化学发光原理

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化学发光—竞争法
酶标抗体
待测抗原
FITC标记 标记 的抗原衍 生物
待测样品
待测样品和衍生物跟抗 体的竞争结合
用磁珠筛选和抗原衍生 物，通过发光计算浓度
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Thanks!
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化学发光原理
A+B→[I]→产物 A+B→[I]→产物+光 产物+
反应试剂A 反应试剂A和B反应生成的激发态产物，处于激发态的物质不稳 反应生成的激发态产物， 定，很快跃迁到较低的能量状态（例如基态），同时将能量以光（通 很快跃迁到较低的能量状态（例如基态），同时将能量以光（ ），同时将能量以光 常为可见光）的形式发射出来。 常为可见光）的形式发射出来。 根据激发态物质产生的方式可以将化学发光反应分为两类： 根据激发态物质产生的方式可以将化学发光反应分为两类：一种 是有体系中的反应物发生化学反应直接生成激发态的产物；另一种则 是有体系中的反应物发生化学反应直接生成激发态的产物； 是由体系内存在的易于接受能量的荧光物质， 是由体系内存在的易于接受能量的荧光物质，获得化学反应释放的能 量后转变成激发态。 量后转变成激发态。
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化学发光—间接法
Y
待测抗体
Y
P
抗FITC抗体 抗体
Y
酶标抗体 待测血清 磁珠
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Y
FITC标记抗原 标记抗原
YY
化学发光—竞争法
待测抗原属于小分子，没有足够的抗原决定簇。 待测抗原属于小分子，没有足够的抗原决定簇。用已知量 的标记抗原，对比竞争酶标抗体。 的标记抗原，对比竞争酶标抗体。 若待测物浓度高,与衍生物抗原竞争， 若待测物浓度高,与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待 测物结合量则多，反应发光信号值低；若待测物浓度低， 测物结合量则多，反应发光信号值低；若待测物浓度低， 与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待测物结合量则少， 与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待测物结合量则少， 反应发光信号值高。 反应发光信号值高。
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化学发光-化学发光--夹心法 --夹心法
+
酶标抗体 被测抗原
+
FITC标记 FITC标记 抗体
磁微粒
抗体
Leabharlann Baidu
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化学发光—间接法
间接法适用于检测对象是自身抗体的情况,比如 间接法适用于检测对象是自身抗体的情况 比如 人甲状腺球蛋白抗体（ 人甲状腺球蛋白抗体（TGAB）和甲状腺过氧 ） 化物酶抗体（TPOAB）。 化物酶抗体（ ）。 由于抗体是IgG，引入酶标二抗捕获IgG。为了 ，引入酶标二抗捕获 由于抗体是 。 消除样品中其它IgG对实验结果的影响。先用磁 对实验结果的影响。 消除样品中其它 对实验结果的影响 珠将待测样品中待测物分离，通过洗涤后消除 珠将待测样品中待测物分离， 影响， 影响，再用标记的二抗对待测物进行结合完成 化学发光。 化学发光。
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化学发光-化学发光--夹心法 --夹心法
FITC标记的抗体与酶标抗体均和待测抗原不同表位 FITC标记的抗体与酶标抗体均和待测抗原不同表位 结合，形成“三明治”复合结构。 结合，形成“三明治”复合结构。通过磁固相上的 FITC抗体捕获分离“三明治”复合物，加入发光底 FITC抗体捕获分离“三明治”复合物， 抗体捕获分离 物，底物在酶的作用下的被催化裂解，形成不稳定 底物在酶的作用下的被催化裂解， 的激发态中间体， 的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发 出光子，形成发光反应。 出光子，形成发光反应。
化学发光免疫测定技术(CLIA) 化学发光免疫测定技术(CLIA)简介 (CLIA)简介
2009年 2009年8月13日 13日
国内外研究、使用现状 国内外研究、
临床检测主要是采用免疫学方法。临床免疫检测技术是利用抗 临床检测主要是采用免疫学方法。 原抗体反应原理检测生物体内物质的技术，该技术的引入使临床化学 原抗体反应原理检测生物体内物质的技术， 检验发生了革命性的变化：检测项目不断增加，方法的灵敏度更高、 检验发生了革命性的变化：检测项目不断增加，方法的灵敏度更高、 特异性更强，自动化程度更高。自上世纪80年代以后 年代以后， 特异性更强，自动化程度更高。自上世纪80年代以后，免疫学检测技 术随着单克隆抗体、人工合成多肽、基因工程表达抗原及各种标记技 术随着单克隆抗体、人工合成多肽、 术的成熟而迅速发展，放射免疫测定(RIA)和酶免疫测定 和酶免疫测定(EIA)逐渐取 术的成熟而迅速发展，放射免疫测定(RIA)和酶免疫测定(EIA)逐渐取 代传统的免疫沉淀和免疫凝聚，使检测的敏感性、特异性都大大提高， 代传统的免疫沉淀和免疫凝聚，使检测的敏感性、特异性都大大提高， 随后化学发光技术的应用使免疫学检测的敏感性和线性范围得到进一 步的提高。这些技术在临床检验中的应用为疾病的诊断、 步的提高。这些技术在临床检验中的应用为疾病的诊断、疗效观察及 病因探讨提供了更直接和客观的资料。 病因探讨提供了更直接和客观的资料。
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血液中各种标志性蛋白的含量变化对辅助诊断及判断预后、转归、 血液中各种标志性蛋白的含量变化对辅助诊断及判断预后、转归、 评价疗效等具有重要的临床意义，临床检验中需要定量检测的情况较多， 评价疗效等具有重要的临床意义，临床检验中需要定量检测的情况较多， 因此临床上使用的相关产品多为定量产品，采用的方法有放射免疫、酶 因此临床上使用的相关产品多为定量产品，采用的方法有放射免疫、 联免疫、荧光免疫、化学发光、电化学发光等。其中进口试剂有贝克曼、 联免疫、荧光免疫、化学发光、电化学发光等。其中进口试剂有贝克曼、 雅培、德普、罗氏等跨国诊断公司的产品，采用的方法学多为化学发光， 雅培、德普、罗氏等跨国诊断公司的产品，采用的方法学多为化学发光， 其中罗氏产品为电化学发光法；而国产试剂中采用的方法学多数为放免 其中罗氏产品为电化学发光法； 法，部分为酶免，近两年开始出现化学发光类产品。 部分为酶免，近两年开始出现化学发光类产品。