下载文档原格式
实验2 分离以尿素为氮源的微生物1．实验原理 脲或称尿素，是 降解产物，有一些细菌含脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。
在尿素固体培养基中加入 指示剂，如有含脲酶的细菌存在，这些细菌会向外分泌脲酶，使培养基中的尿素分解产生氨，导致培养基pH 升高，颜色变 。
可用______________固体培养基作为对照。
2．实验步骤3．实验结果4．讨论分析·题组训练1．下列培养基中，能分离出分解尿素的细菌的是（ ）A ．葡萄糖、NaCl 、K 2HPO 4、酚红、琼脂糖、水B ．蛋白胨、酵母提取液、NaCl 、K 2HPO 4、酚红、琼脂糖、水C ．葡萄糖、NaCl 、K 2HPO 4、酚红、琼脂糖、水、尿素D ．蛋白胨、酵母提取液、NaCl 、K 2HPO 4、水、尿素2．幽门螺杆菌（Hp ）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。
在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。
实验基本步骤如下：(NH 2)2C=O+H 2O 脲酶 2NH 3+CO 2请回答：（1）在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现色环带。
（2）下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是灭菌。
A．高压蒸汽 B．紫外灯照射 C．70％酒精浸泡 D．过滤（3）步骤X表示。
在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液到培养基平面上。
菌液稀释的目的是为了获得菌落。
（4）在培养时，需将培养皿倒置并放在中。
若不倒置培养，将导致。
（5）临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的_________分解为NH3和14CO2。
现从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如下图所示：3．（1）欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，将土壤用进行一系列的梯度稀释，同一浓度的土壤稀释液应至少涂布个平板，通常以每个培养皿中有个以内的单菌落的那一组稀释倍数为最合适。
（2）接种后的培养皿于37 ℃的恒温箱中培养。
实验2 分离以尿素为氮源的微生物[学考报告]知识内容 考试属性考情解读分离以尿素为氮源的微生物 加试 1.进行微生物分离。
使用含有尿素的培养基，采用涂布分离法，分离有脲酶的细菌。
2.使用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌的存在。
3.说明分离以尿素为氮源的细菌的实验原理。
4.举例说明本实验分离出来的细菌不一定都是以尿素为氮源的细菌一、以尿素为氮源的微生物1.尿素 又称脲，是蛋白质降解的产物。
在人和其他哺乳动物如家畜的尿中都含有尿素，植物不能直接吸收尿素，因此大量尿素的存在将对环境造成污染。
2.以尿素为氮源的微生物这些细菌可以尿素为氮源，是因为其含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。
其利用尿素的反应式为：(NH 2)2C ＝O ＋H 2O ――→脲酶2NH 3＋CO 2。
3.分离以尿素为氮源的微生物所依据的原理在氮源只有尿素时，这些微生物能利用尿素获得氮源而存活；而其他微生物却不能利用尿素，最终因为缺乏氮源而死亡。
二、从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物实验1.实验目的(1)使用以尿素为唯一氮源的培养基分离含有脲酶的细菌。
(2)通过指示剂颜色的变化检知酶(脲酶)所催化的化学反应(培养基pH 的变化)。
(3)统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量。
2.实验原理(1)用选择培养基(培养基类型)可分离出以尿素为氮源的微生物。
(2)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌产生的脲酶将培养基中的尿素分解成氨，使培养基变碱，pH 升高，酚红指示剂变红。
(3)根据培养基中的菌落数，可统计土壤样品中含有的这种微生物的数量。
3.实验步骤(1)倒平板：在60 ℃左右时，将两只三角瓶中已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基，在酒精灯旁分别倒入两个培养皿中，在水平的超净台上摇匀，平放至凝固。
(2)制备细菌悬浮液将土样1 g，在无菌条件下加到有99 mL无菌水的三角瓶中，振荡10 min，制成10－2稀释液；从该稀释液中取0.5 mL悬液加到4.5 mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成10－3稀释液；再从10－3稀释液中取0.5 mL悬液加到4.5 mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成10－4稀释液；依此法可依次制备出10－5、10－6……土壤稀释液。
课时跟踪检测（二）分离以尿素为氮源的微生物1．从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如图所示：(1)图中物质A为________________，若要统计每克土壤样品中以尿素为氮源的细菌的活菌数目，宜采用________________法接种到尿素培养基上，对照组配制的培养基为____________培养基，若用同浓度的土壤稀释液接种，实验组培养皿中菌落数____________(填“大于”“等于”或“小于”)对照组。
在能利用尿素的细菌菌落周围，有红色环带出现的原因是_______________________________________________。
(2)下列培养基中，能分离出分解尿素的细菌的是( )A．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水B．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、尿素C．NaCl、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物、尿素D．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物(3)欲将分离得到的以尿素为氮源的细菌进行扩大培养，应使用________培养基。
答案：(1)无菌水涂布分离LB全营养小于能利用尿素的细菌产生的脲酶，将培养基中的尿素分解，产生的氨使指示剂呈红色(2)B (3)LB液体2．苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。
某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。
请回答下列问题：(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入______作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基________(填“影响”或“不影响”)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用____________________法。
(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于__________________________________；使用________________________________法可以在⑥上获得单菌落。
第2课时 分别以尿素为氮源的微生物[学习目标] 1.进行微生物分别。
运用含有尿素的培育基，采纳涂布分别法，分别有脲酶的细菌。
2.运用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌的存在。
3.说明分别以尿素为氮源的细菌的试验原理。
4.举例说明本试验分别出来的细菌不肯定都是以尿素为氮源的细菌。
一、试验原理1.脲和脲酶(1)脲：又称尿素，是蛋白质降解的产物。
人和其他哺乳动物的尿中都含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。
(2)脲酶：降解尿素的酶。
(3)以尿素为氮源的微生物的特点：含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。
其利用尿素的反应式为：(NH 2)2C==O ＋H 2O ――→脲酶2NH 3＋CO 2。
2.试验目的(1)运用专一的培育基(含有尿素)分别专一的细菌(有脲酶的细菌)。
(2)利用指示剂颜色的变更检知酶(脲酶)所催化的反应。
3.试验原理(1)不同微生物利用的氮源种类不同，有一些细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。
(2)尿素在脲酶的作用下降解产生NH 3，使培育基的pH 上升，培育基中的酚红指示剂变成红色。
4.两种培育基的比较 项目全养分LB 固体培育基 尿素固体培育基 培育基组成 0.25g 蛋白胨，0.12g 酵母提取物，0.25gNaCl ，0.5g 琼脂糖，25mL 水 0.025g 葡萄糖，0.12gNaCl ，0.12gK 2HPO 4，0.25mg 酚红，0.5g 琼脂糖，15mL 水，10mL 尿素溶液灭菌 方法高压蒸汽灭菌 10mL 尿素溶液采纳G6玻璃砂漏斗过滤灭菌，其余用高压蒸汽灭菌，60℃时两者混合 上述属于选择培育基的是尿素固体培育基。
用琼脂糖代替琼脂配制固体培育基的缘由是：琼脂中含有少量含氮化合物，用琼脂糖代替琼脂作为微生物培育基的固化剂，是为了尽可能使培育基中只含尿素一种含氮化合物，以防止琼脂中的含氮化合物被不能以尿素为氮源的细菌利用，有利于对以尿素为氮源的细菌的筛选。
第2课时 分离以尿素为氮源的微生物一、实验目的、原理1．实验目的(1)使用专一的培养基(含有尿素)分离专一的细菌(有脲酶的细菌)。
(2)利用指示剂颜色的变化检知酶(脲酶)所催化的反应。
2．实验原理 (1)不同微生物利用的氮源种类不同，有一些细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。
(2)尿素在脲酶的作用下降解产生NH 3，使培养基的pH 升高，于是培养基中的酚红指示剂变成红色。
思考 能在选择培养基上生长的肯定是所筛选的细菌吗？答案 原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的过程。
有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长和繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需要进一步验证。
探究1——注重方法1. 酚红指示剂的选择本实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色的pH 范围是6.4～8.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色。
以尿素为氮源的微生物培养一段时间后，由于细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中的尿素分解，产生的NH 3使培养基的pH 升高变成碱性，于是培养基中的酚红指示剂变成红色，圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力愈强。
2．培养基的配制与灭菌上述是选择培养基的是尿素固体培养基。
用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基的原因是：琼脂中含有少量含氮化合物，用琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基的固化剂，是为了尽可能使培养基中只含尿素一种含氮化合物，以防止琼脂中的含氮化合物被不能以尿素为氮源的细菌利用，有利于对以尿素为氮源的细菌的筛选。
思维拓展 常见选择培养基的用途不同(1)加高浓度食盐：用于筛选获得金黄色葡萄球菌。
(2)加青霉素：用于筛选获得真菌(酵母菌和霉菌)，原理是青霉素能破坏原核生物的细胞壁，杀死原核生物。
(3)缺少氮源的培养基：用于筛选得到自生固氮菌。
(4)缺少碳源的培养基：筛选自养型微生物。
3．分离原理尿素固体培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素为氮源；缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能正常生长繁殖，所以，用尿素固体培养基能够筛选出分解尿素的微生物。
实验2 分离以尿素为氮源的微生物【学习目标】1.使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）。
2.利用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应。
【教学重点】对土样的选取和选择培养基的配置【教学难点】选择培养基的配置【教学过程】（一）引入新课上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。
下面我们来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。
（二）进行新课1.基础知识1.1 尿素是一种重要的氮肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和CO2，这是因为细菌能合成脲酶。
1.2 科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。
所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。
〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的是尿素，琼脂的作用是凝固剂。
〖思考2〗该培养基对微生物具有选择作用。
如果具有，其选择机制是只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。
1.3在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。
除此之外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。
【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。
公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量1.4 采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是：（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数。
〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是：恰当的稀释度。
一、选择题1.A。
解析：能利用尿素的微生物就是因为体内含有脲酶，可降解尿素为其生长繁殖提供氮源。
2.C。
解析：LB培养基必须含五大营养元素：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子。
由于是固体培养基还必须有凝固剂，为与尿素培养基作对比，所用凝固剂不能带来氮源干扰，因此只能选择相对更为纯净的琼脂糖了。
3.C。
解析：LB培养基为完全培养基，会出现大量菌落。
尿素培养基上只有能以尿素做氮源的微生物能存活，因此其上的菌落数量和种类都将会减少。
尿素培养基上出现的菌落就是能利用尿素的那些微生物菌落。
4.A。
解析：该同学可能取的土样不同，可取其他同学的土样进行培养，同时将未接种的培养基同时培养，如果结果不是大约50个菌落，可能是培养基污染或操作有误；如果结果和其他同学数据相同，且未接种的培养基没有菌落生成，说明是土样不同。
5.D。
解析：能合成脲酶的微生物主要是分解尿素的细菌，其碳源为葡萄糖，氮源为尿素。
6.B。
解析：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M＝(234÷0.1)×106＝2.34×109。
7.A。
解析：酚红指示剂是灵敏性高的碱性指示剂，分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使pH升高，使酚红指示剂变红。
8.A。
解析：将菌液进行系列梯度稀释，在稀释倍数足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。
9.C。
解析：在倒平板时，左手将皿盖打开一条缝隙，不能将培养皿完全打开，以免杂菌污染。
10.B。
解析：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 ℃恒温箱的目的是检测培养基是否被杂菌污染，即制备是否合格。
11.C12.D。
解析：微生物计数法主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法、光电比浊法、最大可能数(MPN)法、膜过滤法等。
13.C。
解析：琼脂和琼脂糖都起凝固剂的作用，用于制备固体培养基。
但琼脂为混合物，含少量含氮化合物，琼脂加以纯化，去除含氮化合物就成为琼脂糖。
第2课时分离以尿素为氮源的微生物学案（含答案）第第2课时课时分离以尿素为氮源的微生物分离以尿素为氮源的微生物学习目标1.进行微生物分离。
使用含有尿素的培养基，采用涂布分离法，分离有脲酶的细菌。
2.使用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌的存在。
3.说明分离以尿素为氮源的细菌的实验原理。
4.举例说明本实验分离出来的细菌不一定都是以尿素为氮源的细菌。
一.实验原理1.脲和脲酶1脲又称尿素，是蛋白质降解的产物。
人和其他哺乳动物的尿中都含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。
2脲酶降解尿素的酶。
3以尿素为氮源的微生物的特点含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。
其利用尿素的反应式为NH22COH2O脲酶2NH3CO2。
2.实验目的1使用专一的培养基含有尿素分离专一的细菌有脲酶的细菌。
2利用指示剂颜色的变化检知酶脲酶所催化的反应。
3.实验原理1不同微生物利用的氮源种类不同，有一些细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。
2尿素在脲酶的作用下降解产生NH3，使培养基的pH升高，培养基中的酚红指示剂变成红色。
4.两种培养基的比较项目全营养LB固体培养基尿素固体培养基培养基组成0.25g蛋白胨，0.12g酵母提取物，0.25gNaCl，0.5g琼脂糖，25mL水0.025g葡萄糖，0.12gNaCl，0.12gK2HPO4，0.25mg酚红，0.5g琼脂糖，15mL水，10mL尿素溶液灭菌方法高压蒸汽灭菌10mL尿素溶液采用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌，其余用高压蒸汽灭菌，60时两者混合上述属于选择培养基的是尿素固体培养基。
用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基的原因是琼脂中含有少量含氮化合物，用琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基的固化剂，是为了尽可能使培养基中只含尿素一种含氮化合物，以防止琼脂中的含氮化合物被不能以尿素为氮源的细菌利用，有利于对以尿素为氮源的细菌的筛选。
特别提醒能在选择培养基上生长的不一定是目的菌原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需进一步鉴定。
例1xx温州高二检测下列有关尿素培养基的叙述，错误的是A.根据物理性质划分，该培养基属于固体培养基B.培养基中的唯一氮源为尿素，用以筛选以尿素为氮源的微生物C.培养基中的酚红，用于鉴别以尿素为氮源的微生物D.培养基中加入G6玻璃砂漏斗过滤的尿素后，要用500g/cm2压力90以上灭菌30min答案D解析因为尿素加热会分解，所以应先将培养基经500g/cm2压力灭菌30min，再添加经过G6玻璃砂漏斗过滤后的尿素。
例2尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌的分解作用，才能被植物吸收利用。
某同学要分离出土壤中能分解尿素的细菌，并尝试进行计数，培养基配方如下表K2HPO4NaClH2O葡萄糖尿素酚红琼脂0.12g0.12g15mL0.025g2.0g0.25mg0.5g1分解尿素的细菌都能合成________，该种细菌在生态平衡中起到什么作用____________。
写出细菌分解尿素的反应式________________________________________。
2根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌________填“能”或“不能”，原因是_________________________________________________________ _________________________________________________________ _________________________________________________________ ____________________________________。
3尿素在高温下容易分解，因此常用________________对尿素进行过滤灭菌，而该器材在进行过滤灭菌操作前应使用______________法进行灭菌。
答案1脲酶参与了氮循环或维持氮平衡NH22COH2O脲酶2NH3CO22不能琼脂是未被纯化的混合物，内含一定的含氮化合物，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的细菌3G6玻璃砂漏斗高压蒸汽灭菌解析1含有脲酶的细菌通过降解尿素作为其生长的氮源，从而也起到维持生物圈氮元素平衡的作用，脲酶分解尿素的反应式为NH22COH2O脲酶2NH3CO2。
2从培养基的成分看，因为含有琼脂，所以不能分离出分解尿素的细菌，因为琼脂是一种未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选。
3尿素在高温下易分解，应采用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌，G6玻璃砂漏斗在使用之前，需采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。
方法技巧筛选菌株的原理1原理根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学.物理因素的抗性不同而制备培养基。
2方法在培养基中加入某种化学物质。
例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以筛选出金黄色葡萄球菌。
改变培养基中的营养成分。
例如，缺乏氮源时可以分离固氮微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出能降解石油的微生物；用含无机碳源的培养基分离出自养型微生物。
改变微生物的培养条件。
例如，将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物；用普通培养基在无氧条件下分离出厌氧型和兼性厌氧型微生物。
二.实验操作与分析1.实验中的对照设置1实验组以尿素固体培养基进行培养。
2对照组以全营养LB固体培养基进行培养。
2.实验步骤3.实验结果培养基细菌悬液稀释度104105LB固体培养基尿素固体培养基1稀释度为104的培养基中的平均菌落数多。
2在相同稀释度的情况下，尿素培养基中的平均菌落数少于LB培养基中的平均菌落数，其原因是大多数微生物不能利用尿素为氮源。
3在尿素培养基上的菌落周围会出现红色的环带。
归纳总结1.样品稀释的问题1稀释原因样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目。
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。
2稀释标准选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数在30300之间，便于计数。
2.与涂布平板有关的问题1防止培养基外溅在倒平板的过程中，不能将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
2涂布器的灭菌玻璃刮刀用70酒精消毒，取出时，多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的玻璃刮刀在酒精灯火焰上引燃。
3设置对照可排除实验中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
3.酚红指示剂的选择本实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色的pH范围是6.48.2，在酸性条件下呈黄色，碱性条件下呈红色。
以尿素为氮源的微生物培养一段时间后，由于细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中的尿素分解，产生的NH3使培养基的pH升高变成碱性，于是培养基中的酚红指示剂变成红色，圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力愈强。
例3xx浙江名校“新高考”联盟请分析回答以下关于分离以尿素为氮源的微生物实验的问题1脲酶可以催化尿素分解为______________，其中碱性物质可以使酚红指示剂变为______。
2分离以尿素为氮源的微生物，培养基配制必须加凝固剂________，培养基在________g/cm2压力下灭菌30分钟，冷却至60，加入通过______________的尿素溶液，混合均匀待用。
3为了从土壤中分离得到以尿素为氮源的微生物，分离效果比较好的操作方法是采用______________，采用该方法分离，土壤溶液必须经过________处理。
答案1NH3和CO2红色2琼脂糖500G6玻璃砂漏斗过滤3涂布分离法稀释例4xx嘉兴模拟幽门螺杆菌Hp感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。
在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。
实验基本步骤如下配制培养基灭菌.倒平板X培养观察请回答1在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp中含有________，它能以尿素为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现________色环带。
2下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是________灭菌。
A.高压蒸汽B.紫外灯照射C.70酒精浸泡D.过滤3步骤X表示________。
在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液____________到培养基平面上。
菌液稀释的目的是获得________菌落。
4在培养时，需将培养皿倒置并放在______________中。
若不倒置培养，将导致___________。
5常用的纯化微生物的方法除涂布分离法外，还有______________。
6临床上用14C呼气实验检测人体是否感染Hp，其基本原理___________________________。
答案1脲酶红2D3接种均匀涂布单4恒温培养箱无法形成单菌落5划线分离法6Hp能将14C标记的尿素分解为NH3和14CO2解析1幽门螺杆菌中含有脲酶，能将尿素分解成为NH3和CO2。
NH3为碱性，能使酚红指示剂呈红色，故菌落周围会出现红色环带。
2尿素在高温下会被分解，故不能用高温灭菌法，只能采取过滤的方法。
3由培养操作步骤可知，X为接种。
接种时，应将菌液均匀涂布在培养基上。
为了获得单菌落，接种前应该稀释菌液。
4为了形成单菌落还应该将培养皿倒置在恒温培养箱中。
分离以尿素为氮源的微生物实验前的准备实验目的实验原理实验设备.用品及材料实验过程倒平板制菌悬液涂布分离细菌倒置培养菌落数观察1.判断正误1在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是对分离的菌种作进一步的鉴定2制备土壤悬液，需用无菌水浸润土壤，然后从土壤稀释液底部取样3全营养培养基中含有较多菌落，而尿素培养基上含有少量菌落，最可能的原因是全营养培养基被污染4尿素固体培养基配制后需要在1211kg/cm2压力下灭菌15min5分离以尿素为氮源的微生物实验中的LB培养基和尿素培养基均为固体培养基6筛选微生物时要根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，如筛选分解尿素的细菌要用尿素作为唯一氮源答案1234562.xx浙江名校协作体联考下列有关“分离以尿素为氮源的微生物”实验的叙述，正确的是A.对尿素溶液要使用70酒精浸泡灭菌B.分离出的菌落继续在固体培养基中扩大培养C.划线分离法比涂布分离法更易获得单菌落D.培养基中需加琼脂糖作为凝固剂答案D解析对尿素溶液要通过G6玻璃砂漏斗过滤进行灭菌，A项错误；分离出的菌落需要在液体培养基中进行扩大培养，B项错误；涂布分离法比划线分离法更容易获得单菌落，相比较而言，后者操作简单，C项错误；由于琼脂中含有氮元素，因此在分离以尿素为氮源的微生物实验中，凝固剂采用琼脂糖，D项正确。
