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微生物生長曲線的測定一.實驗目的1.瞭解典型微生物生長曲線的四個時期所代表的意義。
2.學習分光光度計的測定原理和實驗步驟。
3.了解微生物生長情形，生理特性與培養特徵。
二.器材和儀器1.錐形瓶2.量筒3.玻棒4.定量玻璃吸管5.不鏽鋼吸管筒6.酒精燈7.取藥杓8.秤藥紙9.燒杯 10.電子天瓶 11.分光光度計 12.恆溫水浴振盪器 13.比色管 14.標籤 15.電子天平三.試劑及材料1.酒精2.酵母菌粉3.葡萄糖粉四.微生物之生長曲線以菌數和時間作圖在批次培養情形下，可以菌數和時間作圖，得生長曲線。
實驗以批次培養方式進行•遲滯期(lag phase): 微生物正適應新環境，吸收養份以合成新細胞，細胞雖變大，但仍未分裂，故細胞數目無明顯增加。
•對數期(logarithmic phase): 細胞呈幾何級數增加，菌之生理較一致，為微生物實驗最佳時期。
•穩定期(stationary phase): 微生物代謝，消耗養分、同時產生代謝毒物，造成新分裂與死亡之菌數約略相等，因此菌數沒太大改變。
•死滅期(death phase): 養分已漸消耗完畢，而代謝毒物累積更多，造成新生菌數遠小於死亡菌數，因此菌數遞減。
五.步驟1.先紀錄微生物種類含來源2.酵母菌液的配置;取0.5g酵母菌粉和1g葡萄糖一起加入50ml的培養液搖均勻3.取部份菌液加入比色管(8分滿),用分光光度計測其吸光質,波長用595nm。
→為了要做基準線的校正4.將菌液瓶放在37°c的培養箱振盪培養,每15分鐘取出瓶子,取部份菌液重複做5次下列的事情:(1)加入比色管(8分滿),用分光光度計測其吸光質,波長用595nm。
(2) 用塗碟法測菌數,要先做10倍稀釋至少4次,最後取0.1ml的菌液滴在培養基的正中央,用滅菌的三角彎棒均勻塗抹。
注意:菌液要先適當稀釋後才塗碟,事後再推算回去。
5.把每個培養皿放進振盪器,隔天觀察並計算培養基菌數(個/ml) 數據有六次。
酵母菌生长曲线的测定及其转葡萄芪合酶基因重组菌遗传稳定性的检测郭春叶1,龚月生1*,刘林丽2,曹雨莉1(1.西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;2.西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100)摘要采用分光光度计比浊法测定酿酒酵母IN V S c1的生长曲线,确定菌体生长规律;并以此为依据,制备酿酒酵母感受态细胞,进行葡萄芪合酶基因酿酒酵母重组质粒的转化;采用菌落P CR法快速鉴定阳性重组子,并进一步检测重组质粒在重组菌中的稳定性。
结果表明,于酵母菌对数生长中期(OD600为0.8时)进行重组质粒的转化,可以得到较高的转化效率;在0～72h发酵培养过程中重组质粒在宿主菌中的稳定性达到100%。
这为后续工作开展葡萄芪合酶基因在酿酒酵母中的诱导表达研究奠定了技术基础。
关键词酿酒酵母;生长曲线;稳定性;芪合酶中图分类号Q933文献标识码 A 文章编号0517-6611(2007)07-01909-02M e a su rem e n t o f Y e a s t G row th C urv e an d G en e t ic S tab ility E x am in a tio n o f R e c om b in an t Ye a s t T ran s fe rre d G ra pe S t ilb e n e Sy n th a s e(STS) GUO Ch u n-y e e t a l(C o llege o f A n i m a l S cien ce an d T ech n o log y,N or thw e st A&F U n iv ers ity,Y an g lin g,S h aan x i712100)A b s tra c t Y e ast g row i n g ru le w as con firm ed by m e asu r i n g th e g row th cu rv e o f I N V S c1by spectro-ph o tom e te r tu rb id ity.A cco rd in g to th is g row in g cu rve,ye as t com pe ten t ce lls w e re m ade u p an d w e re tran sfo rm ed by th e yea st reco m b in an t plasm id con ta in in g stilben e syn th a se gen e der ivedfromg rape.T h e po si-tiv e reco m b in an t vector w as rap id ly iden tified by u sin g co lon y P CR.T h en,th e s tability o f recom b in an t ve cto r i nrecom b i n an t yea st w as ex am in ed.T h e re-su lts sta ted,a t th e m id-log a rithm ic ph a se(OD600o f0.8)th e tran s fo rm a tion o f re com b in an t p lasm id w as h igh-e fficien t,and du rin g0～72hcu ltiv a tion pe-r iod th e stab ility ra te o f th e re com b in an t p la sm id in y eas t rea ch ed100%.I t m ay lay th e tech n ica l fou n da tion fo r th e f u r th e r in du cible e xpress ion o f ST S gen e in S.cerev isiae.K e y w o rd s Sacchar om y ces cerev isiae;G row th cu rve;S tab ility;S tilben e syn th ase芪合酶是存在于葡萄、花生、松树等少数种子植物中用于合成白藜芦醇等芪类次生代谢物的关键酶。
探究酵母菌种群大小的动态变化研究目的：分别说明种群个体数量的增长规律以及种群外部环境因素和种群内部因素对种群个体数量的制约。
实验过程：1、每八个同学分一组，全班分为7大组。
每组取一个锥形瓶，量取50ml已经配好的酵母菌培养液，至于锥形瓶中。
2、写好标签纸，贴在锥形瓶上。
标签纸格式如下3、每人取一块血球计数板，对本组瓶内酵母菌数量进行计数。
血球计数板的使用方法血球计数板用于在显微镜下直接计数单位容积内分散的单个菌体。
如细菌、酵母菌或霉菌的孢子的数量。
但由于血球计数板本身较厚，不能用油镜观察，仅适用于在干系统物镜下可见的个体较大的微生物的计数一、血球计数板的构造血球计数板是一块特制厚玻片。
玻片上由四道槽构成三个平台，中间的平台分成两半，其上各刻一个相同而有一定面积的小方格网。
方格的刻度有两种规格。
一种是分为25大格，每大格又分为16小格；另一种是分16大格，每大格分为25小格。
总数都是400小格（如图所示）。
每小格边长为0.05毫米，其面积为0.0025立方毫米，深度为0.1毫米，故每小格容积为0.00025立方毫米，即1/4×106毫升。
可由每小格中的菌数换算出每毫升菌液中的数量。
二、血球计数板的使用方法（一）取清洁干燥的血球计数板，加盖玻片盖住网格和两边的槽。
（二）将待测菌液充分摇匀后，用无菌吸管吸少许，由盖玻片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。
静置5-10分钟。
（三）在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。
位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。
如数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。
（四）计数时若使用刻度为16×25（大格）的计数板，则数四角的4个大格（即100小格）内的菌数。
如用刻度为25×16（大格）的计数板，除数四角的4个大格外，还需数中央1个大格的菌数（即80小格）。
1、试写出用紫外线诱变选育高产酒精啤酒酵母茵株的操作过程一、材料①菌种酵母菌(A4)为本实验室保藏菌种。
②麦芽汁液体培养基：将麦芽汁糖度滤后121℃灭菌20min。
③YPD培养基(g/L):液体培养基：酵母提取物10，蛋白胨20，葡萄糖20。
固体培养基:在YPD液体培养基中加入琼脂20,NaOH0.1Pl。
④原生质体再生培养基：在YPD固体培养基中分别添加KCl至0.7mo1九L,山梨醇至ZBZ:0.8mσ1/L,甘露醇至0.8mo1/L,17%的蔗糖。
以上培养基于115℃灭菌20min。
TTC上层培养基(g/L)：TTC(三苯基四氮唑盐酸盐)0.5，葡萄糖5，琼脂15。
TTC下层培养基(g∠L)：葡萄糖10，蛋白胨2，酵母膏1.5，KHPO,1，MgSO·7HO4，琼脂20,pl5.5。
⑤缓冲液：pH6.8的柠檬酸磷酸缓冲液。
⑥预处理剂:0.1%β-巯基乙醇，其中含0.1mol/L的EDTA-Nag⑦稳渗剂：KCI高渗缓冲液：缓冲液中添加KCl至0.7mo1/L；山梨醇⑧高渗缓冲液：缓冲液中添加山梨醇至0.8mo1九L；甘露醇高渗缓冲液：缓冲液中添加甘露醇至0.8mol∠L；蔗糖高渗缓冲液：缓冲液中加入17%的蔗糖。
⑨酶液：分别将1%,1.5%,2%,2.5%的蜗牛酶和0.4%蜗牛酶+0.4%纤维素酶溶于高渗缓冲液中，微孔滤膜过滤除菌，制备成不同浓度的酶液。
二、方法1、出发菌株生长曲线的测定挑取斜面菌株1~2环接种于50mLYPD液体培养基中,28℃,200r/min摇床培养24h后分别以1:100的量接种于装有1OmLYPD液体培养基的大试管中,28℃,200r/min摇床培养，每隔2h 取出一支试管，测定其OD值，绘制其生长曲线。
2、出发菌株原生质体制备与再生将活化好的菌种接种于盛有50mLYPD液体休培养基的锥形瓶中,28℃,200r/min摇床培养，当其进入对数生长期时，取5mL菌液3500r/min离心5min，用磷酸柠檬酸缓冲液洗2次，无菌加入0.1邹巯基乙醇,28℃静置10min，用高渗缓冲液洗涤3次，取1mL用无菌水稀释到10，取100μl涂YPD平板得“总菌落数(A)"，再取lml 菌液离心弃上清液，加入酶液,30℃水浴,2000r/min离心10min，高渗缓冲液洗涤2次后稀释至10°，分别取100μL涂YPD平板和原生质休再生平板得“未形成原生质体的菌落数(B)”和“酶处理后未形成原生质体的菌落数和原生质体再生的菌落数之和(C)"。
测定细菌生长曲线一、实验目的1．了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2．学习液体培养基的配制以及接种方法；3．反复练习无菌操作技术；4．了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5．掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；二、实验原理将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。
单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。
本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
三、实验器材大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基；取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计；四、实验步骤1．活化菌种将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块；2．接种6人大组分为3个小组，按表1接种。
基础学科Basic Disciplines高中生物“探究酵母菌种群数量的变化”实验方案改进杜静U1吕乐[2]([1]首都师范大学附属育新学校北京100096:[2]北京科技大学化学与生物工程学院北京100083)摘要酵母菌的种群数量增长实验是高中生物教学中的一个综合性探究实验，是课程标准要求中的重要部分。
本文 对课程要求实验方法进行丰富和改进，以自制果酒分离获得的酵母菌株为实验材料，进行18S rDNA分子鉴定。
在预 实验的基础上，对酵母菌进行液体培养，利用分光光度计測定种群数量动态变化并绘制其生长曲线，分析酿酒酵母的生 长特性及影响因素。
关键词酿酒酵母种群数量生长曲线中图分类号:G424 文献标识码:A DOI:10.16400/ki.kjdkx.2020.07.071Improvement on the Senior School Biological Experiment of Changingof Yeast Population Quantity in the WineDU Jing[", LV Le121([1] Yuxin School Affiliated to Capital Normal University, Beijing 100096;[2] School of Chemical and Biological Engineering, University of Science and Technology Beijing, Beijing 100083)Abstract The population growth experiment of Saccharomyces cerevisiae is a comprehensive exploration experiment in biology teaching of senior school.It is an important part of the curriculum standard.In this paper,the experimental methods required by the course were enriched and improved.Yeast strains isolated from fruit wine were used as experimental materials for18S rDNA molecular identification.On the basis of the pre-experiment,the yeast was cultured in liquid medium,the population dynamic change was measured by spectrophotometer and its growth curve was drawn,and the growth characteristics and influencing factors of Saccharomyces cerevisiae were analyzed.Keywords Saccharomyces cerevisiae;population quantity;growth curve酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为一种微小的单细 胞真菌，在食品发酵方面己有十分悠久的使用历史，其兼性厌 氧特性和产酸产气能力被利用作为食品发酵剂。
酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定1 目的要求（1）了解酵母菌、细菌等单细胞微生物生长曲线的特点及测定原理；（2）学习用血球计数板计数法和比浊法分别测定酵母和细菌的生长曲线。
2 基本原理细菌群体的生长繁殖可分为四期：1)．迟缓期（Lag phase）:细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。
此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少。
迟缓期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。
此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。
2).对数期(Logarithmic phase):又称指数期(Exponential phage)。
此期生长曲线上活菌数直线上升。
细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。
此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。
抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。
3)．稳定期（Stationary phase）:该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大。
由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、H2O2等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。
细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽胞等。
4)．衰亡期（Decline phase）:随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。
活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。
生理代谢活动趋于停滞。
故陈旧培养物上难以鉴别细菌。
体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。
掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。
一、实验目的1. 了解酵母菌的生长周期及生长规律。
2. 掌握酵母菌在不同环境条件下的生长特点。
3. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，其生长周期分为繁殖阶段、平衡阶段和衰减阶段。
在适宜的条件下，酵母菌生长迅速，繁殖能力极强。
本实验通过观察酵母菌在不同环境条件下的生长情况，了解其生长周期及生长规律。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：啤酒酵母、麦芽汁、葡萄糖、酵母提取物、琼脂、无菌水、无菌棉签、酒精灯、试管、培养皿、温度计、显微镜等。
2. 实验试剂：1.0M NaOH、1.0M HCl、0.9% NaCl、0.1M Tris-HCl、0.1M CaCl2等。
四、实验步骤1. 酵母菌活化：将啤酒酵母接种于含有麦芽汁的试管中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时，得到活化酵母菌。
2. 配制培养基：根据实验需求，分别配制含有不同碳源、氮源、无机盐的培养基。
3. 接种：将活化酵母菌用无菌棉签接种于不同培养基中，每个培养基接种3个平行样。
4. 培养与观察：将接种后的培养基置于37℃恒温培养箱中培养，每隔一定时间观察酵母菌的生长情况，记录酵母菌的形态、数量、颜色等特征。
5. 数据处理：对观察到的数据进行分析，绘制酵母菌生长曲线，计算生长速度、生长周期等指标。
6. 结果分析：分析酵母菌在不同环境条件下的生长特点，总结酵母菌的生长规律。
五、实验结果与分析1. 酵母菌在不同碳源条件下的生长情况实验结果表明，酵母菌在葡萄糖、麦芽汁等碳源条件下生长良好，菌落呈白色、圆形、湿润，边缘整齐。
在无碳源条件下，酵母菌基本不生长。
2. 酵母菌在不同氮源条件下的生长情况实验结果表明，酵母菌在酵母提取物、蛋白胨等氮源条件下生长良好，菌落呈白色、圆形、湿润，边缘整齐。
在无氮源条件下，酵母菌生长缓慢，菌落较小。
3. 酵母菌在不同无机盐条件下的生长情况实验结果表明，酵母菌在含有适量无机盐的培养基中生长良好，菌落呈白色、圆形、湿润，边缘整齐。
