.微生物生理学[M].北京:中国农业大学出版社,1995.。