生化实验实验三 蛋白质颜色反应及沉淀反应
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蛋白质的沉淀反应实验报告蛋白质的沉淀反应实验报告引言:蛋白质是生物体内一类重要的有机化合物,它们在细胞的结构和功能中起着重要的作用。
为了研究蛋白质的性质和功能,科学家们通过一系列实验来深入探索。
本实验旨在通过蛋白质的沉淀反应,研究其在溶液中的特性和行为。
实验材料和方法:1. 实验材料:- 鸡蛋清溶液- 醋酸铵溶液- 硫酸铵溶液- 乙醇- 甲醇- 氯仿- 玻璃棒- 离心机- 试管- 显微镜2. 实验方法:- 步骤一:取适量鸡蛋清溶液放入试管中。
- 步骤二:加入醋酸铵溶液,轻轻搅拌均匀。
- 步骤三:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤四:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤五:加入硫酸铵溶液,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤六:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤七:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤八:加入乙醇,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤九:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤十一:加入甲醇,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤十二:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十三:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤十四:加入氯仿,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤十五:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十六:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤十七:观察沉淀的形态和颜色,并使用显微镜进行进一步观察。
结果和讨论:经过实验,我们观察到了蛋白质的沉淀反应。
在添加醋酸铵溶液后,鸡蛋清中的蛋白质发生了沉淀。
通过离心的过程,我们得到了一系列沉淀物。
在加入硫酸铵溶液后,沉淀物变得更加明显,颜色也发生了变化。
随后,通过加入乙醇、甲醇和氯仿,我们可以观察到沉淀物的进一步变化。
根据观察结果,我们可以得出一些结论。
首先,蛋白质在醋酸铵的作用下发生了沉淀,说明醋酸铵可以用作蛋白质的沉淀剂。
其次,随着添加硫酸铵、乙醇、甲醇和氯仿,沉淀物的形态和颜色发生了变化,这表明不同的溶剂可以对蛋白质的沉淀产生不同的影响。
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应,进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。
如果条件发生了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、ph试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、 0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、millon’s试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%cuso:1g cuso晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml 446、10%naoh:10g naoh溶于蒸馏水,稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应(一)米伦(millon’s)反应1、苯酚实验:取0.5%苯酚溶液1ml于试管中,加millon’s试剂0.5ml,电炉小心加热观察颜色变化。
一、实验目的1. 理解蛋白质沉淀反应的基本原理。
2. 掌握常用的蛋白质沉淀方法。
3. 分析蛋白质沉淀反应的影响因素。
4. 学习蛋白质沉淀反应在生物科学中的应用。
二、实验原理蛋白质沉淀反应是指在一定条件下,蛋白质从溶液中析出的现象。
蛋白质沉淀反应的原因主要有两种:一是破坏蛋白质的水化膜,二是中和蛋白质所带的电荷。
当蛋白质的水化膜被破坏或电荷被中和时,蛋白质颗粒之间的相互排斥力减弱,导致蛋白质颗粒聚集形成沉淀。
蛋白质沉淀反应在生物科学中具有广泛的应用,如蛋白质的分离、纯化、定量分析等。
三、实验材料1. 蛋白质溶液:鸡蛋清溶液、牛奶蛋白质溶液等。
2. 沉淀剂:硫酸铵、硫酸钠、氯化钠、乙醇、甲醇、氯仿等。
3. 实验仪器:试管、移液管、滴管、pH计、离心机等。
四、实验方法1. 盐析法:向蛋白质溶液中加入适量的硫酸铵,观察蛋白质沉淀现象。
2. 低温沉淀法:将蛋白质溶液置于低温条件下,观察蛋白质沉淀现象。
3. 有机溶剂沉淀法:向蛋白质溶液中加入适量的乙醇或甲醇,观察蛋白质沉淀现象。
4. 重金属盐沉淀法:向蛋白质溶液中加入适量的重金属盐(如氯化汞),观察蛋白质沉淀现象。
五、实验步骤1. 准备蛋白质溶液:取鸡蛋清溶液或牛奶蛋白质溶液,用蒸馏水稀释至一定浓度。
2. 盐析法:向蛋白质溶液中加入适量的硫酸铵,观察蛋白质沉淀现象。
3. 低温沉淀法:将蛋白质溶液置于4℃低温条件下,观察蛋白质沉淀现象。
4. 有机溶剂沉淀法:向蛋白质溶液中加入适量的乙醇或甲醇,观察蛋白质沉淀现象。
5. 重金属盐沉淀法:向蛋白质溶液中加入适量的重金属盐(如氯化汞),观察蛋白质沉淀现象。
6. 记录实验结果,分析沉淀现象。
六、实验结果与分析1. 盐析法:向蛋白质溶液中加入硫酸铵后,观察到蛋白质沉淀现象。
这是因为硫酸铵破坏了蛋白质的水化膜,同时中和了蛋白质所带的电荷,导致蛋白质颗粒聚集形成沉淀。
2. 低温沉淀法:将蛋白质溶液置于4℃低温条件下,观察到蛋白质沉淀现象。
生物化学实验讲义实验一蛋白质的性质实验——蛋白质及氨基酸的呈色反应及蛋白质的沉淀反应实验目的1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。
2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
4.加深对蛋白质溶液的胶体性质的认识,了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
,一、茚三酮反应1.实验原理除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外,所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。
尿素、马尿酸、二酮吡唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。
因此,虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应,但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。
在定性、定量测定中,应严防干扰物存在。
该反应十分灵敏,1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应,是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步,第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛,水合茚三酮被还原成还原型茚三酮;第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
此反应的适宜pH为5~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同,酸度过大时甚至不显色。
2.材料、仪器与试剂蛋白质溶液;新鲜鸡蛋清溶液(蛋清∶水=1∶9);0.5%甘氨酸溶液;0.1%茚三酮水溶液;0.1%茚三酮-乙醇溶液3.实验操作①取2支试管分别加入鸡蛋清溶液和0.5%甘氨酸溶液1ml,再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液,混匀,在沸水浴中加热1~2分钟,观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
②在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液,风干后,再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液,在微火旁烘干显色,观察紫红色斑点的出现。
二、黄色反应1.实验原理含有苯环结构的氨基酸,如酪氨酸和色氨酸,遇硝酸后,可被硝化成黄色物质,该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。
多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸,所以有黄色反应,苯丙氨酸不易硝化,需加入少量浓硫酸才有黄色反应。
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应,进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。
如果条件发生了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、ph试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、 0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、millon’s试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%cuso:1g cuso晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml 446、10%naoh:10g naoh溶于蒸馏水,稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应(一)米伦(millon’s)反应1、苯酚实验:取0.5%苯酚溶液1ml于试管中,加millon’s试剂0.5ml,电炉小心加热观察颜色变化。
蛋白质的沉淀反应实验报告
嘿,咱聊聊蛋白质的沉淀反应实验呗!这可老有意思啦。
一进实验室,那感觉就像走进了一个神秘的魔法世界。
各种仪器摆放得整整齐齐,就等着我们去施展魔法。
开始实验啦!先把蛋白质溶液拿出来,那颜色就像淡淡的牛奶,看着就很诱人。
你能想象没有蛋白质溶液会咋样吗?肯定不行啊!这可是实验的关键呢。
接着加入沉淀剂,就像给蛋白质施了个魔法。
眼看着溶液开始发生变化,心里那个激动啊!这就像看着一朵花慢慢开放,充满了惊喜。
你想错过这样的精彩瞬间吗?肯定不想啊!看着蛋白质一点点沉淀下来,就像雪花飘落一样。
那景象可真美啊!这时候就得仔细观察,不能放过任何一个细节。
你能不认真观察吗?肯定不能啊!有时候实验也会出现小意外呢。
比如沉淀不明显,或者出现了奇怪的现象。
这就像在路上遇到了小怪兽,得想办法打败它。
不能因为一点小问题就放弃。
你能轻易放弃吗?肯定不能啊!得仔细分析原因,调整实验步骤。
实验过程中还得注意安全。
不能乱碰仪器,也不能把溶液洒出来。
这就像开车得遵守交通规则一样,不能乱来。
你能不注意安全吗?肯定不能啊!总之,蛋白质的沉淀反应实验充满了挑战和乐趣。
通过这个实验,我们可以更深入地了解蛋白质的性质,也能锻炼我们的实验技能。
让我们在这个魔法世界里继续探索,发现更多的奥秘吧!。
实验三蛋白质颜色反应及沉淀反应
一、目地
、掌握鉴定蛋白质地原理及方法.
、熟悉蛋白质地沉淀反应.
、进一步掌握蛋白质地有关性质.
二、原理
蛋白质分子中地某种或某些基团与显色剂作用,可产生特定地颜色反应,不同蛋白质所含氨基酸种类不同,颜色反应亦不同.颜色反应不是蛋白质地专一反应,一些非蛋白物质亦可产生相同地颜色反应,因此不能仅根据颜色反应地结果决定被测物质是否是蛋白质.颜色反应是一些常用地蛋白质定量测定地依据.
多数蛋白质是亲水胶体,当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解地盐后,即产生沉淀.
三、实验器材
、鸡蛋白、试管、吸管、滴管、水浴锅等
四、实验试剂
、卵清蛋白液:将鸡蛋白用蒸馏水稀释倍,层纱布过滤,滤液冷藏备用.
、茚三酮溶液:茚三酮溶于乙醇并稀释至.
、氢氧化钠溶液:氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至.
、浓硝酸:比重.
、硫酸铜溶液:硫酸铜溶于蒸馏水,稀释至.
、饱和硫酸铵溶液:蒸馏水加硫酸铵至饱和.
、乙醇.
、结晶氯化钠.
、醋酸铅:醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至.
、饱和苦味酸溶液.
、醋酸溶液:冰醋酸用蒸馏水稀释至.
五、操作
、颜色反应:
、双缩脲反应:蛋白质分子中含有肽键,与两分子尿素经过加热形成地双缩脲地结构相似,能与硫酸铜结合成红紫色地络合物.
取一支试管,加蛋白质溶液滴,再加溶液滴及溶液滴,混匀,观察是否出现紫玫瑰色.
、黄色反应:蛋白质分子中含有苯环结构地氨基酸.遇硝酸可硝化成黄色物质,此物质在碱性环境中变为橘黄色地硝苯衍生物.
于一试管中加蛋白质溶液滴及浓硝酸滴,加热,冷却后再加溶液滴,观察颜色变化.
、茚三酮反应:蛋白质与茚三酮共热,则产生蓝紫色地还原茚三酮、茚三酮和氨地缩合物.此反应为一切蛋白质及α氨基酸所共有.含有氨基地其他物质亦呈此反应.
取蛋白质溶液置于试管中,加滴茚三酮试剂,加热至沸,即有蓝紫色出现.
、沉淀反应:
、蛋白质盐析作用:向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度,蛋白质即沉淀析出,这种作用称为盐析.
取蛋白质溶液,加入等量饱和硫酸铵溶液(此时硫酸铵溶液地浓度为饱和),微微摇动试管,使溶液混合静置数分钟,球蛋白析出(如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵).
、乙醇沉淀蛋白质:乙醇为脱水剂,能破坏蛋白质胶体质点地水化层而使其沉淀析出.
取蛋白质溶液,加晶体少许(加速沉淀并使沉淀完全),待溶解后再加入乙醇混匀.观察有无沉淀析出.
、重金属盐沉淀蛋白质:蛋白质与中金属离子结合成不溶性盐类而沉淀.
取试管支各加蛋白质溶液,一管内滴加醋酸铅溶液,另一管内滴加溶液至有沉淀生成.
、生物碱试剂沉淀蛋白质:植物体内具有显著生理作用地含氮碱性化合物称为生物碱(或植物碱).能沉淀生物碱或与其产生颜色反应地物质称为生物碱试剂,如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等.生物碱试剂能和蛋白质结合生成沉淀,可能因蛋白质和生物碱含有相似地含氮基团之故.
于支试管中加蛋白质溶液及醋酸溶液滴,再加饱和苦味酸溶液数滴,观察结果.
六、实验结果记录
、颜色反应结果
、沉淀反应结果
七、思考题
、简述茚三酮与蛋白质进行颜色反应地原理.
、维持蛋白质胶体溶液稳定性地因素有哪些?乙醇、重金属盐及生物碱试剂破坏蛋白质胶体溶液稳定性地机理是什么?。