植物愈伤组织诱导培养实验指导--李老师

水稻愈伤组织的诱导实验报告实验目的：本实验旨在探究水稻愈伤组织的诱导方法，为将来的水稻遗传改造研究提供参考。

实验材料和仪器：1. 材料：水稻种子、MS培养基、植物生长调节剂2,4-D、生长调节剂TDZ、无菌器具、琼脂、无菌操作室。

2. 仪器：无菌操作台、显微镜、实验室平衡器等。

实验步骤：1. 生物材料准备：选取幼苗期生长良好、品种鲜明的水稻种子作为材料。

将水稻种子进行表面消毒，处理方法为分别用70%的酒精和5%的次氯酸钠(1:1)混合消毒3-5分钟，然后充分清洗。

2. 建立组织培养体系：将消毒后的水稻种子在无菌操作台上进行分离培养。

将种子取出后，从胚乳中取出胚轴，用剪刀消毒后放入含有MS培养基的无菌培养瓶中，置于无菌操作室中进行培养。

在35-37°C下连续培养3-5天。

3. 筛选愈伤组织：将培养2-3天的胚轴等植物试管苗等组织放置在含有不同浓度的2,4-D和TDZ的培养基中，培养10-15天。

筛选出生长具有愈伤能力的组织，采用显微镜等方法进行观察，并进行相应的分离和培养。

4. 愈伤组织的维持和复壮：将筛选出的愈伤组织维持在含有2,4-D和TDZ的培养基中，定期进行转移或分离。

当愈伤组织增生至一定程度后，将其转移到不含激素的培养基中，进行复壮。

实验结果：在实验过程中，我们选择了4个不同浓度的2,4-D和TDZ进行培养，筛选出了愈伤组织，并进行了维持、修复工作。

经过5次转移和增殖培养，我们成功地建立了稳定的水稻愈伤组织体系。

结论：本实验采用的方法可行，成功地建立了稳定的水稻愈伤组织体系。

本研究为今后的水稻遗传改造和抗性育种提供了良好的基础。

植物愈伤组织诱导培养基的配制植物愈伤组织诱导培养基（简称愈伤培养基）是一种含有特定激素和营养物质的培养基，其主要作用是诱导植物体组织形成愈伤组织，从而实现植物组织培养、育种等研究。

本文将介绍植物愈伤组织诱导培养基的配制。

一、基础盐溶液的配制基础盐溶液是愈伤培养基的基础成分，其配方基本固定，主要成分包括无机盐和蔗糖等。

基础盐溶液的配入量不同，会影响培养基的pH等指标。

基本的基础盐溶液配方：碳酸钾（K2CO3）2.5g、硝酸铵(NH4NO3)1.0g、硫酸镁（MgSO4·7H2O）1.0g、氯化钙（CaCl2·2H2O）0.15g、磷酸二氢钾（KH2PO4）0.25g、蔗糖20g、亚硫酸氢钠（NaHSO3）0.25g、维生素B5（nicotinic acid amide）0.1mg、维生素B1（thiamine·HCl）0.1mg，配入1L蒸馏水中。

注意：不同植物种类的愈伤培养基种类略有不同，需要根据实验需求和特性进行差异化调整。

二、植物生长素的添加植物生长素是愈伤组织诱导的必要因素之一，常用的生长素有IAA、IBA、NAA、2,4-D 等，其中2,4-D是最常用的生长素。

植物生长素的添加量需要视植物种类、处理目的和生长素种类而定。

一般情况下，2,4-D的添加量为1-2mg/L，但不同品种之间的生长素敏感性可能不一致，因此需要优化试验条件。

如果使用IBA或NAA等生长素，其配入量一般为0.1-0.5mg/L。

三、其他添加物除了基础盐溶液和植物生长素外，愈伤培养基还需要添加其他营养物质、激素等。

下面列举了一些常用的添加物及其配入量：1、硫酸甘露醇（mannitol）：2-3%。

用于储存或早期培养。

2、水杨酸（Salicylic acid）：10-500mg/L。

用于抑制愈伤组织的黑化和坏死。

3、多种维生素：如维生素B1、B5、C，一般用于添加到培养基中的含量为5-10mg/L。

综合性实验报告胡萝卜肉质根愈伤组织诱导及继代增殖培养一、实验原理及目的（一）实验目的1、通过MS培养基母液的配制和保存，掌握配制于保存培养基母液的基本技能。

2、通过MS固体培养基的配制，掌握培养基的制备基本技能。

3、学会和掌握诱导愈伤组织的基本技术。

4、初步掌握组织培养的无菌操作技术。

5、初步掌握外植体的消毒技术。

6、掌握组培室常用的化学试剂。

7、学会和掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术。

（二）实验原理1、配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。

2、在自然情况下，根主要为植物吸收和固定的重要器官，同时，有些植物的根亦具有繁殖的功能。

植物根生长快、代谢能力强、变异小，使得其在研究根的营养吸收、生长和代谢的变化规律、器官分化、形态建成规律等方面具有重大的理论与实践意义。

依据细胞全能性原理，即指任何具有完整细胞核的细胞（动物、植物等），都拥有形成一个完整个体所必需的全部遗传信息（DNA）。

就胡萝卜根来说，其肉质根细胞同样具有形成完整再生植株的能力。

这种由单个根衍生而来并经继代培养而保存的，在遗传上具有一致的根的培养物，称为离体根无性系。

利用这些离体根的无性系可以进行器官再生体系、苗木无性系快速繁殖和其他方面的实验研究。

3、愈伤组织（callus）原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。

它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。

在植物体的创伤部分，愈伤组织可帮助伤口愈合；在嫁接中，可促使砧木于接穗愈合，并由新生的维管组织使砧木与接穗沟通。

在植物器官、组织、细胞离体培养时，条件适宜也可以长出愈伤组织。

其发生过程是：外植体的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞分化为薄壁细胞组织而形成愈伤组织。

植物愈伤组织诱导培养实验指导--李老师资料植物愈伤组织诱导培养实验实验目的：1.掌握植物愈伤组织的诱导和培养技术；2.了解植物生长素和植物生长调节因子的作用；3.实践动手能力，培养分析问题、解决实际问题的能力。

实验步骤：1.实验材料种子：芸苔、小麦、玉米等试剂：琼脂、SD综合培养基、激素溶液、酒精灯、移液管等2.种子的表面消毒取适量的芸苔种子，用70%的酒精灯烧消毒。

将种子放入无菌蒸馏水中浸泡20分钟，再用三次含酸性消毒液（NaClO）洗涤。

洗涤后，用无菌蒸馏水洗三次，并将水倒掉。

将种子放在干净、无菌的滤纸上晾干。

3.愈伤组织诱导3.1 试剂配制将SD综合培养基和激素溶液按体积比例配制成诱导培养基。

激素溶液的配方参考如下：IAA：千叶素：6-BA的比例为 10：1：1，浓度为0.108 mg/L；3.2 培养陈列室准备工作实验室必须具有无菌灯、搅拌器、制冷箱或培养箱等基本的实验设备。

实验前清洗设备，使用高压蒸汽或酒精灯等方式灭菌。

在无菌条件下制备琼脂、移液管、培养瓶等。

在实验操作台上，用70%的酒精清洗双手，并用无菌纸巾擦拭干净。

3.3 培养基的制作制好的培养基分装到15ml的培养瓶中。

琼脂用70%酒精擦拭干净，均匀铺在实验平台上，用于接种组织。

3.4 组织接种将种子放在培养基上，用无菌铁丝按一定距离排列成一排。

取出种子，切成0.5-1cm的暴露在外的子叶或幼芽，然后在接种组织区域按照一定距离进行均匀排列。

将培养瓶密封，并放在指定的温度下生长。

4．实验结果的处理和分析4.1 愈伤组织的诱导情况观察家哈的发育情况，如出现愈伤组织的形成，记录其在构型，大小等。

4.2 理化指标的测定在诱导完成后的期间，测定愈伤组织中的蛋白质含量，葡萄糖含量，游离氨基酸含量等指标。

注意事项：1.实验过程中要注意操作技巧，避免污染；2.在培养过程中，要注意温度和光照的控制；3.进行实验时，要做好实验记录和实验数据分析工作；4.实验后，要注意实验设备的清洁和归档。

一、实验目的1. 掌握无菌操作的植物组织培养方法；2. 通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；3. 通过诱导植物叶片形成愈伤组织，学习愈伤组织的建立方法；4. 了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整再生植株的过程，加深对植物细胞全能性的理解；5. 探讨不同激素配比对植物愈伤组织形成的影响。

二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性，通过特定的培养基和条件，使植物细胞或组织在体外条件下生长发育成完整植株的技术。

植物组织培养主要包括脱分化、再分化两个过程。

脱分化是指植物组织在培养条件下，由已分化的细胞重新获得分裂和分化的能力，形成愈伤组织；再分化是指愈伤组织在特定条件下，通过细胞分裂、增殖、分化等过程，形成具有特定形态和功能的器官。

三、实验材料与仪器实验材料：- 植物叶片（如小麦、水稻、玉米等）- MS培养基母液- 乙醇、氯化汞（HgCl2）、次氯酸钠等消毒剂- 琼脂- 烧杯、量筒、培养皿、解剖刀、剪刀、镊子、超净工作台、高压灭菌锅、水浴锅等实验仪器：- 培养室- 电子分析天平- 橡皮筋等四、实验步骤1. 材料预处理：- 将植物叶片用无菌水清洗，去除表面污物；- 用70%乙醇消毒30秒，然后用无菌水冲洗3次；- 用氯化汞（HgCl2）或次氯酸钠消毒5分钟，再用无菌水冲洗3次；- 将消毒后的叶片切成约1cm×1cm大小的块状。

2. 愈伤组织诱导：- 将预处理后的叶片块状接种于MS培养基中；- 在培养室中，将培养皿放置于适宜的温度（25℃左右）和光照条件下； - 观察愈伤组织的形成情况，记录愈伤组织的颜色、质地、大小等特征。

3. 激素配比试验：- 将愈伤组织接种于不同激素配比的MS培养基中；- 观察愈伤组织的生长情况，记录愈伤组织的颜色、质地、大小等特征； - 比较不同激素配比对愈伤组织形成的影响。

4. 再分化培养：- 将愈伤组织接种于含有生长素和细胞分裂素的MS培养基中；- 在培养室中，将培养皿放置于适宜的温度（25℃左右）和光照条件下； - 观察再分化过程，记录芽和根的形成情况。

一、实验目的1. 掌握植物组织培养技术的基本操作流程。

2. 熟悉愈伤组织的诱导方法及再分化过程。

3. 学习植物激素在愈伤组织形成与再分化中的作用。

4. 了解植物细胞的全能性及组织培养技术在植物育种中的应用。

二、实验原理植物组织培养技术是将植物器官、组织或细胞在人工条件下进行无菌培养，使其在适宜的培养环境中生长、分化，最终形成完整植株的过程。

愈伤组织是植物组织培养过程中的一个重要阶段，它是由已经分化的细胞脱分化形成的无定形细胞团。

通过诱导愈伤组织，可以进一步分化为根、茎、叶等器官，实现植物繁殖和育种。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段。

2. 试剂：无菌水、无菌滤纸、70%乙醇、5%次氯酸钠、琼脂、蔗糖、硝酸钙、硝酸钾、硝酸铵、磷酸二氢钾、生长素、细胞分裂素、琼脂酶、滤纸等。

四、实验步骤1. 材料预处理（1）将水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段分别用70%乙醇消毒30秒，再用5%次氯酸钠消毒5分钟，最后用无菌水清洗3次。

（2）将消毒后的材料用无菌滤纸吸干水分。

2. 愈伤组织诱导（1）将预处理后的材料切成约1cm×1cm的小块，放入含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中。

（2）将培养皿放入培养箱中，在适宜的温度和光照条件下培养。

3. 愈伤组织再分化（1）将愈伤组织转移到含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中。

（2）在适宜的温度和光照条件下培养，观察愈伤组织分化为根、茎、叶等器官的情况。

4. 数据记录与分析（1）观察并记录愈伤组织的生长情况，包括生长速度、愈伤组织颜色、形态等。

（2）观察并记录愈伤组织再分化为根、茎、叶等器官的情况，包括器官形态、生长速度等。

（3）分析不同植物激素浓度对愈伤组织形成与再分化的影响。

五、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导实验结果表明，水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段在含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中均能诱导出愈伤组织。

本科学生综合性实验报告
学号074120219 姓名吕师留
学院生命科学学院专业、班级07级应生A班实验课程名称植物组织培养实验
教师及职称龙维彪（讲师）
开课学期2009 至2010 学年下学期
填报时间2010 年 5 月11 日
云南师范大学教务处编印
一．实验设计方案
1．实验现象与结果
1.1我们小组负责配制有机成分母液的配制，配好后透明澄清，配制完成，下一星期再用时也没有产生沉淀。

1.1.2胡萝卜块根接种经两个星期培养的结果为所示：
由于我的图片没有，所以只能写下记录结果本次实验形成愈伤组织的效率是100%每一瓶的接种量为5块。

有两瓶比较好，一瓶被烫伤一点，主要的原因是接种时胡萝卜块大小适中，且无菌操作好。

1.1.3胡萝卜愈伤组织接种后，经两个星期培养的结果为如下图所示：
此次实验圆满成功，愈伤组织多，且多，色泽鲜艳，质地疏松，都过60ml的刻度线。

3．实验总结
此次实验获得圆满成功，学会了无菌操作，且其他操作技能也得到锻炼。

教师评语及评分：
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