9第二章凝胶色谱法

凝胶色谱法添加摘要凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。

凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。

凝胶色谱法主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。

目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。

凝胶色谱法-分类根据分离的对象是水溶性的化合物还是有机溶剂可溶物，又可分为凝胶过滤色谱（GFC ）和凝胶渗透色谱（GPC ）。

凝胶过滤色谱一般用于分离水溶性的大分子，如多糖类化合物。

凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水。

凝胶渗透色谱法主要用于有机溶剂中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等) 相对分子质量分布分析及分离，常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。

凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布，同时根据所用凝胶填料不同，可分离油溶性和水溶性物质，分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。

近年来，凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。

化学结构不同但相对分子质量相近的物质，不可能通过凝胶色谱法达到完全的分离纯化的目的。

凝胶渗透色谱技术原理凝胶色谱法-分子筛效益一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。

大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。

小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这Array种现象叫分子筛效应。

凝胶色谱法分离原理
在凝胶色谱法中，样品溶液滴加在凝胶柱中，随后样品分子将自由扩散进入凝胶基质内，形成一定的扩散层。

扩散层内的样品分子将受到凝胶基质的孔道大小限制，较大分子会较快地被孔道阻断，无法进一步扩散，而较小的分子则能较容易地扩散到较深的凝胶基质内。

由于扩散系数和凝胶孔道大小的关系，不同分子尺寸的物质在固定时间内扩散距离不同。

因此，通过调节色谱柱的选择性和操作条件，可以分离目标样品和其他杂质。

凝胶色谱法还可通过改变溶剂系统中的组分来调节管柱内的溶剂力和吸附条件，以改变物质在凝胶色谱柱中的保留时间。

例如，可以通过改变聚丙烯酰胺凝胶中的丙烯酰胺浓度来调节凝胶孔道的大小，从而实现对特定分子尺寸的选择性分离。

此外，凝胶色谱法还可以根据分子的电荷性质进行分离。

例如，对于蛋白质的分离，可以使用聚丙烯酰胺凝胶和SDS-聚丙烯酰胺凝胶。

在SDS-聚丙烯酰胺凝胶中，SDS（阴离子型表面活性剂）可以使蛋白质分子全部带上负电荷，从而根据其电荷大小进行分离。

总的来说，凝胶色谱法的分离原理是基于样品分子在凝胶柱中的扩散和滤过作用，通过调节凝胶孔道大小、溶剂组分和电荷性质等因素，可以实现对分子尺寸和性质的选择性分离。

凝胶色谱法在分析和纯化生物大分子方面具有广泛应用，并且可与其他技术相结合，如质谱联用、核酸测序等。

凝胶色谱法的原理和目的
凝胶色谱法是一种分离和分析生物大分子的常用方法，其原理是利用凝胶（如琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶）作为固定相，通过分子在凝胶中的大小和形状差异，使样品分子在凝胶中以不同的速率进行迁移，从而实现分离。

目的是通过凝胶色谱法可以实现以下几个目标：
1. 分离和纯化目标分子：凝胶色谱法可以将混合的生物大分子混合物分离成单一的成分，从而实现对目标分子的纯化。

2. 获得目标分子的大小和形状信息：不同大小和形状的分子在凝胶中的迁移速率不同，通过测定其迁移距离或迁移时间，可以获得目标分子的大小和形状信息。

3. 分析样品中不同组分的含量和相对分子量：通过凝胶色谱法可以定量分析样品中不同组分的含量，并通过与已知相对分子量的标准物质进行比较，可以得到目标分子的相对分子量。

总之，凝胶色谱法是一种用于分离和分析生物大分子的常用方法，既可以用于纯化目标分子，又可以获得目标分子的大小、形状以及相对分子量等信息。

简介 凝胶色谱技术是上世纪六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，对高分子物质有很好的分离效果。

在生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域被广泛采用，工业生产上也有非常广泛的应用。

一、分离原理　 一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。

大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。

小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。

具有多孔的凝胶就是分子筛。

各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。

分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫全排阻。

两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。

直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。

如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小有差别，也不会有好的分离效果。

因此，一定的分子筛有它一定的使用范围。

综上所述，在凝胶色谱中会有三种情况，一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙；三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。

大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。

对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。

凝胶渗透色谱目录一、基本原理 (2)1.1 凝胶的特性 (2)1.2 色谱的分离原理 (3)1.3 凝胶渗透色谱在分离技术中的应用 (5)二、仪器设备 (6)2.1 凝胶渗透色谱仪的主要组成部分 (7)2.2 主要性能指标及选择 (9)2.3 仪器设备的清洁与维护 (9)三、样品前处理 (11)3.1 样品的选择与制备 (11)3.2 样品浓缩与净化 (12)3.3 样品检测方法的建立 (13)四、实验操作流程 (14)4.1 样品进样 (16)4.2 柱塞泵的设置与调节 (17)4.3 检测器的选择与校准 (18)4.4 数据处理与结果分析 (19)五、理论基础与数学模型 (20)5.1 凝胶渗透色谱的理论基础 (22)5.2 数学模型在凝胶渗透色谱中的应用 (23)5.3 实验数据的解释与处理 (24)六、应用领域 (26)6.1 在化学领域中的应用 (28)6.2 在生物医学领域中的应用 (29)6.3 在环境科学领域中的应用 (30)七、常见问题与解决方案 (31)7.1 常见问题及原因分析 (32)7.2 预防措施与解决策略 (33)八、实验安全与防护 (34)8.1 实验室安全规程 (36)8.2 个人防护装备的使用 (37)8.3 应急处理措施 (38)九、最新研究进展 (39)9.1 新型凝胶材料的研究与应用 (40)9.2 色谱技术的创新与发展 (41)9.3 聚合物凝胶渗透色谱法的探索 (43)一、基本原理它的基本原理是利用具有不同孔径大小的多孔凝胶颗粒作为固定相，将待分离的混合物通过凝胶柱进行分离。

在色谱过程中，待分离的混合物会与凝胶颗粒发生相互作用，从而导致不同成分在凝胶颗粒之间的分配系数和扩散速率的差异。

根据这些差异，混合物中的各个成分可以通过不同的时间顺序依次通过凝胶柱，从而实现对混合物中各组分的高效分离。

GPC的关键参数包括：凝胶颗粒的大小和形状；溶液流速；压力；洗脱剂的选择和浓度。

凝胶渗透色谱法（GPC）一、凝胶渗透色谱凝胶渗透色谱Gel Permeation Chromatography（GPC)，一种新型的液体色谱，原理是利用高分子溶液通过一个装填凝胶的柱子，在柱子中按分子大小进行分离。

柱子为玻璃柱或金属柱，内填装有交联度很高的球形凝胶。

其中的凝胶类型有很多，都是根据具体的要求而确定（常用的有聚苯乙烯凝胶）。

然而，无论哪一种填料，他们都有一个共同点，就是球形凝胶本身都有很多按一定分布的大小不同的孔洞（见图1）。

图1 GPC分离原理不仅可用于小分子物质的分离与鉴定，而且可作为用来分析化学性质相同但分子体积不同的高分子同系物。

可以快速、自动测定高聚物的平均分子量及分子量分布。

现阶段，已经成为最为重要的测定聚合物的分子量与分子量分布的方法。

二、测定原理凝胶色谱法的固定相采用凝胶状多孔性填充剂，是根据样品中各种分子流体力学提及的不同进行分离的。

比凝胶孔径大的分子完全不能进入孔内，随流动相沿凝胶颗粒间流出柱外，而娇小的分子则可或多或少地进入孔内。

因此大分子流程短，保留值小；小分子流程长，保留值大，所以凝胶色谱是按分子流体力学体积的大小，从大到小顺序进行分离的。

（见图2）图2 GPC淋出曲线溶质分子的体积越小，其淋出体积越大，这种解释不考虑溶质与载体间的吸附效应以及溶质在流动相和固定相中的分配效应，其淋出体积仅仅由溶质分子的尺寸和载体的孔径尺寸决定，分离完全是由于体积排除效应所致。

凝胶色谱的特点是样品的保留体积不会超出色谱柱中溶剂的总量，因为保留值的范围是可以推测的，这样可以每隔一定时间连续进样而不会造成谱峰的重叠，提高了仪器的使用率。

三、分子量校正曲线（LogM-V曲线）凝胶色谱图计算样品的分子量分布的关键是把凝胶色谱曲线中的淋洗体积V转化成分子量M，这种分子量的对数值与淋洗体积之间的曲线(LogM-V)称之为分子量校正曲线（见图3）。

图3 分子量校正(LogM-V)曲线➢排阻极限排阻极限是指不能进入凝胶颗粒空穴内部的最小分子的分子量。

凝胶色谱法的原理高中生物什么是凝胶色谱法？凝胶色谱法是一种常用于生物分子分离与分析的实验技术。

它基于不同组分在凝胶基质内的迁移速率差异，利用凝胶作为分离介质，通过色谱柱将混合物中的不同成分分离出来。

凝胶色谱法的原理凝胶色谱法的分离原理基于分子在凝胶基质中的迁移速率差异。

凝胶是一种多孔的材料，分子可以通过孔隙进入凝胶内部，并在凝胶中扩散。

不同大小、形状及电荷的分子由于其与凝胶相互作用的力不同，会表现出不同的迁移速率。

通常，凝胶色谱法使用分子量作为分离依据，在实验中，较大分子会在凝胶中扩散的速度相对较慢，而较小分子则扩散得更快。

这样，当混合物在色谱柱中通过凝胶时，不同大小的分子将被逐渐分离出来，形成不同的峰。

凝胶色谱法的应用凝胶色谱法在许多生物分析和研究领域中得到广泛应用。

以下是几个常见的应用示例：•蛋白质分离：凝胶色谱法可用于分离不同大小和电荷的蛋白质，有助于研究蛋白质的结构和功能。

•核酸分析：凝胶色谱法可用于分离DNA或RNA的片段，用于基因测序、突变检测等。

•糖类分析：凝胶色谱法可用于分离和分析不同种类和结构的糖类。

•药物分析：凝胶色谱法可用于药物代谢产物的分离和分析，以及药物纯度的检测。

凝胶色谱法的优缺点优点：•简单易操作，成本较低。

•适用于各种样品类型，包括蛋白质、核酸等。

•可实现高分辨率的分离。

缺点：•分离速度较慢。

•对样品的要求较高，一些复杂样品可能需要额外的预处理。

•无法直接得到纯度较高的单一成分。

结语凝胶色谱法作为一种常用的生物分析技术，广泛应用于科研和实验室中。

通过了解凝胶色谱法的原理和应用，我们可以更好地理解生物分子的特性，并且在生物学研究中起到重要的分离和分析作用。

凝胶色谱法的原理高中生物凝胶色谱法是一种非常重要的分离和纯化大分子生物分子的方法，这里重点介绍凝胶色谱法的原理和基本操作。

一、凝胶色谱法的原理凝胶色谱法基本原理是通过凝胶状填料的孔隙（毛细管结构），分析物在填料矩阵中的分布，根据各分子在填料孔隙中的滞留时间（即停留时间）进行分离。

由于不同类型的生物分子具有不同的分子量和形状，其在凝胶中运动速度不同，因此可以通过这种方法实现生物分离和纯化。

凝胶色谱法中主要有两种类型的填料，即吸附剂和分子筛。

吸附剂可以以不同方式将目标分子分离和纯化，一般使用离子交换剂、亲和剂和蛋白A / G填料。

而分子筛多用于纯化蛋白质，由于不同重量和形状的蛋白质溶液经过分子筛时速度不同，这样就可以实现不同蛋白质的分离。

二、凝胶色谱法的基本操作凝胶色谱法的实现需要如下的操作步骤：1.凝胶的膨胀：首先将凝胶与生物样品混合并定量离心分离，然后用缓冲液使各种细胞组分均匀地分布在凝胶孔内。

2.样品的加载：将样品通过凝胶床，最后将可溶进凝胶的目标分子钦定在凝胶内。

3.洗脱复合物：通过浸泡梁的方法，清洗凝胶上不想要的组分。

4.脱落复合物：使用其它金属离子替换离子交换剂以进行脱脂，或改变分子筛孔径实现纯化。

5.再生凝胶：再生过程包括将凝胶用硫酸和乙醇混合物进行回收，再用缓冲液洗净，最后用纯水冲洗干净。

三、凝胶色谱法的应用凝胶色谱法广泛应用于生物化学实验中，如蛋白质、DNA、RNA、多糖、孢子等的分离纯化。

例如，蛋白质纯化的几乎所有方法都有凝胶色谱法的应用，如膜过滤、离心法和年龄夹层法等。

总之，凝胶色谱法是一种非常有用的生物学分离方法，能够分离和纯化大分子生物细胞中的多种生物分子，应用广泛，能够帮助科学家更好地理解生命科学。

凝胶色谱法凝胶色谱法是一种常用的分离和纯化生物大分子的方法，尤其适用于蛋白质和核酸的分离。

该方法基于样品分子在凝胶介质中的迁移速度差异，实现了不同分子间的分离。

原理凝胶色谱法的原理基于分子在凝胶介质中迁移的速度差异。

凝胶是一种高分子物质，可以分为聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等多种类型。

凝胶的孔隙大小决定了分子在其中的迁移速度，较大的孔隙适合分离较大分子，而较小的孔隙则适合分离较小分子。

样品被加载到凝胶柱或凝胶片上，然后通过某种方法施加电场或重力。

根据分子的大小和电荷等因素，样品分子会在凝胶中以不同的速度迁移。

较小的分子会更快地穿过凝胶，而较大的分子则会相对滞留在凝胶中。

这样，不同大小的分子就会被分离开来。

实验步骤凝胶色谱法的实验步骤如下：1.准备凝胶：选择合适的凝胶介质，根据需求制备凝胶柱或凝胶片。

2.加载样品：将待分离的混合物加载到凝胶柱或凝胶片上。

3.施加电场或重力：根据需要选择适当的方法，施加电场或重力使样品开始迁移。

4.迁移和分离：根据分子的大小和电荷，在凝胶中进行分离。

较小的分子会迁移得更快，而较大的分子会滞留在凝胶中。

5.结果分析：根据需要，可以使用染色或其他特定的方法来可视化样品在凝胶上的分离结果。

应用领域凝胶色谱法广泛应用于生物化学、生物技术和分子生物学等领域，常用于蛋白质和核酸的纯化和分离。

具体应用领域包括但不限于以下几个方面：•蛋白质纯化：凝胶色谱法可以根据蛋白质的大小、电荷和亲水性等特性，实现蛋白质的纯化和分离。

•核酸分离：凝胶色谱法可以根据核酸的长度、序列和二级结构等特性，实现核酸的分离和纯化。

•生化分析：凝胶色谱法可以用于分析样品中的混合物，如酶活性检测、荧光标记分析等。

•质谱前处理：凝胶色谱法可以用于质谱前处理，如去除杂质、富集目标物等。

优点与局限性凝胶色谱法在生物大分子的分离和纯化中有许多优点，但也存在一些局限性。

优点：•高分辨率：凝胶色谱法可以实现较高的分辨率，因为凝胶提供了一种固定的介质，分子在其中以不同速度迁移。

凝胶渗透色谱法测定聚合物的相对分子量及其分布一般人工合成的聚合物均为不同相对分子质量的同系物组成的混合物， 其相对分子质量为统 计平均值， 相对分子质量的多分散性可用分子量分布来表征。

分子量分布是指聚合物样品中各级 分的含量与相对分子质量的关系。

聚合物的许多物理机械性能与分子量分布有密切的关系， 因此 进行聚合物分子量分布上的测定具有重要的意义； 另一方面， 聚合物的分子量分布是由聚合过程 或解聚过程的机理决定的， 因此无论是为了研究聚合或解聚机理及其动力学， 或者是为了更好控 制聚合及成型加工的工艺，都需要测定聚合物的相对分子质量及其分布。

一、 实验目的 1. 掌握凝胶渗透色谱的分离、测量原理； 2. 了解凝胶渗透色谱的仪器构造和凝胶渗透色谱的实验技术。

二、 实验原理 凝胶渗透色谱（Gel Permeation Chromatography， 简称 GPC）也称为体积排除色谱（Size Exclusion Chromatography， 简称 SEC） 是一种液体 （液相） 色谱。

和各种类型的色谱一样， GPC/SEC 的作用也是分离，其分离对象是同一聚合物中不同相对分子质量的高分子组分。

（一） GPC 的分离机理—体积排除理论 1. GPC 的分离部件是以多孔性凝胶作为载体的色谱柱，凝胶的表面与内部含有大量彼此贯 穿的大小不等的孔洞。

GPC 法就是通过这些装有多孔性凝胶的分离柱，利用不同相对分子质量 的高分子在溶液中的流体力学体积大小不同进行分离， 再用检测器对分离物进行检测， 最后用已 知相对分子质量的标准物对分离物进行校正的一种方法。

2. 在聚合物溶液中，高分子链卷曲缠绕成无规线团状，在流动时，其分子链间总是裹挟着 一定量的溶剂分子，即表现出的体积称之为“流体力学体积” 。

对于同一种聚合物而言，是一组 同系物的混合物， 在相同的测试条件下， 相对分子质量大的聚合物， 其溶液中的 “流体力学体积” 也大。

凝胶色谱法分离蛋白的原理1. 引言1.1 凝胶色谱法简介凝胶色谱法是一种广泛应用于生物化学领域的分离技术，其原理是利用不同分子在凝胶材料中移动速度的差异来实现分离。

凝胶色谱法的凝胶材料通常包括聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等，这些凝胶材料具有不同的孔径和分子筛分能力，适用于不同范围大小的分子分离。

在凝胶色谱法中，待分离的混合物首先通过载体溶液进行载样，然后经过凝胶柱或凝胶板进行分离，最终得到不同组分的分离结果。

凝胶色谱法在蛋白质分离中具有较高的分辨率和灵敏度，能够有效地将混合物中的蛋白质分离并提取出纯净的单个蛋白质。

凝胶色谱法具有操作简便、效果稳定等优点，因此在生物化学研究中得到广泛应用。

通过对凝胶色谱法的学习和掌握，能够更好地理解和应用这一分离技术，为生物化学研究提供更多可能性。

1.2 蛋白分离的重要性蛋白分离在生物学领域中起着至关重要的作用。

蛋白是生物体内最基本的功能分子，在细胞代谢、信号传递、免疫应答等生物过程中扮演着关键角色。

生物体内的蛋白种类繁多、结构复杂，需要进行有效的分离和纯化方能对其进行研究和应用。

蛋白的分离不仅能帮助科学家们了解蛋白本身的结构和功能，还能为药物研发、生物工程和疾病诊断提供重要参考。

通过分离蛋白，科学家们能够研究蛋白的功能、相互作用、结构以及参与的生物过程，从而揭示生物体内复杂的调控机制。

蛋白分离也为药物研发提供了重要工具，例如通过分离纯化特定蛋白以获得药物靶点，或者分析药物与蛋白的相互作用方式。

蛋白分离还在生物技术领域发挥着重要作用，如在基因工程中用于生产重组蛋白，或者在诊断学中用于检测特定蛋白的表达水平。

蛋白分离不仅对基础科学研究有着重要意义，也对应用研究和产业发展具有深远影响。

2. 正文2.1 凝胶色谱法的原理凝胶色谱法是一种重要的蛋白分离技术，其原理基于蛋白分子在凝胶材料中的迁移速度差异而实现分离。

凝胶色谱法通常使用聚丙烯酰胺凝胶或聚丙烯酰胺-琼脂糖凝胶作为固定相，将样品加载在凝胶柱上，然后通过给定条件下的电场、离心力或扩散来驱动蛋白分子在凝胶中移动。

0514分子排阻色谱法中国药典2015年版件均应使用惰性材料，如聚醚醚酮（P E E K)等。

也可使用一般的高效液相色谱仪，只要其部件能与洗脱液和供试品溶液相适应。

仪器应定期检定并符合有关规定。

(11色谱柱离子交换色谱的色谱柱填充剂有两种，分别是有机聚合物载体填充剂和无机载体填充剂。

有机聚合物载体填充剂最为常用，填充剂的载体一般为苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、乙基乙烯基苯-二乙烯基苯共聚物、聚甲基丙烯酸酯或聚乙烯聚合物等有机聚合物。

这类载体的表面通过化学反应键合了大量阴离子交换功能基（如烷基季铵、烷醇季铵等）或阳离子交换功能基（如磺酸、羧酸、羧酸-膦酸和竣酸-膦酸冠醚等），可分别用于阴离子或阳离子的交换分离。

有机聚合物载体填充剂在较宽的酸碱范围(p H0〜14)内具有较髙的稳定性，且有一定的有机溶剂耐受性。

无机载体填充剂一般以硅胶为载体。

在硅胶表面化学键合季铵基等阴离子交换功能基或磺酸基、羧酸基等阳离子交换功能基，可分别用于阴离子或阳离子的交换分离。

硅胶载体填充剂机械稳定性好、在有机溶剂中不会溶胀或收缩。

硅胶载体填充剂在p H2〜8的洗脱液中稳定，一般适用于阳离子样品的分离。

(2)洗脱液离子色谱对复杂样品的分离主要依赖于色谱柱中的填充剂，而洗脱液相对较为简单。

分离阴离子常采用稀碱溶液、碳酸盐缓冲液等作为洗脱液；分离阳离子常采用稀甲烷磺酸溶液等作为洗脱液。

通过调节洗脱液p H值或离子强度可提高或降低洗脱液的洗脱能力；在洗脱液内加入适当比例的有机改性剂，如甲醇、乙腈等可改善色谱峰峰形。

制备洗脱液的水应经过纯化处理，电阻率大于18M n*c m。

使用的洗脱液需经脱气处理，常采用氦气等惰性气体在线脱气的方法，也可采用超声、减压过滤或冷冻的方式进行离线脱气。

(3)检测器电导检测器是离子色谱常用的检测器，其他检测器有安培检测器、紫外检测器、蒸发光散射检测器等。

电导检测器主要用于测定无机阴离子、无机阳离子和部分极性有机物，如竣酸等。

凝胶色谱法的原理高中生物凝胶色谱法是一种常用的分离和纯化生物大分子的方法，常被应用于蛋白质和核酸的分离和纯化。

它的原理是利用凝胶材料的孔隙结构，根据不同分子的大小、形状、电荷等性质在凝胶中的迁移速率的差异，将混合物中的分子分离开来。

1. 凝胶材料的制备：凝胶材料通常由聚丙烯酰胺（polyacrylamide）或琼脂糖（agarose）制备而成。

聚丙烯酰胺通常用于较小的分子，如蛋白质的分离，而琼脂糖通常用于较大的分子，如核酸的分离。

凝胶材料的制备通常需要使用交联剂将聚合物交联成凝胶状态，从而形成孔隙结构。

2.样品的加载：待分离的混合物通常是在溶液中的，可以通过直接注射或溶液浸渍的形式加载到凝胶柱或凝胶片上。

样品的加载可以使用特定的缓冲液来增加样品的稳定性。

3.柱/片的运行：凝胶柱或凝胶片通常是放置在色谱仪中，通过重力或外部压力的作用，待分离的分子会在凝胶孔隙中进行迁移。

在迁移的过程中，较小的分子会因为孔隙结构的限制迁移更慢，而较大的分子则会迁移得相对较快。

4.分析/检测：分离后的分子可以通过各种方法进行检测和分析，常用的方法包括染色技术、融点测定、紫外线吸收、放射性标记、荧光等。

1.分离效果较好：凝胶色谱法适用于大分子的分离和纯化，其孔隙结构可以提供较大的分离容量和分辨力，使得分子能够在孔隙中得到较好的分离。

同时，凝胶柱或凝胶片也具有选择性，可以根据分子的大小、电荷等属性进行分离。

2.操作简单：凝胶色谱法的实验操作相对简单，无需复杂的仪器和技术设备。

只需准备好凝胶材料和相应的缓冲液，加载样品后即可进行分离。

3.对样品损伤小：相对于其他分离技术，凝胶色谱法对样品的损伤较小。

由于分子是在凝胶材料中进行迁移，不会受到高温、高压等极端条件的影响，使得生物大分子能够得到较好的保护。