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肝纤维化实验研究进展作者：段宏凯来源：《中国医药科学》2013年第03期[摘要] 肝脏纤维化是由多种原因引起的以肝内结缔组织的异常增生为病理过程的慢性肝损害，是慢性肝病发展到肝硬化的必经过程。
肝纤维化的进展常为慢性隐匿性的，早期尚有逆转为正常的可能，晚期则为非可逆性的。
因此，从实践诊断的角度找出肝纤维化的标志物，帮助临床早期发现肝纤维化或肝硬化并及时治疗，十分重要。
[关键词] 慢性肝病；肝纤维化；肝硬化；胶原；实验诊断[中图分类号] R575.1 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）03-病毒性肝炎是我国最常见的疾病之一，常常因其早期症状不明显而失去治疗机会，进而转变成慢性肝炎，近年来慢性酒精性肝病及脂肪肝发病率不断增高，以及血吸虫性肝病，各种不同病因引起的慢性肝脏疾病，如得不到及时有效的诊断治疗，都有发展为肝纤维化的可能[1]。
肝纤维化已经成为了我国的常见病、多发病[2]。
临床上，病理检查采用肝脏穿刺具有局限性，而采用血清学指标来监测肝纤维化的发展变化过程和判断抗纤维化的疗效具有一定的临床应用价值，尤其是几项理想的肝纤维化血清指标和动态测定联合使用能更有助于判断纤维增生和纤维降解的相对强度[3-4]。
本研究主要介绍几种近年来研究较多的肝纤维化血清学指标。
1 肝纤维化常用的血清学指标。
1.1 胶原或胶原末端多肽目前，已知人体肝脏中存在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅺ、ⅩⅢ等8种胶原蛋白，其中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型是参与肝纤维化的主要胶原蛋白1.1.1 血清Ⅰ型胶原及Ⅰ型前胶原羧基端肽肝脏中Ⅰ型胶原含量较多，肝纤维化和肝硬化晚期时其含量明显升高，其血清中含量与肝纤维化程度有较高的相关性，在各种慢性活动性肝病中其含量升高，急性肝炎时其含量不升高，但却与肝脏炎症指数无相关性。
RIA法测定，正常人1.1.2 血清Ⅲ型前胶原氨基端肽（procollagen-Ⅲ-peptide，PⅢP） PⅢP是Ⅲ型前胶原分泌到细胞外后被肽酶切下的N端后形成胶原分子，相互交联成微纤维，是研究的最多的肝纤维化血清学指标。
肝纤维化的诊断和评估技术研究进展#柯 柳刘志娟李俩余东明 温小凤* *袁淑芳何唐艳张月圆 麻芝英 （柳少H 市人民医院感染性疾病科，广西柳州市545006）▲基金项目：广西区卫健委自筹经费科研课题（编号:Z20190029）*通信作者【提要】肝纤维化及肝硬化是慢性肝病最重要的病理特征，早期诊断对控制肝病的病程进展、治疗及预后具有重要的意义。
本文对肝组织病理学检查,血液生物化学指标检测，超声、CT 、MRI 检查及超声弹性成像等技术在评估肝纤维化中的应用情况进行综述。
【关键词】 肝纤维化;肝硬化;诊断;评估;进展【中图分类号】R 575.2【文献标识码】A 【文章编号】1673-6575（2020）05-0660-05DOI ：10- 11864/j. Xsn. 1673.2020- 05- 32肝纤维化及肝硬化是慢性肝病最重要的病理特征，其诊断对肝病的病程进展、治疗及预后具有重要 的意义［1］。
早期肝纤维化的病情具有可逆性，尤其在 F2期之前疗效较好［2］。
及时、准确地诊断和评估肝纤维化的程度有利于明确开始治疗的时机，从而避免或延缓肝硬化的发生、发展，甚至逆转肝纤维化、肝硬 化⑶。
为此，本文对肝纤维化的诊断和评估技术研究进展作一综述。
1肝组织的病理学检查目前,肝活检组织病理学检查仍是肝纤维化诊断的“金标准”。
肝穿刺用于临床已有100余年的历史，随着穿刺器械和操作方法的不断改进，现在普遍采用的“一秒钟穿刺法”方便安全、成功率高,但是穿刺获得的肝组织标本很大程度地影响了病理诊断的可信度，应保证在镜下至少6个汇管区，尽量用粗针穿刺（最好用16G ），标本长度需在1- 0 cm 以上 （1.5~2.5cm ）。
当存在腹水、凝血功能异常或血小板计数< 60 x 109/L 时，经皮穿刺肝活检的风险较 大,此时可选择经颈静脉肝活检［4_5］ o肝组织病理学检查目前常用的有半定量而非绝对定量的Scheuer 、Metavio 以及Ishak 评分系统， Knodell 评分系统目前已较少应用。
肝脏纤维化检测方法及应用肝纤维化是各种慢性肝病损伤修复过程的共同后果，在肝细胞性功能障碍和门静脉性高压的发病机制中起直接作用。
同时，肝纤维化、甚至早期肝硬化具有可逆性已成为共识。
因此早期诊断和正确评估肝纤维化程度显得十分重要。
相对于肝穿刺，利用血清学指标评价肝纤维化具有无创、无风险、可多次测定降低偶然误差等优点。
目前血清学指标包括间接指标，如临床最常应用的血常规、肝功能以及凝血酶原时间（PT）等；直接指标，如细胞外基质（ECM）成分及其裂解物包括透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）和Ⅲ型前胶原氨基末端肽（PⅢNP）等。
综合多项有价值的无创指标构建诊断模型，可提高诊断准确度。
本节主要介绍直接指标的检测方法。
目前临床常用的直接指标检测法均是基于免疫学技术，包括单抗原抗体包被和酶标记抗体的三步法、双表位抗体酶免一步法、时间分辨和放免法等方法。
由于环境的污染和辐射损伤，放免法基本被淘汰；时间分辨方法需专门的仪器；酶免多步法由于采用单表位抗体包被与标记，敏感性和特异性与双抗原表位抗体的一步法没有优势，并且操作步骤复杂，故本文只介绍酶免一步法。
一、Ⅲ型前胶原氨基端肽（一）原理用纯化的Ⅲ型前胶原（procollagenⅢ，PCⅢ）制备抗血清，包被反应板，在加入样本后，样本中PCⅢ与抗血清结合，洗板后加入指示酶，通过与标准品比对显色深浅程度，测定血清中PCⅢ浓度。
（二）试剂组成PCⅢ包被板；PCⅢ标准品（2000ng/ml）及其稀释液；PCⅢ酶结合物；洗涤缓冲液10ml，使用前用蒸馏水20倍稀释；底物3，3′，5，5′-四甲基联苯胺（TMB）缓冲液；反应终止液。
（三）操作步骤1.试剂准备按样本数量需求，提前半小时将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温使用。
2.标准品在酶标板孔中按A1～A8或A1～H1的顺序加入标准品稀释液100μl，取100μl标准品，按照酶标仪定量格式要求自高到低依次进行倍比稀释。
