干货细胞养得好,习性掌握牢
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细胞培养过程及注意事项
嘿,朋友!你知道细胞培养是咋回事不?这就好比是在给一群“小生命”打造一个舒适的家。
细胞培养,简单说就是在实验室里,给细胞提供合适的环境,让它们好好生长、繁殖。
那这个过程是咋样的呢?
先得准备好“家”的材料,比如培养皿、培养基这些。
培养皿就像是细胞的小房子,得干净、无菌。
培养基呢,那可是细胞的“美食”,里面有各种营养成分,得调配得恰到好处,不然细胞可要闹脾气啦!
然后,要把细胞小心翼翼地放进去。
这可得轻手轻脚,就像抱小婴儿一样,生怕弄疼了它们。
放进细胞后,环境控制可重要了!温度得合适,就像咱们夏天得开空调,冬天得有暖气,细胞也喜欢舒适的温度。
还有湿度,太干太湿都不行,这就像咱们待在太干燥的地方会皮肤干裂,太潮湿又浑身难受。
再说说细胞的“吃喝”。
要定期给它们换新鲜的培养基,不然“吃剩菜剩饭”,细胞能长得好吗?
那细胞培养有啥注意事项呢?
你想啊,细胞那么小,那么脆弱,稍微有点细菌、病毒啥的,它们就得遭殃。
所以整个操作过程必须严格无菌,这可不是开玩笑的!你
要是不小心带进去一点脏东西,那可就像在一锅好汤里掉进了一只苍蝇,全毁啦!
还有啊,细胞的生长速度不一样,你得时刻盯着,别等它们长满了还不知道,那可就挤得没法好好过日子啦!
每次操作都得认真记录,这就跟记账一样,不然你都不知道细胞啥时候长得好,啥时候出问题。
细胞培养可不简单,就像照顾一群娇气的“小公主小王子”,得有耐心,得细心。
你要是马马虎虎,它们可不会给你好脸色看哟!
总之,细胞培养是个精细活,需要我们用心去做,才能让这些小生命茁壮成长,为我们的科学研究贡献力量!。
养细胞注意事项养细胞是生物学和医学实验中常见的操作之一,而且要保持细胞的健康状态,需要一些特殊的注意事项。
以下是一些建议:1. 无菌操作:细胞培养需要在无菌条件下进行,以防止细菌、真菌或其他微生物的污染。
使用无菌实验室、器具和培养物料,戴手套,并确保实验台面和仪器表面都进行了有效的消毒。
2. 培养基准确配制:培养基的配制要准确,使用高质量的培养基成分。
保证培养基pH值的准确性,并在培养基中添加适量的营养物质,以满足细胞的生长需求。
3. 细胞的来源和纯度:确保细胞的来源可靠,并进行必要的鉴定。
细胞的纯度也是非常关键的,避免混合细胞的培养,以保持实验的准确性。
4. 培养环境的维持:控制温度、湿度和二氧化碳浓度是至关重要的。
使用恒温箱或CO2培养箱,确保培养环境的稳定性,维持适宜的生长条件。
5. 细胞密度的控制:细胞密度过高或过低都可能影响细胞的生长和代谢。
定期进行细胞计数,并按照实验的需要调整细胞的密度。
6. 定期检查细胞状态:定期观察细胞的形态和状态,检查是否有污染、死细胞或异常细胞的存在。
对于有问题的培养物,及时进行处理或更换。
7. 防止细胞交叉污染:避免使用同一台工作台或同一套培养器具进行不同细胞的培养,以防止细胞之间的交叉污染。
8. 注意细胞的传代:不同细胞株的传代次数不同,过度传代可能导致细胞突变、失去功能或产生异常。
根据文献或供应商的建议,控制细胞的传代次数。
9. 冻存与解冻:为了维护细胞的长期保存,需要掌握细胞冻存和解冻的正确方法。
使用适当的冻存液和冷冻容器,遵循正确的冷冻和解冻程序。
10. 个人卫生:保持个人卫生,勤洗手,定期进行健康检查,以减少可能的细胞污染源。
这些都是养细胞过程中常见的一些注意事项,严格遵守这些原则有助于保持细胞的稳定生长和实验结果的可靠性。
细胞的培养方法《细胞培养秘籍大公开》嘿,朋友!今天咱来唠唠细胞培养这档子事儿,这可是个超级有趣的活儿哟!就像咱自己在家养个小宠物似的,不过这“小宠物”可精细着呢!首先啊,你得准备好一个干净得像刚洗过澡的无菌环境,这就好比给咱的细胞小宝贝准备了一个豪华大别墅。
这个环境要是不干净,那细胞可就容易生病啦,就像咱人在脏脏的地方待久了会不舒服一样。
然后呢,咱得有细胞种子,这可是咱培养的宝贝疙瘩呀!就像你要种个花,得先有花种子一样。
把细胞种子小心翼翼地放到培养皿里,这培养皿就像是细胞的小床。
接下来,就是给细胞准备“食物”啦!这“食物”就是培养液,里面有各种细胞爱吃的营养成分。
你可别小瞧这培养液,要是没选对或者没配好,细胞可就不乐意长啦。
这就好比你给宠物喂错了食物,它能长得好嘛!我跟你说,我有一次就不小心把培养液给弄错了,结果那些细胞就像闹脾气的小孩一样,都不怎么长了,可把我给急坏了。
细胞住进去了,有吃的了,还得给它一个舒服的温度。
一般咱就给它弄个 37 度左右,就像咱人觉得最舒服的温度似的。
这要是温度不合适,细胞也会不高兴的哟。
然后呢,就是观察啦!你得时不时地去看看你的细胞小宝贝们长得咋样啦,有没有乖乖长大呀。
这就像你养个小猫,你也得经常去看看它是不是调皮捣蛋啦,有没有吃饱睡好呀。
在培养的过程中,还有几点要特别注意的呢!比如说,千万别让细菌啊、病毒啊这些坏家伙混进去,这就像家里进了小偷一样,会把咱的细胞宝贝给祸害了。
所以操作的时候一定要严格按照无菌操作来。
还有啊,培养液要及时换,不然细胞吃剩下的“垃圾”堆在那,它们也不乐意呀。
再给你说个搞笑的事儿,我有一次换培养液的时候,手一抖,差点把培养皿给打翻了,。
细胞培养技巧细胞培养是生物学研究中常用的实验技术之一,它可以使细胞在体外环境中生长和繁殖。
细胞培养技巧的掌握对于细胞生物学研究的成功至关重要。
本文将介绍一些常用的细胞培养技巧,并探讨其在实验中的应用。
1. 细胞培养基的选择细胞培养基是细胞培养的基础,不同类型的细胞需要不同的培养基。
常用的培养基有DMEM、RPMI-1640和MEM等。
在选择培养基时,需要考虑细胞的类型、生长速度以及所需的营养物质等因素。
此外,培养基中还需要添加适当的血清、抗生素和生长因子等物质来促进细胞的生长和增殖。
2. 细胞的传代细胞的传代是细胞培养中常见的操作。
当细胞达到一定密度时,需要将其分离并转移到新的培养皿中,以保持细胞的健康生长。
传代的关键是掌握合适的细胞密度和培养时间。
过早或过晚的传代都会影响细胞的生长和功能。
此外,传代过程中需要注意细胞的处理方式,以避免对细胞造成伤害。
3. 细胞的冻存和解冻细胞的冻存和解冻是长期保存和恢复细胞的重要方法。
在冻存细胞之前,需要添加适当的冻存液来保护细胞。
冻存液中通常含有细胞培养基、血清和甘油等成分,以减少冻存过程对细胞的伤害。
解冻细胞时,需要将冻存管迅速放入37摄氏度的水浴中,以快速恢复细胞的活性。
4. 细胞的鉴定和污染检测细胞的鉴定和污染检测是细胞培养中必不可少的步骤。
细胞的鉴定可以通过形态学观察、免疫组化染色和PCR等方法进行。
此外,细胞的污染检测也非常重要,常见的污染包括细菌、真菌和支原体等。
为了确保实验结果的准确性,必须保证细胞的纯度和无菌性。
5. 细胞的实验处理在进行细胞实验时,需要注意一些细节处理。
首先,要掌握合适的细胞密度和处理时间,以确保实验的可重复性。
其次,要避免细胞的过度处理,以免对细胞造成伤害。
此外,实验中还需要注意细胞的培养条件,如温度、湿度和CO2浓度等,以提供适合细胞生长的环境。
细胞培养技巧的掌握对于细胞生物学研究至关重要。
通过选择合适的培养基、掌握细胞的传代、冻存和解冻技巧,以及进行细胞的鉴定和污染检测,可以确保细胞的健康生长和实验结果的准确性。
细胞培养技巧与注意事项分享细胞培养是生物学研究中常用的实验技术之一,它可以帮助研究人员了解细胞的生理功能、疾病发生机制以及药物的作用机制等。
然而,细胞培养过程中存在着一系列的技巧和注意事项,下面将分享一些经验和建议。
首先,细胞培养的基本步骤包括细胞的分离、传代和培养。
在细胞分离过程中,要注意使用合适的酶或缓冲液来解离细胞,避免对细胞造成损伤。
此外,细胞的传代过程中需要注意细胞密度的控制,过高的细胞密度会导致细胞凋亡或细胞间的竞争,影响细胞的生长和健康状态。
其次,培养基的选择也是细胞培养中的重要环节。
常用的培养基包括DMEM、RPMI-1640、MEM等,不同类型的细胞需要选择适合其生长的培养基。
此外,培养基中添加适量的血清、生长因子和抗生素等物质,可以提供细胞所需的营养和生长因子,并抑制细菌和真菌的污染。
细胞培养过程中,细胞的环境条件也需要合理控制。
细胞需要在适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度下生长。
常见的细胞培养箱可以提供恒温、恒湿和恒气体环境,确保细胞处于最佳的生长状态。
此外,细胞的培养器皿也需要选择适合的类型,如培养皿、培养瓶、多孔板等,以满足不同实验需求。
细胞培养中还需要注意细胞的检测和鉴定。
细胞的纯度和活性对实验结果的准确性和可靠性有着重要的影响。
常用的方法包括细胞形态观察、细胞计数、细胞凋亡检测、细胞周期分析等。
此外,细胞的鉴定也需要通过免疫组化、PCR等技术来确认细胞的种类和来源。
在细胞培养中,细胞的污染是一个常见的问题。
细胞的污染来源包括细菌、真菌、支原体、病毒等。
为了避免细胞的污染,需要在实验室中建立严格的无菌操作规范,使用无菌器皿和试剂,并定期对培养环境进行消毒和清洁。
此外,细胞培养中的实验数据的记录和管理也是非常重要的。
及时、准确地记录实验操作步骤、培养条件和结果,有助于实验的重复性和可比性。
同时,对细胞的来源、传代次数和培养时间等信息进行管理,可以避免实验数据的混乱和错误。
细胞培养作为一项基础的实验技术,对于生物学研究具有重要的意义。
细胞培养集锦(一个培养300多种细胞人的经验总结)一、消化与吹打版上很多朋友讨论细胞培养问题,见到很多很好的经验总结,这里说一些我个人的经验,因为一些比较特殊的原因,我自己培养接触过近300种细胞,常用于做实验的,累积有百余种,可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。
这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题,并不是因为细胞消化最重要,而是近期看到大家频繁讨论这个话题,我就抛砖引玉,下面几点拙见,可能与其它朋友总结的一些经验有点出入,仅供大家参考。
许多同学对细胞消化做了许多研究,得出了很多有价值的经验,也见到很多人的困惑。
其实细胞培养,尤其是细胞系的培养,就消化而言,不是太难,做得多了,善于总结经验,就能把细胞越养越好。
一般的程序步骤,细节操作,我这里就不讲了,只讲一些基本操作背后的知识,如果不对之处,欢迎指正,一起讨论:1,其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可,吸去胰酶后,残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞(绝大部分1min不到)。
对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞,连续这样传代,对细胞伤害很大。
简单的程序是PBS润洗吸去,胰酶润洗吸去,然后37度消化。
2,什么算是消化好了呢?不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了,一般你肉眼观察贴壁细胞层,只要能移动了,多半呈沙壮移动,其实已经可以了,很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞,这是没有必要的。
一般能移动了,说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了,细胞之间的附着也已经消失了,细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)。
这个时候应该停止消化,不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好,间隙很大,才停止。
细胞就是完全成单个细胞悬液,之后在贴壁的过程中仍然会聚集,这个是贴壁培养的细胞,尤其是肿瘤细胞的一个特性,无论死活的细胞都是如此,你可以尝试,准备100%的单个细胞悬液,贴壁后观察细胞,仍然是几个几个细胞聚集在一起。
养细胞注意事项养细胞是应用生物学研究中常用的一种实验技术,其可以提供大量的细胞用于分析和研究。
然而,成功地养细胞需要一系列的步骤和注意事项,以确保细胞的生长和健康。
以下是一些养细胞的注意事项。
1. 选择合适的细胞系:在养细胞之前,首先要选择适合的细胞系。
细胞系应当与研究目的相符合,并且能够在体外环境中生长和繁殖。
常见的细胞系包括HEK293、HeLa、CHO等。
2. 无菌操作:细胞培养需要保持无菌环境,以防止细胞被细菌、真菌或其他微生物污染。
实验室操作前要使用消毒剂彻底清洁和消毒操作台、试剂瓶盖、培养皿等实验设备,并注意穿戴无菌手套。
3. 使用无菌技术:细胞的传递和处理时需要使用无菌技术,例如使用无菌的试剂和培养液,使用消毒的工具和容器,并进行无菌过滤。
4. 培养条件的控制:细胞的培养条件对细胞的生长和健康至关重要。
细胞需要适当的养分、温度、湿度、气体环境和pH值。
通常使用含有营养物质的培养基,并在恒温箱中保持适宜的温度(通常为37摄氏度)和湿度,同时提供适当的气体环境(通常为5%的二氧化碳和95%的空气)。
5. 培养基的配制:培养基可以通过购买预制的培养基或自行配制。
自行配制时需要精确称量和混合所需的成分,并用去离子水溶解。
培养基的pH值要调整至适宜的范围(通常为7.2-7.4),同时需要进行无菌过滤以去除微生物。
6. 细胞传代:细胞在培养过程中会逐渐增殖,因此需要定期进行细胞的传代以避免过度密度和细胞老化。
传代时要使用无菌技术,避免细胞暴露在环境中。
7. 细胞检测:在养细胞的过程中,需要定期检测细胞的纯度和健康状况。
可以通过观察细胞的形态、增殖速度和基因表达来评估细胞的健康状况。
8. 避免细胞交叉污染:细胞实验中最常见的问题之一是细胞交叉污染。
为了避免这种情况的发生,应当使用无菌技术进行培养,定期对细胞进行效价检测,并保持细胞系的纯度和原始来源的可追溯性。
9. 储存和传输细胞:细胞可以在液氮或液氮中长期储存。
细胞培养基础知识细胞培养呀,就像是在一个小小的世界里创造生命的奇迹!咱就说,细胞可是生命的基本单位呢,培养它们就像是在照顾一群娇贵的小宝贝。
想象一下,你要有一个超级干净的“家”给它们住,这个“家”就是培养皿啦。
培养皿得干净得像刚洗过的脸一样,不能有一点儿脏东西,不然细胞宝宝们可不高兴啦。
然后呢,你得给它们准备好吃的,这就是培养液啦。
培养液就像是细胞的大餐,里面有它们需要的各种营养成分。
就好比咱人得吃米饭、蔬菜、肉一样,细胞也需要它们特定的营养来茁壮成长呀。
温度也很重要哦!不能太冷也不能太热,得刚刚好,就像咱们睡觉要盖合适的被子一样。
要是温度不合适,细胞可就不开心啦,可能就长不好咯。
还有哦,你得时刻关注它们的成长情况。
这就像家长关注孩子的成长一样,看看它们有没有长大呀,有没有生病呀。
要是发现有不对劲的地方,就得赶紧想办法解决。
培养细胞也得有耐心呀!不能着急,得慢慢等它们长大。
有时候可能等了好几天也看不到明显的变化,但别灰心,说不定它们正在偷偷努力呢。
而且呀,培养细胞可不能粗心大意。
就像你照顾小婴儿,一点小疏忽都可能带来大问题。
比如说不小心污染了培养皿,那可就糟糕啦,细胞可能就全军覆没了。
你说这细胞培养神奇不神奇?通过我们的努力,能让这些小小的细胞在我们的眼皮子底下成长、分裂,就好像看着一个小生命在慢慢绽放。
这感觉,真的很奇妙呀!培养细胞的过程中也会遇到各种挑战呢。
有时候细胞就是不长,你就得绞尽脑汁想办法,是培养液有问题?还是温度不合适?或者是其他什么原因。
这就像是解一道难题,得不断尝试、探索,直到找到答案。
细胞培养可不只是在实验室里玩玩哦,它对医学、生物学等好多领域都有着非常重要的意义呢。
通过培养细胞,我们可以研究疾病的发生机制,可以测试药物的效果,还可以为再生医学提供帮助呢。
总之呢,细胞培养是一件既有趣又有意义的事情。
虽然有时候会遇到困难,但只要我们有耐心、细心,就一定能让这些小细胞在我们的手中绽放出绚丽的光彩!难道不是吗?原创不易,请尊重原创,谢谢!。
养干细胞的注意事项
养护干细胞是为了保证其稳定的生长和功能,以下是关于养护干细胞的注意事项:
1. 避免污染:干细胞在培养过程中十分敏感,任何污染物质都可能对其产生不良影响。
因此,保持所有培养设备和培养试剂的清洁,并且使用无菌条件进行操作。
2. 培养基的选择和调节:根据不同类型的干细胞选择适合的培养基。
培养基的配方包括营养物质和生长因子等,在培养过程中可能需要定期调整,以促进干细胞的扩增和存活。
3. 温度和湿度的控制:干细胞对温度和湿度的变化十分敏感,确保培养环境的稳定性非常重要。
一般来说,将培养室保持在37°C左右的恒温器内,并保持适当的湿度。
4. 经常更换培养基:干细胞在培养基中不断增殖和消耗营养物质,及时更换培养基可以保证其正常的生长和功能。
5. 避免过度培养:干细胞的过度培养可能导致细胞分化、丧失干性以及细胞凋亡等问题。
因此,需要根据干细胞类型和特性进行定期检查和维护,及时分离和传代干细胞。
6. 规范操作和记录:养护干细胞需要严格按照操作规程进行操作,并及时记录关键参数和发现的问题。
这样可以方便排查问题和提高干细胞培养的质量。
总之,养护干细胞需要考虑到许多因素,包括培养基、温度、湿度、污染等。
定期检查和维护干细胞的生长状态对于保持其活力和功能至关重要。
细胞培养步骤讲解细胞培养呀,就像是照顾一群特别特别小的“宝贝”。
咱先得准备一个干净、舒适的“家”给这些小宝贝们,这就是培养皿啦。
就像给小婴儿准备温暖的小床一样重要。
然后呢,得有合适的“食物”,这就是培养液啦,里面有各种营养成分,让细胞们能茁壮成长。
接下来,要把细胞小心翼翼地“接”过来,这可得轻手轻脚的,不然弄伤了它们可不行。
就好像抱小婴儿,得温柔再温柔。
细胞住进来以后,咱得时刻关注着它们,看看它们是不是开心地生长着呀。
温度得合适,不能太冷也不能太热,不然它们会不高兴的。
环境也要保持清洁,不能有细菌、病毒这些“小坏蛋”来捣乱。
过一段时间,细胞们就会慢慢长大、增多啦。
这时候就像看着小婴儿一点点长大一样,心里那叫一个高兴呀。
有时候还得给它们换个“新房间”,把旧的培养液倒掉,换上新鲜的。
这就像是给孩子换干净的衣服一样。
而且呀,培养细胞可不能粗心大意,得时刻保持警惕。
万一有个什么问题,就得赶紧想办法解决。
这就跟照顾孩子一样,有点头疼脑热的就得赶紧想办法呀。
培养细胞可不简单呢,需要耐心和细心。
就像养一盆花,得精心呵护才能开出美丽的花朵。
想想看,通过我们的努力,这些小小的细胞能不断地生长、繁殖,为科学研究提供帮助,这是多么有意义的事情呀!在培养细胞的过程中,每一个步骤都不能马虎。
从准备培养皿到添加培养液,从接种细胞到观察它们的生长,每一步都像是在走钢丝,得稳稳当当的。
如果不小心让细菌混进去了,那可就糟糕啦,就像家里进了小偷一样让人头疼。
所以呀,得时刻保持高度的警惕。
细胞培养呀,真的是一门艺术,一门需要我们用心去钻研、去实践的艺术。
我们就像是细胞的“爸爸妈妈”,要给它们提供最好的条件,让它们健康快乐地成长。
大家可别小看了细胞培养哦,它可是很多科学研究的基础呢。
通过培养细胞,我们可以更好地了解生命的奥秘,为医学、生物学等领域的发展做出贡献。
所以呀,让我们认真对待细胞培养这件事,用我们的爱心和耐心,让这些小小的细胞发挥出大大的作用吧!难道不是吗?。
干货细胞养得好,习性掌握牢
作者:解螺旋.刀王
转载请注明来源:解螺旋,医生科研助手
刀王执念于养细胞,一些经验压箱底了也没有用,还是拿出来跟大家分享吧~细胞养得好不好,就看你懂不懂细胞的各种习性了。
1不同的细胞喜欢的环境是不一样的
这个不仅仅是说培养基的不同,还有就是细胞生长的空间密度问题。
有一些细胞是数量多一点比较好生长,生长状态也比较好。
这种一般是属于生长速度慢的细胞。
譬如内皮细胞。
而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。
尤其是巨噬细胞,生长速度非常得快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较好。
并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。
如果长成相连在一起的一满片的时候,细胞形态基本上就会差了,老化的会比较多,对后期实验结果是不好的。
所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。
2培养的细胞形态怎么养都不好
这个其实是有一个方法可以改善的。
对于贴壁细胞,如果细胞形态不好,(或者细胞形态不清晰,表面似有异物等)可以在传代的时候进行如下操作:
首先,倒掉旧的培养基,加入3ml新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。
这时侯再开始
正式的消化、吹打。
(巨噬细胞建议只吹打,不消化)
其次,把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内,培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,按时间点观察细胞贴壁情况。
10分钟观察一次,20分钟,30分钟观察一次。
选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁的情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中的培养基,加入3ml新培养基再轻轻洗一次。
然后加入完全培养基培养。
后续观察细胞生长情况以及形态。
通常称之为“二传”。
如果一次效果还不理想,可重复多次。
直到找到细胞完美形态。
其中要注意,结合细胞喜欢的生长情况。
喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。
反之亦然。
3关于培养瓶内加入培养基量的问题
这个是要靠自己去摸索的。
并不是小的玻璃方瓶5ml,大方瓶10ml的。
有些细胞反而是培养基少一点相反细胞形态会长得比较好。
(可能也是竞争很大,有优胜劣汰吧)。
对于生长速度快的细胞,易生长的细胞加少一点培养基细胞形态会更好。
但是要注意换液的掌握。
4关于选择培养瓶的问题
个人发现生长速度快的细胞在玻璃瓶内生长的状态会比一次性塑料瓶相对好一些。
而对于同一种细胞,在其生长旺盛快速的时期在玻璃瓶内的生长状态也比塑料瓶内好。
这可能是因为塑料瓶比玻璃瓶更容易贴壁。
生长速度快的细胞在塑料瓶这种相对“更安逸”的环境里
反而长得状态不如玻璃瓶好。
所以对于生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态,塑料瓶比玻璃瓶会好,对于生长速度快的细胞,玻璃瓶则会更好。
同样,对于同一种细胞,在其生长速度慢的时候,塑料瓶会好一点,比如刚刚复苏的时候,或者原代培养的时候。
而在其生长旺盛的时候,玻璃瓶则相对会好一点。
5传代时消化的问题
可以这样说,对于需要消化传代的细胞,每一次的消化都是对这个细胞存活与否,状态好与不好最至关重要的考验。
很多同学都遇到过这个问题,自己养的细胞开始的几代长的还挺好的,可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了,状态越来越差劲了。
对于这个问题,可以非常肯定地说,你的消化环节出问题了。
你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。
所以,越长越差。
在消化的过程中,你加入胰酶后,所有细胞都在被胰酶消化着,但是我们忽视了一个问题就是,细胞的生长状态是不一样的,每一个细胞的贴壁情况也是不一样的,有的贴壁牢固,有的贴壁没有那么牢固的,所以,让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的,他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。
呵呵。
大家争取争取做到因材施教,比如试试下面的“四步消化法”。
(以难消化细胞为例)
具体操作
1).首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍(目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉)。
2).然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。
再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。
(你可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。
)3).吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。
消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。
用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。
(也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比。
)
4).然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。
当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,呵呵。
继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。
悬液传入新瓶培养(根据实际情况把握)。
6关于换液传代时候洗瓶的问题
这个没有经过大规模验证。
对于用DMEM培养基培养的细胞,你在洗的时候如果是用无血清1640去洗细胞在随即后的几次中会比用DMEM洗的长的要好。
同样,用1640培养的也有这个现象。
如果不嫌麻烦的话,可以用PBS来洗,洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的,对于有些细胞会更胜一筹。
洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清,防止它对胰酶的影响。
这样能够保证胰酶的消化能力优先,是很关键的一点。