核酸的重要理化性质共17页
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第四节核酸的理化性质一、酸性化合物两性\但酸性强。
电泳行为--泳向正极(pH7-8)。
沉淀行为--加盐(中和电荷)M+与磷酸"-"中和;乙醇。
二、高分子性质粘度DNA>RNA超离心沉降凝胶过滤三、UV吸收最大吸收峰在260nm附近四、变性、复性与杂交核酸在理、化因素作用下,双螺旋结构破坏称核酸变性。
根据变性因素区分为碱变性、热变性等。
如DNA的碱变性、DNA的热变性,其中以DNA的热变性更具典型意义。
DNA变性后,粘度改变,钢性线性分子变得无序,粘度下降,UV吸收增强,其规律如下:高色效应--核酸变性后、氢键破坏,双螺旋结构破坏,碱基暴露,紫外吸收(260nm)增强,谓高色效应。
解链温度\融解温度(Tm)--UV吸收增值达到最大吸收增值50%时的温度,称Tm。
Tm值与DNA G+C含量有关,G+C含量愈大,Tm愈高,反之则反;与核酸分子长度有关,分子愈长,Tm愈高。
变性温度范围与DNA样品均一性有关,分子种类愈纯(单一),长度愈一致,其变性范围愈窄,反之则变性温度范围愈宽。
DNA变性的复性—DNA发生热变性后,经缓慢降温,如放置室温逐渐冷却,解开的互补链之间对应的碱基对再形成氢键,恢复完整的双螺旋结构,称DNA热变性的复性。
核酸复性时UV下降,此称低色效应。
DNA热变性后缓慢冷却处理过程称退火。
DNA加热变性后,若经骤然降温,互补链碱基之间来不及配对互补,形成氢键联系,两链维持分离状态。
核酸分子杂交—当不同来源的核酸变性后一起复性时,只要这些核酸分子中含有相同序列的片段,即可形成碱基配对,出现复性现象,形成杂种核酸分子,或称杂化双链,称核酸分子杂交。