输血科配制自备试剂的标准操作规程
- 格式:doc
- 大小:32.50 KB
- 文档页数:4
输血科配制自备试剂的标准操作规程
1、目的
本文件规定了输血科自备试剂的相关操作程序,以确保输血科试验的质量控制,使检验结果更准确。
2、适用范围
本文件适用于医院输血科ABO血型、RhD血型、盐水交叉配血、凝聚胺交叉配血、柱凝胶法血型鉴定及交叉配血,新生儿溶血筛查试验,抗人球蛋白试验等试验项目检验过程的质量控制管理。
3、职责
输血科技术人员负责本实验室所用自备试剂的配制与确认。
4、操作规程
4.1 0.1mol/L2-巯基乙醇(2-Me)的配制
①材料:2-Me,PH7.4PBS
②配制方法:称取2-Me80mg,加入PH7.4PBS 10ml,放4℃冰箱可以保存4周。
③适用范围:该试剂为硫氢化合物,能分裂19S的IgM抗体成为7S单位。
含IgM抗体的血清经2-Me溶液处理后,IgM抗体重链之间的二硫键被打开,不能再凝集盐水介质中的对应红细胞,用于含IgG和IgM混合抗体血清中IgG的检测;鉴定抗体的免疫球蛋白类别;消除被IgM抗体包被的红细胞的自身聚集。
4.2磷酸盐缓冲液(PBS)配制
①材料:KH2PO4(分析纯),Na2HPO4(分析纯),去离子蒸馏水。
②配制方法
1)溶液A:1/15mol/L KH2PO4溶液:取KH2PO49.08g(若试剂含结
晶水请计算后加入相应重量),加少量蒸馏水溶解后,移至1000ml容量瓶稀释至刻度,调PH至5.0。
2)溶液B:1/15mol/L Na2HPO4溶液:取Na2HPO49.47g(若试剂含
结晶水请计算后加入相应重量),加少量蒸馏水溶解后,移至1000ml容量瓶稀释至刻度,调PH至9.0。
3)取两种溶液以适当比例混合,配制符合要求的PH工作缓冲液,
血清学试验常用PBS PH如下表:
PH 溶液A(ml)溶液B(ml)
5.4 9
6.0 4.0
5.5 94.0
6.0
7.2 28.0 72.0
7.3 23.2 76.8
7.4 19.2 80.8
7.7 10.6 89.4
7.8 8.5 91.5
7.9 6.8 93.2
8.0 5.8 94.7
8.1 4.2 95.8
8.2 3.0 97.0
4)使用之前要检查工作液的PH,若不符合要求,加少量酸性溶
液A或碱性溶液B矫正。
③适用范围:广泛用于血型血清学试验、试剂稀释等。
4.3红细胞悬液的制备
①分别采取已知正常A、B、O三种血型的红细胞,以盐水洗涤3
次以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液(见表)。
红细胞悬液的配制
悬液浓度(%)压积红细胞(滴)盐水(滴)
2 5 10 20 1
1
1
1
2 ml(40)
0.8 ml(16)
0.4 ml(8)
0.2 ml(4)
②为了防止红细胞悬液敏感性不一致。
可随机采取3个或3 个以上的健康成人血液,按A、B、O型分别混合后,按上述方法制备。
如用于不规则抗体筛查,则至少应选5人以上的红细胞混合。
③参照定型血清质控标准,进行质量检查合格,置4℃冰箱保存备用。
如抗原性降低或长菌、溶血则应弃之。
配置者应做好记录、登记。
④如将红细胞保存,应严格注意无菌技术,以ACD保存液按4:1抗凝。
可保存三周。
临时取出一部分,洗涤后配成所需浓度使用。
⑤2%的红细胞悬液一般用于滴定抗体效价,5%的红细胞悬液常用于血型鉴定和间接抗人球蛋白实验,10%的红细胞悬液用于测定抗体亲和力。
4.4生理盐水(NS)配制
①材料:NaCl(分析纯),去离子蒸馏水。
②配制方法:称取NaCl8.5g,加蒸馏水至1000ml,充分混匀。
③适用范围:普通血清学试验,稀释试剂,配制等渗溶液等。
四、相关文件。