实验室常用缓冲液配置方案范文
- 格式:docx
- 大小:38.17 KB
- 文档页数:5
理化实验配制方案在进行理化实验时,不同的实验要求使用不同的试剂和药品,并且需要按照一定的比例和配制方法进行混合。
在进行实验前,正确的配制方案对于实验结果的准确性和可重现性非常重要。
本文将针对常见的理化实验,介绍一些常用的试剂配制方案。
pH缓冲溶液Phosphate Buffered Saline (PBS) 缓冲液PBS缓冲液是一种理化实验中常用的缓冲液,可以用于细胞培养、免疫组化等实验。
其配制方法如下:•向1L去离子水中加入8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4。
调节pH值至7.4。
•用0.22μm的无菌滤膜过滤,分装到无菌的50mL离心管中。
•灭菌,储存在4℃。
Tris-HCl缓冲液Tris-HCl缓冲液广泛用于生化实验和分子生物学实验中,其配制方法如下:•向800mL去离子水中加入Tris 11.1g, 调节pH值至所需值。
•加入到1L容量瓶中,用去离子水调至1L。
酶解液RIPA缓冲液RIPA缓冲液是广泛用于蛋白提取和酶解实验的缓冲液,其配制方法如下:•向1L去离子水中加入150mM NaCl、1% NP-40、0.5% sodium deoxycholate、0.1% SDS、50mM Tris-Cl pH 8.0、1mM EDTA。
•加入到1L容量瓶中,用去离子水调至1L。
Tris-HCl酶解液Tris-HCl酶解液是生化实验和分子生物学实验中常用的酶解液,其配制方法如下:•向1L去离子水中加入10mM Tris-HCl(pH8.2)、1mM EDTA、1% Triton X-100、0.1% SDS、50μg/ml Proteinase K。
•加入到1L容量瓶中,用去离子水调至1L。
其他试剂甲醛PBS固定液甲醛PBS固定液是常用的细胞固定液,可用于细胞培养、免疫组化等实验。
其配制方法如下:•向10ml PBS中加入1 ml 37%甲醛。
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度:1 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
值。
4.将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量:1 L配制方法:2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度:1.5 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度:3M 醋酸钠配制量:100ml配制方法:1.称量40.8g NaAc·3H2O(或者24.6g无水NaAc)置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后,室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量:1 L配制方法:2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
PBS缓冲液配方不管是免疫组化,还是细胞培养中,常用到PBS缓冲液,下面是我们实验室的配方,供大家参考。
我们实验室的配方:A液:0.1mol/L磷酸二氢钾:磷酸二氢钾(KH2P04,MW136.09)1.36坨,加双蒸水至100ml。
B液:0.1mol/L磷酸氢二钠:酸酸氢二钠(Na2HPO4.2H2O, MW177.99)1.78g,加双蒸水至100ml。
或者酸酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O,MW358.14)3.588,加双蒸水至100ml。
pH ---- A液(ml) ---B 液(ml)5.60 --9.50 --0.255.91 --9.00 -- 1.006.24 --8.00 -- 2.006.47 --7.00 -- 3.006.64 -- 6.00 -- 4.006.81 -- 5.00 -- 5.006.98-- 4.00-- 6.007.17 -- 3.00 --7.007.38 ----- 2.00 ——8.007.73 -- 1.00 --9.008.04 --0.50 --9.50般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4・12H2O (磷酸氢二钠)NaH2PO4・2H2O (磷酸二氢钠)Nacl用于细胞培养的PBS需含有氯化钾称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4 和0.24g KH2PO4,溶于800ml 蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L 即可0.01MPBS缓冲液称取NaCl 8g,KCl 0.2g,Na2HPO4・12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g,M 于900ml双蒸水中,用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保存备用。
PBS是最普遍不过的实验室缓冲液,但其配方各异。
以下是我的总结:母液的配制:0.2M Na2HPO4:称取71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于1000ml 水0.2M NaH2PO4:称取31.2g NaH2PO4-2H2O,溶于1000ml 水各种浓度PB(pH=7.4)的配制:先配0.2M PB (pH=7.4 ,100ml) :取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4,81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4,即可。
各种缓冲液的配制方法缓冲液(Buffer)在生物化学和分子生物学实验中起到了至关重要的作用,它可以维持溶液的稳定性,调节pH值,同时还提供所需的离子环境。
这是一个关于不同类型缓冲液的配制方法的综合指南。
1. Tris缓冲液Tris缓冲液是实验室中最常用的缓冲液之一、以下是Tris缓冲液的配制方法:- 配制0.1 M Tris缓冲液(pH 7.4):a. 在100 mL去离子水中加入12.11 g Tris(Tris(hydroxymethyl)aminomethane)粉末。
b.用盖住容器的滤纸纸带覆盖容器,并将其放在磁力搅拌器上。
c.用盖住容器的锡纸覆盖容器,加热至溶解。
搅拌以加速溶解过程。
d.继续搅拌,使其冷却至室温。
e.使用0.1MHCl或0.1MNaOH调节pH值至7.4,直到所需的pH值稳定。
f.用去离子水稀释至总体积100mL。
2.PBS缓冲液PBS缓冲液是生物学实验中常用的缓冲液之一、以下是PBS缓冲液的配制方法:-配制10×PBS缓冲液:a.在1L去离子水中加入80gNaCl,2gKCl,14.4gNa2HPO4,2.4gKH2PO4b.使用10MNaOH或10MHCl调节pH值至7.4c.用去离子水稀释至总体积1L。
-配制1×PBS缓冲液:a.取10×PBS缓冲液100mL,用去离子水稀释至总体积1L。
3.TAE缓冲液TAE缓冲液常用于琼脂糖凝胶电泳。
以下是TAE缓冲液的配制方法:-配制50×TAE缓冲液:a. 在1 L去离子水中加入242 g Tris base,57.1 mL 0.5 M EDTA,100 mL冰醋酸。
b.用10MNaOH或10MHCl调节pH值至8.3c.用去离子水稀释至总体积1L。
-配制1×TAE缓冲液:a.取50×TAE缓冲液20mL,用去离子水稀释至总体积1L。
4. Tris-HCl缓冲液Tris-HCl缓冲液常用于DNA或RNA的酶切反应。
实验室常用缓冲液配置方案欧阳光明(2021.03.07)1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度:1 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量:1 L配制方法:1. 量取下列溶液,置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度:1.5 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度:3M醋酸钠配制量:100ml配制方法:1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后,室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量:1 L配制方法:1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中。
实验室常用缓冲液配置方案1×TE Buffer组成浓度:10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0配制量:500ml配制方法:量取下列溶液于500ml烧杯中1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml0.5M EDTA PH=8.0 1ml向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合;将溶液定容到500ml 后,高温高压灭菌;室温保存.1)1 M Tris-HCl (pH 8.0)组份浓度:1 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 加入42ml浓盐酸调节所需要的pH值。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
15)0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度:0.5 M EDTA配制量:1 L配制方法:称取186.1 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值至8.0(约20 g NaOH)。
注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。
6. 室温保存。
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度:1 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量121.1 g Tris 置于1 L 烧杯中。
2. 加入约800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH 值。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH 值,因为Tris 溶液的pH 值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH 值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量:1 L配制方法:3. 将溶液定容至1 L 后,高温高压灭菌。
典型实验室常用缓冲液配置方案嗨,各位实验猿们,今天我来和大家分享一下实验室里那些常用的缓冲液配置方案。
别看这些缓冲液看似简单,但它们可是实验过程中的灵魂,少了它们,实验效果可能就会大打折扣。
好了,废话不多说,咱们直接进入正题。
来说说磷酸盐缓冲液(PBS),这可是实验室最常用的缓冲液之一。
它的配置方案如下:1.准备磷酸二氢钠(NaH2PO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)、氯化钠(NaCl)和蒸馏水。
3.将NaH2PO4和Na2HPO4溶解于蒸馏水中,搅拌均匀。
4.加入NaCl,继续搅拌至完全溶解。
5.用蒸馏水定容至1000ml。
6.用pH计调整溶液至7.4。
是Tris缓冲液,这货也是实验室的常客,尤其在蛋白质纯化过程中,它的作用可是大大的。
1.准备Tris碱(C4H11NO3)、盐酸(HCl)和蒸馏水。
3.将Tris碱溶解于蒸馏水中,搅拌均匀。
4.加入适量的HCl,调整pH至所需值。
5.用蒸馏水定容至1000ml。
6.标记好pH值,方便后续使用。
再来说说HEPES缓冲液,这可是细胞培养的好帮手。
1.准备HEPES(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸)、NaOH和蒸馏水。
3.将HEPES溶解于蒸馏水中,搅拌均匀。
4.加入NaOH,调整pH至所需值。
5.用蒸馏水定容至1000ml。
6.标记好pH值,方便后续使用。
当然,实验室里还有很多其他缓冲液,比如乙酸缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液等,它们的配置方法也大同小异。
下面我简单介绍一下乙酸缓冲液的配置方法:1.准备乙酸(CH3COOH)和乙酸钠(CH3COONa)。
3.将乙酸和乙酸钠溶解于蒸馏水中,搅拌均匀。
4.用蒸馏水定容至1000ml。
5.标记好pH值,方便后续使用。
在配置缓冲液的过程中,有几个小贴士要注意:1.使用分析纯试剂,确保实验结果的准确性。
2.使用去离子水或蒸馏水,避免水中杂质影响缓冲液的稳定性。
3.配制过程中要搅拌均匀,避免出现沉淀或结晶。
常见缓冲溶液配制常见缓冲溶液配制实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度:1 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
PH值浓HCl7.4 约70ml7.6 约60ml8.0 约42ml4.将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量:1 L配制方法:1. 量取下列溶液,置于1 L 烧杯中。
1M Tris -HCl Buffer (PH7.4,7.6,8.0)100ml500mMEDTA(PH8.0)20m l 2. 向烧杯中加入约800 ml 的去离子水,均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L 后,高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 组份浓度:1.5 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量181.7 g Tris 置于1 L 烧杯中。
2. 加入约800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH 值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度:3M 醋酸钠配制量:100ml配制方法:1.称量40.8g NaAc·3H2O(或者24.6g无水NaAc)置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后,室温保存。
常用pH缓冲液配置方法及注意事项常见pH缓冲溶液的配制和pH值一、常见溶液的配制(一)溶液配制注意事项1.药品要有较好的质量试剂分为优级纯(保证试剂,Guaranteed reagent,G.R.)、分析试剂(Antalytical reagent,A.R.)化学纯(Chemical pure,C.P.)和实验试剂(Laboratory reagent,L.R.)等等。
工业用的化学试剂,杂质较多,只在个别情况下应用,如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2.药品称量要精确。
3.配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水,比电阻值在50万欧姆以上,pH在5.5~7.0之间才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此项要求,配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
4.配好后的溶液,应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质),以防杂菌生长。
(二)0.067(1/15)Mol/L磷酸缓冲液1.1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制:称取磷酸二氢钾(KH2PO4,A.R.)9.08g,用蒸馏水溶解后,倾入1000ml容量瓶内,再稀释至刻度(1000ml)。
2.1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制:称取无水磷酸氢二钠(Na2HPO4,A.R.)9.47g(或者Na2HPO4·2H2O 11.87g)用蒸馏水溶解后,放入1000ml容量瓶内,再加蒸馏水稀释至刻度(1000ml)。
3.按附表的比例,配制成不同pH值的缓冲溶液。
附表1 磷酸盐缓冲液配制法(单位:毫升)(三)0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。
Na2HPO4·12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L。
NaH2PO4·H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L。
实验室常用缓冲液配置方案范文
1)1MTri-HCl(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度:1MTri-HCl配制量:1L配制
方法:
1.称量121.1gTri置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水,充
分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
PH值7.47.68.0浓HCl约70ml约60ml约42ml4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tri溶液的pH值随
温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10某TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)
组份浓度:100mMTri-HCl,10mMEDTA配制量:1L配制方法:
1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTri-HClBuffer(PH7.4,7.6,8.0)
500mMEDTA(PH8.0)100ml20ml2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,均匀
混合。
3.将溶液定容至1L后,高温高压灭菌。
4.室温保存。
3)1.5MTri-HCl(pH8.8)组份浓度:1.5MTri-HCl配制量:1L配制方法:
1.称量181.7gTri置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水,充
分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调节pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tri溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3M醋酸钠(pH5.2)组份浓度:3M醋酸钠配制量:100ml配制方法:
1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后,室温保存。
5)PBSBuffer
组份浓度:137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量:1L配制方法:
1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。
NaClKClNa2HPO4KH2PO48g0.2g1.42g0.27g2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加浓盐酸将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
6)10M醋酸铵
组份浓度:10M醋酸铵配制量:100ml配制方法:
1.称量77.1g醋酸铵置于100~200ml烧杯中,加入约30ml的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100ml。
3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。
7)苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)配制方法:
1.说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)。
氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊
醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2.配制方法:将Tri-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)
混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
8)10%(W/V)SDS组份浓度:10%(W/V)SDS配制量:100ml配制方法:
1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中,加入约80ml的去
离子水,68℃加入溶解2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至
100ml后,室温保存。
9)2NNaOH组份浓度:2NNaOH配制量:100ml配制
方法:
1.量取80ml去离子水置于100~200ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程
中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。
3.待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100ml。
4.将
溶液转移至塑料容器中后,室温保存。
10)2.5NHCl组份浓度:2.5NHCl
配制量:100ml配制方法:
1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸(11.6N),均匀混合。
2.室温保存。
11)5MNaCl组份浓度:5MNaCl配制量:1L配制方法:
1.称取29
2.2gNaCl置于1L烧杯中,加入约800ml的去离子水后搅拌
溶解。
2.加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份。
3.高温高压灭
菌后,4℃保存。
11)20%(W/V)Glucoe组份浓度:20%(W/V)Glucoe配制量:100ml配制方法:
1.称取20gGlucoe置于100~200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水后,搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100ml。
3.高温高压灭菌后,4℃保存。
12)SolutionI(质粒提取用)
组份浓度:25mMTri-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucoe配制量:1L
配制方法:
1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTri-HCl(PH8.0)0.5MEDTA(PH8.0)20%Glucoe(1.11M)
dH2O25ml20ml45ml910ml2.高温高压灭菌后,4℃保存。
3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaeA(20mg/ml)。
13)SolutionII(质粒提取用)
组份浓度:200mMNaOH,1%(W/V)SDS配制量:500ml配制方法:
1.量取下列溶液,置于500ml烧杯中10%SDS50ml2NNaOH50ml
2.加灭菌水定容至500ml,充分混匀
3.室温保存,此溶液保存时间最好不要超过一个月注意:SDS易产生
气泡,不要剧烈搅拌
14)SolutionIII(质粒提取用)
组份浓度:3MKOAc,5MCH3COOH配制量:500ml配制方法:
1.称量下列试剂,置于500ml烧杯中。
KOAcCH3COOH147g57.5ml2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。
3.加去
离子水将溶液定容至500ml。
4.高温高压灭菌后,4℃保存。
15)
0.5MEDTA(pH8.0)组份浓度:0.5MEDTA配制量:1L配制方法:
称取186.1gNa2EDTA·2H2O,置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌。
3.用NaOH调节pH值至8.0(约20gNaOH)。
注意:pH 值至8.0时,EDTA才能完全溶解。
4.加去离子水将溶液定容至1L。
5.适量分成小份后,高温高压灭菌。
6.室温保存。
16)1MDTT组份浓度:
1MDTT配制量:20ml配制方法:
1.称取3.09gDTT,加入到50ml塑料离心管内。
2.加20ml的0.01MNaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22mm滤器过滤除菌。
3.适量分成小份后,-20℃保存。
17)10mMATP组份浓度:10mMATP配制量:20ml配制方法:
1.称取121mgNa2ATP·3H2O,加入到50ml塑料离心管内。
2.加20ml 的25mMTri-HCl(pH8.0),搅拌溶解。
3.适量分成小份后,-20℃保存。