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基因工程复习课件

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基因工程一轮复习公开课PPT课件

基因工程一轮复习公开课PPT课件
百分之一。
要对天然质粒进行人工改造
作为载体必须具备哪些条件？
1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；
2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因 连接；
3、具有某些标记基因，便于进行筛选。 （如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色 反应的基因等 ）
4、对受体细胞无害
原核细胞的基因结构(补充内容）
非编码区 编码区上游
切点：磷酸二酯键
举例：EcoRI限制酶能识别 GAATTC序列，并 在G和A之间切开 （黏性末端）
SmaI限制酶能识别 GGGCCC序列，并 在G和C之间切开 （平末端）
限制酶所识别的序列有什么特点
限制酶所识别的序列，无论是6个碱 基还是4个碱基，都可以找到一条中 心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的 碱基是反向对称重复排列的。
➢退火：冷却至55～60℃ 变性 部分引物与模板的单链 DNA的特定互补部位相配 对和结合
PCR技术
原理： DNA复制 前提：
一段已知目的基因的核苷酸序列 原料
模板DNA；DNA引物；四种脱氧 核苷酸；热稳定DNA聚合酶 （Taq酶）；离子
方式：以_指__数__方式扩增，
PCR扩增仪
即_2_n__（n为扩增循环的次数）
过程 变性、退火、延伸三步曲
➢变性：加热至90～95℃ 双链D的基因
PCR——聚合酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片
段的核酸合成技术。通过此技术，可 获取大量的目的基因。
外显子 内含子
真核 细胞
的
编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列
基因
结构 非编码区 ：有调控作用,上游有启动子，下
游有终止子
非编码序列： 包括非编码区和内含子

2024届高三二轮复习生物：基因工程-限制酶,基因表达载体的构建、引物课件

2024届高三二轮复习生物：基因工程-限制酶,基因表达载体的构建、引物课件

习题
引 ②作用： 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸
③特点：
a.通常20-30个核苷酸序列 b.两种引物之间不发生碱基互补配对
c.同一种引物之间不发生碱基互补配对
d.与目的基因两端的序列互补
④为什么要用引物？ 耐高温DNA聚合酶不能从头开始DNA，只能从3’端延伸DNA链。
基因工程基本工具
【DNA连接酶] (1)作用:将双链DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键。 (2)常见种类: E·coli DNA连接酶( 只连黏性末端) T4 DNA连接酶( 两种末端都能连 )。
基因工程基本工具
【最常用的载体运载体——质粒]p72 是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外， 并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。
注意：区分启动子和终止子与起始密码子和终止密码子 启动子和终止子位于DNA上，是基因表达载体必需的部分， 而起始密码子和终止密码子位于mRNA上，决定翻译的开始和结束。
限制酶
同一种限制酶切（单酶切）
单酶切缺点:
A. 质粒重新环化 B. 目的基因自身环化 C. 质粒与目的基因反向连接(后果)
DNA连接 酶
通常选择与切割目的基因相同的限制酶切割质粒，如图中PstⅠ； 为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接（或为了保证目的基因和质粒发生定 向连接）可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种不同的限制酶分别切割目的基因和质粒。
习题
（1）据图1可得到含有多个限制酶切位点的S蛋白基因序列，若要在短时间内获得大量 的S蛋白基因，可采取的方法是__________，该方法的实质是进行__________。该过 程需要人工合成部分核苷酸片段，合成的该片段具有的特点是_______________（答 两点）；若合成的该部分核苷酸片段过短，可能带来的影响是 ____________________。 （2）获得足够量的S蛋白基因后须构建基因表达载体， 其目的是____________________。如图2是相关的质粒，要保证S蛋白基因的正确表 达，需选用___________和HindⅢ酶进行切割，且不破坏标记基因。

2025人教版高考生物一轮复习课件 第十单元 第61课时 基因工程的基本工具和基本操作程序

2025人教版高考生物一轮复习课件 第十单元 第61课时 基因工程的基本工具和基本操作程序

2025人教版高考生物一轮复习课件第61课时1.概述基因工程是在微生物学、生物化学和分子生物学等学科基础上发展起来的。

2.阐明重组DNA技术的三种基本工具。

3.阐明基因工程的基本操作程序。

课标要求考情分析1.基因工程的基本工具2023·新课标·T6　2021·全国乙·T38　2021·湖北·T72.基因工程的基本操作程序2023·全国乙·T38　2023·全国甲·T38　2023·湖北·T4　2023·广东·T20　2021·广东·T22内容索引考点一 基因工程的基本工具考点二 基因工程的基本操作程序课时精练1.基因工程的概念DNA分子转基因遗传特性生物类型基因重组2.基因工程的诞生和发展(1)肺炎链球菌转化实验不仅证明了DNA 是遗传物质，还证明了DNA 可在同种生物不同个体之间。

(2)DNA 双螺旋结构的提出和的证明。

(3)中心法则的确立。

(4)的破译。

(5)基因转移载体的发现。

的发现为DNA 的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。

转移半保留复制遗传密码限制酶、DNA 连接酶和逆转录酶(6) 体外重组的实现。

(7)重组DNA 表达实验的成功。

(8)DNA 测序和合成技术的发明。

(9) 技术的发明。

(10) 技术可以实现对特定基因的定点插入、敲除或替换。

DNA PCR 基因组编辑3.重组DNA技术的基本工具(1)限制性内切核酸酶(简称“限制酶”)原核生物数千特定核苷酸序列磷酸二酯键磷酸二酯键提醒　①限制酶的识别序列一般由6个核苷酸组成，少数由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。

②限制酶作用的化学键只能是磷酸二酯键。

③在切割含目的基因的DNA分子时，需用限制酶切割两次此DNA分子，产生4个末端。

只有这样才能使目的基因的两端都有可连接的黏性末端或平末端。

【中小学课件】高中生物总复习 专题一基因工程课件

【中小学课件】高中生物总复习 专题一基因工程课件

溶解DNA 丝状物
―→取两支试管，各加入物质的量浓度为2
mol/L的NaCl溶液，将丝状物放入其中一支试管中，并用玻 璃棒搅拌。
DNA的鉴定 ―→向两支试管中分别加入二苯胺试剂， 沸水中加热一段时间，待试管冷却后，看溶解有DNA的溶 液是否变蓝。
3．方法突破 (1)做该实验时，不能用猪血代替鸡血，因为哺乳动物成 熟的红细胞中没有细胞核，不能提取DNA。 (2)制备鸡血细胞液时，要注意向鸡血中加柠檬酸钠，防 止血液凝固。
人的胰岛素基因可以在大肠杆菌体内得以表达，但是由 于大肠杆菌是原核生物，没有内质网、高尔基体等细胞器的 加工，合成的胰岛素原不具有胰岛素的功能，即没有生物活 性；作为标记基因，有利于重组基因在细胞内表达的鉴定筛
选，但对于目的基因的表达没有促进等调控作用。
答案：D
二、基因工程的基本操作程序 1．构建基因表达载体(核心步骤)
DNA连接酶
DNA聚合 酶
解旋酶
作用特 点
将双链DNA片 段“缝合”起 来，恢复被限 制切开了的两 个核苷酸之间 的磷酸 二酯键
只能将单 个脱氧核 苷酸添加 到脱氧核 苷酸链上
将DNA 两条链 之间的 氢键打 开
作用结 果
形成单 形成重组DNA 形成新的 链DNA DNA分子 分子 分子
(2)限制酶与DNA连接酶的关系
(1)主要来源：原核生物。
(2)特点：能够识别DNA特定的 磷酸二酯键 开两个核苷酸之间的 核苷酸序列 。 ， 切
(3)DNA末端：限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种 形式： 黏性末端 和平末端。
2．DNA连接酶——“分子缝合针” (1)作用：将双链 DNA片段 制酶切开的两个核苷酸之间的 (2)种类 ①E·coli DNA连接酶：只能缝合DNA的黏性末端。 “缝合”起来，恢复被限 。 磷酸二酯键

基因工程复习课件

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转基因生物的 mRNA
转基因生物的 蛋白质
DNA与DNA之间 DNA与RNA之间杂交 抗原与抗体杂交 的杂交
2、个体生物学水平鉴定：如一个抗虫或抗病的目的基因导入植物细胞 后，是否赋予了植物抗虫或抗病特性，需要做 抗虫或抗病的接种 ___________ 实验。
例2、 上图表示一项重要的生物技术，其中a、b、c、d均为物 质，下列描述中正确的是（ AD ） A．切割d的物质与物质b 可以是不同种类 B．b识别特定的核苷酸序列，并将A与T之间的氢键切开 C．c连接双链间的A和T，使黏性末端处碱基互补配对 D．该技术是在细胞外的环境中进行操作的
1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 黏性末端
黏性末端
磷酸二酯 １、限制酶作用于____________ 键 2、不同的限制酶切割ＤＮＡ时，可能切出相同的黏性末端吗？可能 例题3
2、 DNA连接酶——“分子缝合针”
磷酸二酯 键 作用部位：_________
返回
例1、下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，依次表示何种 酶的作用。 限制酶 DNA连接酶 解旋酶 DNA聚合酶 A____________,B______________,C__________,D__________
生长激素基因 → mRNA → 生长激素
转录 翻译
(5)将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生 长的，说明已导入了 普通质粒或重组质粒 ______________ ，反之则没有导入。
概念图总结
操作的四个步骤
操作的三种工具
基因工程
所应用的四个领域
成功的两个理论基础
基因拼接的理论基础 外源基因在受体内表达的理论基础
已知序列

2023届高三生物一轮复习课件：基因工程

2023届高三生物一轮复习课件：基因工程

或其他数量的核苷酸组成。
6.切割结果：切口有两种：黏性末端和平末端 当限制酶在它识别序列的_中__轴__线__两__侧__将DNA分子的两条链分别切 开时，产生的是黏__性__末__端____； 当限制酶在它识别序列的_中__轴__线__处__切开时，产生的是_平__末__端_；
EcoRⅠ SmaⅠ
不会对人畜有害的原理？①Bt抗虫蛋白只在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人畜的胃液 呈酸性 ②人畜的肠道细胞没有特异性受体。 一、目的基因的筛选与获取 1.何为目的基因？P76用于改变受体细胞性状和获得预期表达产物的基因，主要指编码蛋白质的基因 库是由mRNA逆转录形成的，只包含真核细胞基因结构中外显子的序列，可在不同物种之间交流；
物细胞 哺乳 不的到溶丝解状。沉淀物、
方案： ①4℃冰箱静置后取 上清液 ②离心后取上清液
2mol/L的 NaCl溶液， 2只试管
二苯胺 沸水浴加热 蓝色
加①体低积温相放等置、几预分冷钟酒的精作（用体？积分数95%）静置，得白色丝状物 提②取搅方拌案时：应轻缓、并沿一个方向的原因？
①抑用制玻核璃酸棒水沿解一酶个的方活向性搅，拌进，而卷抑起制丝D状NA物降，解并；用抑滤制纸DN吸A分取子上面运 动的，水使DNA易形成沉淀析出；低温有利于增加DNA分子柔韧性，
6
●1.基因表达载体的构建目的？ ●2.基因表达载体组成？ ●3.基因表达载体各组成部分的作用？ ●4.转化的概念？ ●5.将目的基因导入受体细胞的方法及适用范围？
7
1.在培养有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是什么？ 2.原理？ 3.采用农杆菌转化法导入目的基因时，为什么目的基因可以整合到染色体的DNA 上? 4.目的基因插入染色体DNA上的目的是什么？ 5.两次拼接、两次导入 6.转基因的植物细胞如何获得最终的新品种？

基因工程-课件ppt

基因工程-课件ppt

(7)用于载体的质粒 DNA 分子上至少含一个限制酶识别位点(√ )
(8)载体的作用是携带目的基因导入受体细胞中，使之稳定存在
并表达
(√)
在日常生 活中， 随处都 可以看 到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
2．载体需具备的条件及其作用(连线)
对点落实
返回
1．(2016·全国卷Ⅲ)图(a)中的三个 DNA 片段上依次表示出了
EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ和 Sau3AⅠ三种限制性内切酶的识别序列
与 切 割 位 点 ， 图 (b) 为 某 种 表 达 载 体 的 示 意 图 ( 载 体 上 的
EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的)。
↓
↓
↓
——GAATTC—— ——GGATCC—— ——GATC——
返回
(2)写出产生的末端的种类：①产生的是黏性末端；②产生的 是 平末端 。 (3)EcoRⅠ限制酶和 SmaⅠ限制酶识别的碱基序列 不同，切割 位点不同 (填“相同”或“不同”)，说明限制酶具有专一性 。
在日常生 活中， 随处都 可以看 到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
图(b)
图(c)
(3)DNA 连接酶是将两个 DNA 片段连接起来的酶，常见的
有__E_·_c_o_l_i__D_NA_连__接__酶_和____T_4D_N_A_连___接__酶___，其中既能连接黏 性末端又能连接平末端的是__T_4D_N_A__连__接__酶___。
解析
在日常生 活中， 随处都 可以看 到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么

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酶的识别序列 质粒 ④有标记基因
XhoⅠ
HindⅢ
NdeⅠ
PstⅠ
启动子
抗生素 抗性基因
终止子
XbaⅠ BamHⅠ
EcoRⅠ
复制原点
XbaⅠ KpnⅠ 注：图中限制酶的识别序列及
切割形成的黏性末端均不相等
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
限制酶——怎样选择使用
①使目的基因与质粒形成相同的粘性末端，便于二者重组。尽 量避免目的基因、质粒的自身环化；
BamHⅠ
BamHⅠ
目的基因
质粒
HindⅢ
HindⅢ
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
限制酶——怎样选择使用
①使目的基因与质粒形成相同的粘性末端，便于二者 重组。尽量避免目的基因、质粒的自身环化。 用形成不同粘性末端的两种限制酶分别切割质粒、分 离目的基因，便于二者定向连接。 ②不能破坏目的基因和质粒中的所有标记基因。 ③便于筛选含目的基因的受体细胞。
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
基因工程
抗虫棉 普通棉
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值

基因工程复习课件

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(2)若0对,2图中质粒进行改造，插入的Sma Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是________________
。
(4)与只使用Eco RⅠ相比较，使用Bam HⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点
• (4)目的基因的检测与鉴定
类型
分 子 检 测
步骤
检测内容
方法
结果显示
导入 检测
目的基因是否插入受体细胞染色体 的DNA上
是否成功显示
DNA分子杂交技术(DNA和 DNA之间)
出杂交带
表达 检测
目的基因是否转录出mRNA 目的基因是否翻译出蛋白质
核酸分子杂交技术( DNA mRNA之间)
同上
蛋白质分子杂交(抗原和抗体
• (3)通常采用____________D__N_A_分__子技杂术交检(测核外酸源探基针因) 是否插入了小鼠的基因组。 • (4)在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的________细胞中特异表达。 • (5)为使外源基因在后代长期保持，可将转基因小鼠体细胞的________转入________细
• 二、基因工程的应用成果及蛋白质工程 • 1．基因工程的应用成果 • (1)乳腺生物反应器与微生物生产的比较
类型 项目
乳腺生物反应器
微生物生产
基因结构
动物基因结构与人类基因结构相同
与人类基因结构不同
基因表达
与天然蛋白质活性没有区别
由于缺少内质网、高尔基体等细胞器， 产物可能不具有生物活性
产物提取
从乳汁中较易分离提取
生产设备
畜牧业生产，加工提取设备

基因工程一轮复习课件

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基因工程一轮复习 优秀课件
目录
• 基因工程概述 • 基因工程的基本技术 • 基因工程实验操作流程 • 基因工程伦理与法规 • 基因工程前沿进展与展望 • 复习题与思考题
01
基因工程概述
基因工程的定义
01
基因工程是指通过人工操作，将 外源基因导入到受体细胞中，实 现基因重组和表达的技术。
02
基因工程的核心技术包括基因克 隆、载体构建、基因表达和基因 编辑等。
基因编辑技术包括ZFNs、TALENs和 CRISPR-Cas9等手段，具有高效、精 准和安全等优点。
03
基因工程实验操作流 程
实验准备
实验材料
准备所需的实验材料，如DNA 片段、载体、酶等。
实验设备
检查所需的实验设备，如PCR 仪、电泳仪、离心机等，确保 其正常运行。
实验试剂
配制所需的实验试剂，如缓冲 液、洗涤液等，并确保其质量 和浓度符合要求。
基因工程的发展历程
1970年代
基因工程的萌芽阶段， 科学家开始探索基因重
组技术。
1980年代
基因工程的初步发展阶 段，实现了外源基因在
大肠杆菌中的表达。
1990年代
基因工程的快速发展阶 段，实现了哺乳动物细 胞和植物细胞的基因转
移和表达。
21世纪
基因工程的广泛应用阶 段，涉及医药、农业、
工业和环保等领域。
实验设计
根据实验目的和要求，设计合 理的实验方案和操作步骤。
基因克隆实验
基因片段的获取
通过PCR、酶切等方法获取目的基因片段。
克隆筛选
通过菌落PCR、酶切等方法筛选阳性克隆。
载体构建
将目的基因片段连接到载体上，形成重组 DNA分子。

高三一轮复习：基因工程正式ppt课件

高三一轮复习：基因工程正式ppt课件

达到治疗疾病的目的。病人细胞中既有缺陷基因，也有
正常基因。
高考总复习.生物
二、 植物基因工程与动物基因工程的成果
外源基因类型及举例
成果举例
抗虫转基 因植物
抗虫基因：Bt毒蛋白基 因、蛋白酶抑制剂基因、 淀粉酶抑制剂基因
抗虫水稻、抗虫棉、 抗虫玉米
抗病转基 因植物
抗病毒基因：病毒外壳 蛋白基因、病毒的复制 酶基因抗真菌基因：几 丁质酶基因
3．PCR技术扩增目的基因
高考总复习.生物
(3)PCR技术扩增目的基因 ①原理：_D_N__A_复__制___。 ②过程 第一步：变性：_D__N_A__解__链__；第二步：复性：引物结合到 互补DNA链；第三步：延伸：在热稳定DNA聚合酶作用下， 从引物起始合成互补链。 2.基因表达运载体的构建 (1)目的：使目的基因在受体细胞中_稳__定__存__在___，并且可以 _遗_传__至__下_一__代_，使目的基因能够__表__达__和_发__挥_。作用 (2) 组 成 ： 目__的__基__因____ ＋ __启__动__子____ ＋ ___终__止__子___ ＋ __标__记__基__因__
三、将目的基因导入受体细胞
生物 种类
植物细胞
动物细胞
常用 农杆菌转化 显微注射技
方法 法
术
受体 细胞
体细胞
受精卵
高考总复习.生物
微生物细胞
感受态细胞 法
原核细胞
转化 过程
将目的基因 插入Ti质粒 的TDNA上→ 农杆菌→导 入植物细胞 →整合到受 体细胞的
将含有目的 基因的表达 载体提纯→ 取卵(受精卵 )→显微注射 →受精卵发 育→获得具 有新性状的
用是（ ）C
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• ②人工合成目的基因
• ③利用PCR技术扩增目的基因 • a．PCR：是一项在生物体外复制特定DNA 片段的核酸合成技术。PCR扩增是获取目 的基因的一种非常有用的方法，也是进行分 子鉴定和检测的一种很灵敏的方法。 • b．目的：通过指数式扩增获取大量的目的 基因。 • (2)基因表达载体的构建学.科.网 zxxk. • ①目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传 给下一代，并使目的基因能够表达和发挥作用。
☆ 选修3
现代生物科技专题 ☆
专题1 基因工程
• •
一、基因工程的工具及其操作程序 1．基因工程的基本工具 限制酶 作用 作用 部位 切割目的基 因和载体 DNA连接酶 载体
连接DNA片 携带目的 段，形成重 基因进入 组DNA 受体细胞
核苷酸的脱氧核糖与磷酸间 形成的磷酸二酯键
限制酶 作用 特点 (条件)
DNA连接酶
载体
常用 类型
(1)能在宿主细 (1)E· coli (1)识别特定 DNA连接酶 胞内稳定存在 的核苷酸序 只连接黏性 并大量复制 (2)有多个限制 列 末端 酶切割位点 (2)在特定位 (2)T4DNA连 (3)具有特殊的 接酶连接黏 点上切割 标记基因 性末端和平 末端 E· coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 学 .科 .网 质粒、噬菌体、 EcoRⅠ限制酶 zxxk. 动植物病毒 SmaⅠ限制酶
限制酶 识别序列及 切割位点
BamH Ⅰ G↓GATC C C CTAG↑G
Hind Ⅲ A↓AGCT T T TCGA↑A
EcoR Ⅰ G↓AATT C C TTAA↑G
Sma Ⅰ CCC↓ GGG GGG↑CCC
(1)一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有 0,2 个游离的磷酸基团。 ________ (2)若对图中质粒进行改造，插入的Sma Ⅰ酶切位点越多，质 粒的热稳定性越________ 高 。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ 切割，原因是________________ Sma Ⅰ会破坏质粒的抗性基因、外源 。 DNA中的目的基因 (4)与只使用Eco RⅠ相比较，使用Bam HⅠ和Hind Ⅲ两种限 制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止________。
【例1】 (2010· 江苏高考· T27)下表中列出了几种限制酶 识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶 的酶切位点。请回答下列问题：
限制酶 识别序列及 切割位Hind Ⅲ A↓AGCT T T TCGA↑A EcoR Ⅰ G↓AATT C C TTAA↑G Sma Ⅰ CCC↓ GGG GGG↑CCC
1. 获取目的基因和切割载体时使用同一种限 制酶，目的是产生相同的黏性末端。 2. 获取一个目的基因需限制酶切割两次，共 产生4个黏性末端或平末端。 3. 限制酶切割位点的选择必须保证标记基因 的完整性，以便于检测和筛选。学.科.网 zxxk.
• 2.基因工程的基本操作程序
目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目 的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定就可以随时从中提取 所需要的目的基因，引入受体细胞使之表达。
方法
①农杆菌转化法：目的基因插入Ti质 粒的T－DNA→转入农杆菌→导入植 植物细 物细胞→稳定维持和表达 胞 ②基因枪法 ③花粉管通道法
受体细 胞种类
方法
显微注射法：目的基因的表达载体提 动物细 纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵 胞 发育→新性状动物 2＋处理受体细胞→感受态细胞→表 Ca 微生物 达载体与感受态细胞混合→感受态细 细胞 胞吸收DNA分子
• 【答案】 C
• 2．(2009年南通调研)下列关于基因 表达载体构建的相关叙述，不正确的 是 ( )
• A．需要限制酶和DNA连接酶 • B．必须在细胞内进行 • C．抗生素抗性基因可作为标记基因 • D．启动子位于目的基因的首端
• 【答案】
B
• (3)将目的基因导入受体细胞 • ①目的：目的基因进入受体细胞内并在受体 细胞内维持稳定和表达的过程。 • ②受体细胞种类不同，导入方法不同。 受体细 胞种类
1. 限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物不存在 该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 2. DNA连接酶起作用时不需要模板。 2. 载体 (1)作用 ①将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)具备的条件 ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。 ②有多个限制酶切割位点。 ③具有特殊的标记基因，以便进行筛选。
• (2)基因表达载体的构建方法
(1)一般来说，天然载体往往 不能满足人类的所有要求，因此人们 根据不同的目的和需要，需要对某些 天然的载体进行人工改造。 • (2)插入的目的基因的表达需要调控 序列，因而用作载体的质粒的插入部 位之前需有启动子，之后需有终止子。 •
• 1．(2009年潍坊模拟)质粒作为“分 子运输车”的条件是 ( ) • ①能够自我复制 ②双链环状DNA 分子 ③有多个限制酶切点 ④有标 记基因 ⑤真核细胞中没有 • A．①②③④⑤ B．①②③④ • C．①③④ D．②③⑤
质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化
限制酶 识别序列及 切割位点
BamH Ⅰ G↓GATC C C CTAG↑G
Hind Ⅲ A↓AGCT T T TCGA↑A
EcoR Ⅰ G↓AATT C C TTAA↑G
Sma Ⅰ CCC↓ GGG GGG↑CCC
(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片 段混合，并加入________________ 酶。 DNA连接 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 鉴别和筛选含有目的基因的细胞 _导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然 蔗糖为唯一含碳营养物质 后在________________________ 的培养基因培养， 以完成目的基因表达的初步检测。