冷沉淀的临床应用和注意事项-课件PPT(精)

临床应用冷沉淀的注意事项及研究20世纪60年代冷沉淀被pool博士发现，1964年首先应用冻融沉淀法从血浆中提取出来白色沉淀物。

因富含FⅧ、Fg、Fn等凝血因子，而用于HA、Fg缺乏、凝血因子ⅩⅢ缺乏和vWD等出血性疾病治疗，是现代成分输血的一部分。

因其纯度不高，在生物体内半衰期短，在发达国家，除非无可先择或紧急情况，并不考虑应用冷沉淀治疗HA、vWD和FⅩⅢ缺乏等疾病。

近年来，随着临床输血技术快速发展，该项技术突破传统，得到更广泛的应用。

除用于手术后出血、严重外伤及DIC的治疗，还有报道应用于深度烧伤、手术创伤、恶性肿瘤激发的口腔溃疡等病的替代治疗。

现将冷沉淀组成和作用机制，制备方法，规格与储存，在临床中的应用，输注剂量及注意事项等研究进展综述如下，以便冷沉淀制品能更好地服务与临床。

1冷沉淀的组成和作用机制抗血友病球蛋白（FⅧ）是由FⅧ促凝活性、FⅧ促凝抗原、FⅧ有关抗原和FⅧ有关的瑞斯托霉素辅因子（vWF：Rco）等组成的大分子复合物。

可加速FⅩ活化，促进血小板聚集、血小板FⅢ的释放和形成内源性凝血活酶，促进内源性凝血系统激活加快。

生物体内半衰期在8～12h，变化较大。

纤维蛋白原（Fg）由肝脏合成的，在凝血过程中，由凝血酶切除血纤蛋白原中的血纤肽A和B而生成的单体蛋白质。

其含量增多可使内源性和外源性凝血途径都加快。

还可使血小板聚集功能增强，起到加快止血、改善微循环、防止出血的作用。

纤维结合蛋白（Fn）又称纤维连接蛋白，1974年国外开始研究发现的，广泛存在于动物组织和组织液中，分子量约450KD，由两条相似的A链和B链组成的二聚体高分子糖蛋白。

有促进细胞粘着、上皮细胞移行、纤维蛋白交联，抗感染、抑制细菌促进肉芽组织增生、提高白细胞活性、增强单核-巨噬细胞免疫调控功能，为上皮修复营造环境条件等多种生物活性。

纤维蛋白稳定因子（FSF）即Ⅲ因子存在于血小板及血浆中，经凝血酶切除部分肽段后被激活Ⅲa。

冷沉淀凝血因子的临床应用输血治疗是不可替代的临床治疗方法之一，成分输血作为一种输血手段，被广泛应用于临床，可减少不良反应、提高治疗效果。

冷沉淀凝血因子作为血液成分的一种，在临床输血治疗中也起到重要作用。

一、什么是冷沉淀凝血因子？冷沉淀凝血因子，也称冷沉淀，是采用特定的方法将保存期内的新鲜冰冻血浆置于2~6℃冰箱中过夜融化或在1~6℃水浴装置中融化，分离出大部分血浆，并将剩余的冷不溶物质在1小时内速冻成固态的成分血。

冷沉淀凝血因子富含五种成分：Ⅷ因子、XⅢ因子、vWF、纤维蛋白原和纤维结合蛋白。

来自200ml全血分离的冷沉淀Ⅷ因子≥40U、纤维蛋白原≥75mg；来自400ml全血分离的冷沉淀Ⅷ因子≥80U、纤维蛋白原≥150mg。

二、主要功能补充Ⅷ因子、XⅢ因子、vWF、纤维蛋白原和纤维结合蛋白。

(1)Ⅷ因子又称抗血友病因子，是一种大分子复合物，可加速XⅢ因子活化，促进血小板聚集，有助于血小板第Ⅲ因子的释放和形成内源性凝血活酶，其含量增加可促进内源凝血系统激活加快。

Ⅷ因子缺乏症又称血友病A，是一种遗传性疾病，患者常见自发性出血或外伤出血后止血困难等症状。

(2)XⅢ因子是纤维蛋白稳定因子，催化可溶性纤维蛋白单体分子间的交联反应，促使纤维蛋白凝块更加紧密、坚固，增加纤溶抵抗。

因此，XⅢ因子对形成稳固的纤维蛋白凝块有重要作用。

XⅢ因子半衰期长，且因子活性5%以下也可以维持机体正常凝血功能。

XⅢ因子缺乏时只能生成不稳定的可溶性纤维蛋白单体聚合物(SFM)，患者常见延迟性出血，创面愈合不佳等症状。

(3)血管性血友病因子(vWF)是一种重要的血浆成分，作为载体具有稳定Ⅷ因子的作用，参与构成Ⅷ因子复合物，且能与血小板相关位点结合，介导血小板的黏附和聚集过程。

先天性或获得性vWF缺乏或功能异常时，可出现凝血障碍。

(4)纤维蛋白原是凝血途径的效应分子，其含量增多可使内源性和外源性凝血途径加快，同时纤维蛋白原作为血小板间的桥梁，可使血小板聚集功能增强。

临床应用冷沉淀的注意事项及研究首先，临床应用冷沉淀需要注意以下几个方面：1.实验设备和试剂：使用高质量的设备和试剂对于准确的结果至关重要。

确保离心机、试管和冷冻设备的正常工作，以及使用纯净的缓冲液和溶剂。

2.样品处理：为了获得高质量的冷沉淀，样品的处理尤为重要。

必须谨慎地选择和准备样品，避免有可能干扰沉淀的杂质。

如果需要使用特定的酶或化学试剂对样品进行预处理，需要确保这些试剂对目标分子没有影响。

3.低温操作：冷沉淀的主要原理是在低温下，使溶液中的目标分子形成沉淀。

因此，在整个实验过程中必须保持低温。

准备冰冻样品前，确保离心机和离心转子在低温下预冷。

4.沉淀条件优化：冷沉淀的效果受到多个因素的影响，例如盐浓度、pH值和离心速度。

为了获得最佳结果，必须对这些因素进行优化。

通过调整溶液的盐浓度和pH值，可以增加沉淀的选择性和效率。

此外，根据目标分子的大小选择合适的离心速度也很重要。

其次1.蛋白质纯化：冷沉淀可用于从复杂的生物样品中纯化目标蛋白质。

通过调整溶液条件和离心参数，可以靶向分离特定的蛋白质。

冷沉淀后的蛋白质可以通过洗脱步骤进行纯化和浓缩。

2.抗原检测：冷沉淀还可以用于检测特定蛋白质或抗原在生物样品中的存在与否。

通过结合特异性抗体和冷沉淀的方法，可以选择性地富集并检测目标抗原。

3.药物筛选：冷沉淀还可以应用于药物筛选研究。

通过与化合物库的相互作用，可以筛选出对目标蛋白质具有特殊亲和力的化合物。

这种方法对于发现新的抗菌药物、抗肿瘤药物等具有重要意义。

综上所述，临床应用冷沉淀在蛋白质纯化、抗原检测和药物筛选等研究中具有广泛的应用潜力。

然而，为了确保实验的准确性和可重复性，需要注意实验设备和试剂的质量，进行样品处理和沉淀条件的优化，并进行详细的实验设计和数据分析。