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water高效液相色谱仪的使用说明

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转载：《分析测试百科网》Waters 600型高效液相色谱仪操作规程

一．开机前准备

1．根据需要选择合适色谱柱。

2．在容器中放入已过滤脱气好的流动相，把吸滤过滤头放入容器中。

二．开机

1．打开所需仪器的电源开关，打开氦气阀门。

2．等各仪器自检通过后，开微机进入Windows NT，双击millog.exe，进入millennium 32工作站。

三．编辑仪器方法

1．选择所需Project，run sample上击右键，选择所需仪器，联机。

2．点击instrument method 的edit，设置好各仪器参数。

3．保存所编缉的方法。

四．样品分析与采集

1．点击set up，建立方法。

2．等待色谱柱、系统平衡，基线稳定后，设置好样品信息，点击Start，即开始样分析与数据采集。

五．报告输出

1． 在millennium 32界面点击Brown Project。

2． 选择所需Project，选择所要处理的数据文件。

3． 选择所要选用的报告格式，输出报告。

六．关机

1．冲洗色谱柱，排出流路中可能有的缓冲液，并用双蒸水冲洗泵的柱塞杆。

2．泵停止，关闭氦气阀门。

3．退出工作站，关闭仪器电源。

4. 在记录本上记录使用情况。

注意事项：

1. 所有的溶剂均选用HPLC级试剂。

2. 水相流动相需经常更换，防止长菌变质；如果流动相有缓冲盐，必须用5%甲醇或5%乙腈过渡冲洗。

3. 样品均用0.45um的滤膜过滤后才可进样。

4. 色谱柱用合适的溶剂保存，若为C18柱推荐用甲醇保存。

一、问：用HPLC液相色谱仪进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?

答：关于漂移问题：

1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定

2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡

关于快速变化问题

1、流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定

2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

3、液相色谱仪流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合

二、问：色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题?

答：1、柱效要高

2、热稳定性好

3、化学惰性强

具体选择应注意

1、柱极性。根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析

2、柱子内径。内径大小决定柱容量

3、液膜厚度。分析样品温度一不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄

4、柱长度。柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长

度

5、外涂层(柱体)的选择

6、另外还有仪器型号、分析对象等因素

三、问：液相色谱仪中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?

答：1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 四、问：从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏?

答：1、分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好。

2、理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定

3、柱子的极性。热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，具体表现为保留指数I值没有大的变化。

4、噪声。热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加.

5、柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。质量好的毛细管柱子高温后，去活层

不应该变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。

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Waters 600型高效液相色谱仪标准操作规程

Waters 600型高效液相色谱仪标准操作规程

Waters 600型高效液相色谱仪

Waters 600型高效液相色谱仪标准操作规程

1、仪器组成及电源

1.1仪器组成 本仪器由Waters 600泵、Waters 486紫外检测器和Waters PC800工作站组成，三个部件均有电源插头。

1.2接通电源 将电源插头分别插入插座后，依次打开泵、检测器、PC800工作站的电源开关。

2、Waters 600泵操作

2.1 常规准备工作 包括：开通电源，溶剂脱气，泵头及溶剂管路除空气泡及泵的起动。

2.1.1 接通系统电源，控制器开通后进行自检，数秒后通过，接受操作指令。

2.1.2 溶剂瓶脱气 检查氦气瓶压力调节器，设定压力在50～90psi之间。按[SETUPI调节后，按ISOCRATIC 或DIRECT，在需通气区打入初始值100ml／min，用ENTER输入，通气满15分钟，再按流动相情况分别将氦气流量设定在10～30ml／min。

2.1.3 系统中气泡排除 泵启动时，调节所需通道流速为lml／min，该通道如A调节为100％。开启溶剂排放阀用针筒抽取10ml溶剂，关闭排放阀。柱前气泡如不能排除，则管路在不与色谱柱连接情况下，提高流速至9ml／min，数分钟后将流速减至lml／min。

2.2 等度(1socratic)操作 用梯度控制器上ISOCRATIC调出等度操作屏幕。该屏幕可以控制：(1)溶剂流量设定；送入流动相溶剂组成；设定脱气时氦流量；设定柱加热单元的温度，控制外接继电器开关及控制泵操作。

等度操作时需设定溶剂流量及流动相溶剂组成。后者通过光标选择在每个流动相中打入其百分比组成，各组成之和应为100％，设定后用ENTER输入。

2.3 梯度洗脱操作 梯度洗脱需要编制梯度表和程序事件

( Program event )表后，在OPERATE GRADIENT屏幕时运行。

(完整)Waters高效液相色谱仪标准操作规程

(完整)Waters高效液相色谱仪标准操作规程

1. 目 的

描 述 Waters 高 效 液 相 色 谱 仪 标 准 操 作 规 程 。

2. 适 用 范 围

化 验 室

3. 责 任 者

化 验 员 应 严 格 遵 照 该 操 作 规 程 , QC 主 管 负 责 监 督 本 规 程 的 实 施 。

4. 定 义

HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高 效 液 相 色 谱 仪 。

5. 安 全 注 意 事 项

5.1 有 机 溶 媒 有 害 健 康 ， 各 溶 剂 瓶 口 应 封 严 。

5.2 注 意 检 查 废 液 桶 中 废 液 应 避 光 ， 防 止 废 液 桶 满 外 溢 。

6. 规 程

6.1. Waters HPLC的 组 成 ： 贮 液 器 输 液 泵 自 动 进 样 器 分 离 柱 (柱 温 箱 )

紫 外 检 测 器 控 制 及 数 据 处 理 系 统 (Millennium 32化 学 工 作 站 )。

6.2. HPLC系 统 的 打 开 及 关 闭 顺 序

6.2.1 打 开 顺 序

• 对 于 分 体 式 ： 请 按 泵 、 进 样 器 、 柱 温 箱 、 检 测 器 的 顺

序 打 开 开 关 ， 待 各 部 分 分 别 显 示 初 始 化 完 毕 后 ， 最 后

打 开 Millennium 32化 学 工 作 站 。

泵 与 色 谱 工 作 站 的 连 接：对 于 510 泵，因 为 此 泵 与 色 谱 工 作 站 是

单 向 联 系 ， 如 要 使 泵 在 Remote 状 态 下 由 工 作 站 控 制 ， 首 先 要 在 泵

的 键 盘 上 按 Menu 键 ， 待 显 示 屏 切 换 至 Mode 状 态 下 ， 其 状 态 是

Loca ，按 Edit/Enter 键 ，在 Local 的 L 前 有 闪 动 的 光 标 显 示，按 键，

waters超高效液相色谱仪操作步骤

waters超高效液相色谱仪操作步骤

第一部分：仪器准备

1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。

2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。

3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。

第二部分：样品准备

1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。

2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。

第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤

1. 开始操作前，先进行系统平衡。具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。

2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。

3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。

4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。

5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。

第四部分：数据处理和分析 1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。

2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。

3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。

第五部分：实验安全及注意事项

1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。

2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。

3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。

通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。第六部分：精密控制与调试

1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。

Waters高效液相色谱系统操作规程6

Waters高效液相色谱系统操作规程6

Waters高效液相色谱系统操作规程

1. 目的

规范Waters高效液相色谱系统的使用和维护。

2. 范围

本规程适用于Waters高效液相色谱系统的使用和维护。

3. 职责

质检室仪器分析员负责Waters高效液相色谱系统的日常使用和维护。

4. 系统组成

本系统由Waters 600E多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters在线脱气机、Rheodyne

7725i手动进样阀、Waters 2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成，另外还包括打印机、UPS和通风柜等辅助设备。

5. 程序

5.1. 准备

5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。

5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

5.2. 开机和泵操作

5.2.1. 开机

5.2.1.1. 接通UPS的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。

5.2.1.2. 打开Millennium32软件，按「Login...」，输入用户名和密码，按「OK」注册进入系统主界面。在Project档内选择所需的项目，右击『Run Samples』图标，选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet窗口。

5.2.2. 更换溶剂

5.2.2.1. 打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；

5.2.2.2. 将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；

5.2.2.3. 按［Direct］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min（梯度配比阀在0ml/min时不工作）；