酪蛋白参数

一、实验目的

1、掌握一种提取蛋白的方法。

2、掌握一种检测牛乳质量的方法。

二、 实验原理

酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。

酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。

三、 仪器和试剂

仪器：温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。

试剂：

1. 95%乙醇、乙醚

2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L

3. 乙醇、乙醚混合液：乙醇∶乙醚=1∶1（体积比）

4. 市售牛乳

四、 实验步骤

1.酪蛋白等电点沉淀

将100ml牛乳放到500ml烧杯中，加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液，直到pH达4.6左右，用pH试纸或酸度计调试。将上述悬浮液冷却至室温，然后放置5min，用细布过滤，收集沉淀。

2.除脂类杂质

将上述沉淀用少量水洗数次，然后悬浮于30ml95%的乙醇中。将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液，再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次，最后再用一米洗涤沉淀两次，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移去，在表面皿上摊开以除去乙醚，干燥后得到的是酪蛋白纯品。准确称重后，计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量（g%），并与理论产量（3.5g%）相比较，求出实际获得百分率。

一、实验目的

酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待。在酶的提取和纯化过程中，自始至终都需要测定酶的活性，通过酶活性的测定以监测酶的去向。

酪蛋白的制备

【实验目的】

1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。

2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。

【实验原理】

牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。

【材料、试剂与器具】

（一）材料

新鲜牛奶

（一）试剂

1、95%乙醇 1 200mL

2、无水乙醚 1 200mL

3、0.2mol/L pH4.7醋酸——醋酸钠缓冲液 300ml

先配A液与B液

A液：0.2mol/L醋酸钠溶液 称NaAC·3H2O 54.44g，定容至2000ml。

B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优 纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。

取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。

4、乙醇——乙醚混合液

乙醇：乙醚=1 ：1（V/V）

（二）器具

1、离心机 2、抽滤装置

3、精密pH试纸或酸度计 4、 电炉

5、烧杯 6、温度计

【操作步骤】

（一）酪蛋白的粗提 100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。

将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000 r /min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。

（二）酪蛋白的纯化

1、用水洗涤沉淀 3次，离心10分钟（3 000r/min），弃去上清液。

酪蛋白水解物

一、中文名称：酪蛋白水解物

二、拉丁文名称/或英文名称：Lactium

三、主要成分：多肽

四、酪蛋白水解物（Lactium）的来源

酪蛋白水解物（Lactium）是以脱脂牛奶为原料，经过分离酪蛋白、水解、喷雾干燥等程序得到的一种酪蛋白水解产物。其典型化学成分为：蛋白质75%，脂肪1%，水分5%，灰分15%，乳糖1%。可溶解于水，无苦味，pH2-9时稳定，热稳定，可耐180℃高温50min。

酪蛋白水解后得到的αs1-Cn （f91-100），是一种含10个氨基酸的三维结构多肽，在Lactium中的典型含量为1.8%，其氨基酸序列为：Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Arg。

五、酪蛋白水解物（Lactium）生产工艺流程图和简述

1.

工艺流程图：

酪蛋白分离

碱 化

胰蛋白酶水解 脱脂牛奶

2. 工艺说明

1.）以脱脂牛奶为原料，沉淀分离酪蛋白

2.）使用氢氧化钠将其碱化到pH为7.5-8.5之间

3.）在40-55℃下用胰蛋白酶进行水解。得到的产物中，游离10肽在干物质中的含量最低为1.8%。

4.）用盐酸进行酸处理，将pH降到3.0-5.0

5.）在90℃下热处理1.5分钟

6.) 85℃进行巴氏杀菌、浓缩，此步骤为关键控制点

7.）喷雾干燥（进风温度180-200℃），得到粉末产品。

8.）过筛得到粒度在1mm以下的均匀粉末，其中游离10肽的含量最低为1.8%。此过程为关键控制点。 酸 化

热处理

巴氏杀菌

浓缩、喷雾干燥

过 筛

包 装 3. 拟公告的生产工艺简述：以脱脂牛奶为原料，经过酪蛋白分离、水解、浓缩、喷雾干燥等工艺制成。

六、酪蛋白水解物（Lactium）对酸奶的促进作用

酸奶具有促进肠道蠕动与消化和机体物质的代 谢，并具有提高人体免疫力、防衰老、抗肿瘤等作用。 酸奶中的大量乳酸菌及乳酸代谢产物能调节人体肠道

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1 中华人民共和国粮食行业标准《酪蛋白磷酸肽》编制说明

前言

酪蛋白磷酸肽(CPP)是以牛乳酪蛋白为原料，通过生物技术制得的具有生物活性的多肽，是一种功能性食品添加剂，可用于各种营养、保健食品中，能有效促进人体对钙、铁、锌等二价矿物营养素的吸收和利用。

酪蛋白磷酸肽是使用蛋白酶水解后的酪蛋白，经过精制、纯化制成，其核心结构为：—Ser（P）－Ser（P）－Ser（P）－Glu－Glu－（Ser：丝氨酸，Glu：谷氨酸，P：磷酸基）。这一结构中的磷酸丝氨酸残基（－Ser（P）－）成簇存在，在肠道PH弱碱性环境下带负电荷，可阻止消化酶的进一步作用，使CPP不会被进一步水解而在肠中稳定存在。国内研究发现，CPP中氮与磷的摩尔比值越小，CPP的肽链越短，磷酸基的密度越大，则CPP纯度越高，促进钙的吸收和利用作用也就越强。

从我国民众的钙营养状况看，我国民众膳食组成以植物性食物为主，其中含有大量的影响钙、铁、锌吸收因子，如植酸、草酸、等，因此，中国人缺钙尤为严重。目前，我国从儿童到中老年人各年龄组的人群，普遍存在缺钙问题。这就使得国内补钙多年以来保持长盛不衰的现象，消费者的补钙意识已由“接受”转变为“自发”。除了钙以外，中国人最易缺乏的矿物质是铁和锌。CPP不仅可促进钙的吸收，对铁、锌的吸收利用也有良好的促进效果，这更使得CPP在营养强化食品和保健食品中的应用备受瞩目。因此开发添加CPP的营养食品和保健品，能真正达到有效补充人体缺乏的矿物质的目的，满足人们的营养需求，必能产生巨大的经济效益和社会效益。

在我国，酪蛋白磷酸肽的规模化生产技术已经成熟，产业规模也在逐步扩大，与之相配套的国家标准才刚刚发布。由于国家标准规定的指标比较宽泛，为了能把握行业规模化发展方向，有效规范和监管酪蛋白磷酸肽产品市场，切实提升该类产品质量水平，推动酪蛋白磷酸肽进入健康发展的轨道，制定能反映本行业整体水平，又符合行业发展规律的酪蛋白磷酸肽行业标准势在必行。