PCR实验室标本管理、生物安全和防污染策略
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PCR 实验室防污染措施及应急处理方法污染,是 PCR 实验室出现实验假阳性、结果不可信、研发不可靠的重要推手,PCR 实验室应当将防污染作为日常管理、实验安排、清洁消毒、实验习惯的核心。
PCR 实验污染和细胞污染是有差别的,PCR 实验污染主要是核酸而不是细菌和其他入侵者。
因此所有的预防措施都会稍稍有所不同。
「易查不易察」,污染来的悄无声息,我们该如何应对。
今天给大家简单介绍一下 PCR 实验室的主要污染来源、实验中如何避免和减少污染的可能性及实验发生污染的应急处理方案。
PCR 实验室的污染来源1、样本间交叉污染收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢;不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖;移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌;不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散,相互交叉污染。
2、实验试剂污染主要是在 PCR 组分试剂加样过程中,由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。
加样过程中,因为 PCR 试剂对温度十分敏感,需要通过冰浴使得PCR 试剂和 PCR 板 / 管处于0℃,但这个过程也是充满了污染的风险的。
3、扩增产物污染大量拷贝的产物泄漏或扩增后的 PCR 反应管意外开盖,这是 PCR 反应中最主要最常见的污染问题。
因为 PCR 产物拷贝量大,远远高于 PCR 检测数个拷贝的极限,所以极微量的 PCR 产物污染,就可形成假阳性。
4、克隆质粒污染作为阳性质控品的克隆质粒外溢。
PCR 实验室的防污染方法按照实验室的安全工作制度或安全标准操作程序,所有操作符合《实验室生物安全通用要求》(GB19489-2008)。
1、严格执行各区功能划分试剂储存和准备区:贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备,以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
标本制备区:核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管。
对于涉及临床样本的操作,应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
生物安全实验室PCR实验室的建设要求(一)主体结构主体为彩钢板或铝合金型材。
室内所有阴角、阳角均采用铝合金50度内圆弧角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。
结构要求牢固,线条简明,美观大方,密封性好。
(二)分区与气流组织将PCR过程分成试剂准备、样本处理(核酸提取)、核酸扩增和产物分析四个独立的实验区,每个区域应严格分开、隔离。
整个PCR实验区域有一个整体缓冲走廊。
每个独立实验区与走廊间应设置缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和实验环境的污染。
在缓冲区和PCR扩增区可安装排风扇往外排风,在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
要注意防止实验环境对核酸制备区的影响,防止造成污染。
建议核酸提取工作在生物安全柜中进行,在样本处理区如涉及致病性病原微生物等感染性材料时,此区最好设计成负压,确保实验人员与环境安全。
(三)各区仪器设备的配置要求工作区域仪器设备配置标准:1.试剂储存和准备区(1)2℃-8℃和-15℃冰箱;(2)混匀器;(3)微量加样器(覆盖1-1000ul);(4)移动式紫外线灯(近工作台面);(5)消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯);(6)专用工作服和工作鞋;(7)专用办公用品。
2.标本制备区(1)2℃~8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱;(2)高速台式冷冻离心机;(3)混匀器;(4)水浴箱或加热模块;(5)微量加样器(覆盖1~1000ul);(6)移动式紫外线灯(近工作台面);(7)超净工作台;(8)消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯);(9)专用工作服和工作鞋;(10)专用办公用品,如需处理大分子DNA,应具有超声波水浴仪。
3.扩增反应混合物配制和扩增区(1)核酸扩增仪(PCR仪);(2)微量加样器(覆盖1~1000ul);(3)移动式紫外线灯(近工作台面);(4)消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯);(5)专用工作服和工作鞋;(6)专用办公用品。
保证实验室环境、工作人员及标本安全,使工作有序开展,防止发生生物安全事故。
2 范围适用于基因室工作人员3 内容3.1 实验室分四个区:试剂储存和准备区、标本制备区、核酸扩增区、产物分析区。
人员进入各区需遵守单一流向原则。
即:试剂储存和准备区标本制备区核酸扩增区产物分析区。
各区设备、物品有明确标识,严禁混用。
3.2 实验室人流,物流分开,实验用到的一次性消耗品储存在一区,每天实验前将所需的耗材通过传递窗传至其他各区。
3.3 基因室各区均设置有缓冲间,缓冲间的压力设置为+5Pa,实验区从一区到四区的压力依次为+10Pa,-10Pa,-15Pa,-20Pa。
3.4 实验室每个门均有互锁,防止缓冲间和实验区的门同时打开,从而出现压差为零,使得气流从污染区流向洁净区。
3.5 每个实验区配有温湿度计、固定紫外灯和移动紫外灯车。
3.6 PCR提取仪、扩增仪均配有UPS多功能稳压电源。
3.7 工作人员在操作过程中严格遵守实验室内务管理,严格执行操作程序。
3.8 实验室人员进入各工作区时须穿该区专用工作服,同时配备其它防护装备,如手套、口罩等。
3.9 严禁将各区的固定物品和工作服带离本区,以防扩增产物污染扩增前区域。
3.10 标本盖子的开闭及移液时需小心谨慎,防止液体溅出。
3.11 标本制备区配有生物安全柜,必须严格按规范操作,严防污染。
每次实验结束后或实验开始前,须用75%的酒精擦拭,并打开紫外灯消毒。
3.12 每日工作结束后,须用含氯消毒液擦拭工作台面及地面,再用清水擦拭,打开紫外消毒车及固定紫外灯消毒。
3.13 仪器设备按作业指导书要求使用维护。
可重复利用的实验耗材按《消毒标准操作规程》要求消毒。
3.14 生物污染物及医疗垃圾严格按《废弃物处理作业指导书》相关规定处理。
3.15 严格执行工作区域的封闭性与隔离性要求,进出人员限制、物品分区限制等。
4 支持文件4.1 CBJY-PCR-SAF-004 《消毒标准操作规程》4.2 CBJY-PCR-SAF-007 《废弃物处理作业指导书》。
检验科工作人员生物安全制度及防护措施范本生物安全是保障科研工作人员在处理生物材料时的安全和防护的重要措施。
为了防止与生物材料接触导致的安全事故和疾病传播,科研机构需要建立完善的生物安全制度及防护措施。
一、生物安全制度1. 实验室准入管理1.1 实验室准入申请:员工进入实验室前必须进行实验室准入申请和审批,确保员工具备相关的生物安全知识和技能,并严格按照规定操作。
1.2 实验室准入培训:员工入职后需要参加生物安全培训,学习相关的生物安全知识和操作技巧,并通过培训考核。
2. 生物材料管理2.1 生物材料的采购:实验材料必须通过正规渠道采购,购买前需检查相关质检证明和合格报告,并确认其无法传播疾病。
2.2 生物材料的标识:所有生物材料必须正确标识,并在实验室内外可见位置明确标注其危险性和操作注意事项。
2.3 生物材料的存储:实验材料必须根据其特性合理存放,确保不会发生泄露、爆炸等意外,并定期检查储存条件。
3. 实验操作管理3.1 实验室操作规程:建立相应的标准操作规程,明确生物材料的处理方式、操作步骤、装备使用等,并确保操作规程得到适当的宣传和培训。
3.2 实验室操作监督:实验室内必须有专人负责监督实验操作的规范执行,并定期对员工的实验操作进行检查和评估。
4. 废物处理管理4.1 临床废弃物处理:生物材料的废弃物必须按照规定进行正确的分类、收集和处理,并定期进行消毒。
4.2 包装和运输:对于具有感染性的废物,必须按照规定进行密封包装,并通过专人运输至指定的消毒处理场所。
二、生物安全防护措施1. 个人防护装备1.1 实验室服装:实验室工作人员必须佩戴规定的实验室服装,包括实验服、实验鞋等,并保持整洁,避免交叉感染的风险。
1.2 防护手套:在处理生物材料时必须佩戴且正确使用防护手套,手套更换频率也需按照相关要求进行。
2. 实验室环境控制2.1 实验室通风:实验室必须建立合理的通风系统,确保空气流通和充足,并按照规定定期维护和清洁。
2024年检验科生物安全防护管理制度摘要:随着科技的不断发展和人口的增长,生物安全变得越来越重要。
为了保护公众的健康和环境的安全,2024年检验科生物安全防护管理制度将成为一个关键的议题。
本文旨在探讨一些关键措施,以解决2024年检验科生物安全面临的挑战,并提出相关管理制度建议。
全文分为以下几个部分:引言、挑战与需求、管理制度建议等。
关键词:检验科、生物安全防护、管理制度、挑战、需求一、引言检验科是一个关键的领域,其工作涉及生物样本的收集、分析和处理。
然而,随着技术的进步,科学家们不断面临来自各种生物危害的压力。
这些压力来自病原体的繁殖、气候变化以及人为活动的不当处理等。
因此,确保检验科工作的生物安全防护管理制度成为至关重要的任务。
二、挑战与需求2024年,生物安全面临着一系列挑战和需求。
首先,病原体的繁殖和传播速度越来越快,对人类健康和环境的影响越来越大。
其次,气候变化导致了自然界生物的适应性和迁移行为的变化,增加了生物安全的风险。
此外,人类不当处理或泄露生物物质的事件频发,需要建立严格的管理制度来防止类似事件的发生。
在面临这些挑战和需求的基础上,我们提出以下管理制度建议:三、管理制度建议1.建立完善的生物安全管理框架建立一个完善的生物安全管理框架,包括法律、政策和标准,并确保其与国际惯例保持一致。
此外,制定生物安全的工作指南和操作规程,提供精确的指导,确保各个环节的生物安全。
2.加强生物安全培训和教育提供全面的生物安全培训和教育,使所有从事检验科工作的人员都掌握基本的生物安全知识和技能。
培训内容应包括生物危害的辨识、个人防护装备的正确使用、样本的收集和处理方法等。
3.加强生物安全设施建设和管理投资建设高标准的生物安全实验室和设施,确保其符合生物安全要求和标准。
同时,制定相应的设施和设备维护规程,定期检查设备的运行情况,及时修复和更新设备。
4.加强生物安全风险评估和监测建立生物安全风险评估和监测体系,定期对检验科工作过程中的生物安全风险进行评估和监测。
PCR实验室污染的原因分析、处理及整改措施2022年5月29日中午12:30开始PCR实验室假阳性频率增高,考虑可能出现实验室污染,检测工作立即停止,首先,查找污染源和明确污染范围。
经排查本次实验室污染的主要来源可能是部分配置好的反应体系放置时间过久、实验室二区出现扩增产物的污染。
一、发生污染的原因分析。
1.核酸检测工作频次过高,导致每批样本检测之间没有足够时间消毒。
2、核酸检测人员短缺,检测人员需要多次往返二区、三区,极容易导致扩增产物的污染。
二、实验室污染的处理:1.生物安全柜的操作台消毒处理:使用5000mg∕L含氯消毒剂进行喷洒消毒。
消毒液需要现用现配,24小时内使用。
2.实验室台面、地面、物体表面等的消毒处理:立即使用润湿有5000mg∕L含氯消毒剂的毛巾擦拭、消毒。
清洁、消毒通风系统滤网。
采用房间固定和可移动紫外灯进行紫外照射2小时以上。
3.清理污染物时:严格遵循活病毒生物安全操作要求,采用压力蒸汽灭菌处理,并进行实验室换气等,防止次生危害。
整改措施:1.严格实验室功能分区确保实验室人、物及空气单向流动核酸检测实验室的人、物及空气流向按照试剂储存和准备区一样本制备区T扩增和产物分析区,防止扩增产物随人流、物流及空气进入扩增前的区域。
空气流向应按照从试剂储存和准备区一样本制备区一扩增区一扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。
2、力口强实验室检测安全管理(1)基本要求核酸检测应当在生物安全二级实验室进行,并应在生物安全风险评估的基础上,采取适当的个体防护措施,包括手套、口罩和隔离衣等。
开展新冠病毒核酸检测的实验室应当制定实验室生物安全相关程序文件及实验室生物安全操作失误或意外的处理操作程序,并有记录。
(2)实验室前安全要求应使用2000mg∕L含氯消毒剂或75%酒精进行桌面、台面及地面消毒。
消毒液需每天新鲜配制,不超过24小时。
转运至实验室的标本转运桶应在生物安全柜内开启。
转运桶开启后,使用2000mg∕L含氯消毒剂或75%酒精对转运桶内壁和标本采集密封袋进行喷洒消毒。
检验科的生物防护和安全应对措施1. 引言检验科作为医疗机构的重要组成部分,涉及各种生物样本的检测和分析。
生物防护和安全应对措施是确保检验科工作人员、患者及环境安全的关键。
本文档旨在提供一份全面的生物防护和安全应对措施指南。
2. 生物防护措施2.1 个人防护装备(PPE)- 实验室工作人员应穿戴适当的个人防护装备,包括防护服、口罩、手套、护目镜等。
- 根据实验操作的风险等级,选择合适的PPE。
2.2 生物安全柜的使用- 所有可能产生气溶胶的操作应在生物安全柜中进行。
- 生物安全柜应定期进行维护和检测,确保其正常运行。
2.3 样本处理和废物管理- 严格按照样本处理规程进行操作,避免直接接触生物样本。
- 生物废物应按照医院规定的程序进行分类、包装和处理。
3. 安全应对措施3.1 紧急事故响应- 制定紧急事故响应计划,包括事故的报警、人员疏散、事故处理等环节。
- 定期进行紧急事故演练,提高工作人员的应对能力。
3.2 培训和教育- 定期为实验室工作人员提供生物安全和防护方面的培训。
- 新员工入职前必须接受生物安全培训,并通过考核。
3.3 安全监测和评估- 定期对实验室生物安全和防护措施进行监测和评估。
- 及时发现潜在风险,并采取相应的改进措施。
4. 总结生物防护和安全应对措施是检验科工作中不可或缺的一环。
通过严格执行生物防护措施和安全应对措施,可以有效降低工作人员和患者的感染风险,确保实验室的正常运行。
实验室管理人员和工作人员应共同承担责任,共同维护实验室生物安全。
---以上是关于检验科的生物防护和安全应对措施的详细文档。
请根据实际情况进行调整和完善,以确保实验室生物安全。
如有其他需求,请随时告知。