实验:种子活力的快速测定——TTC法课件
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实验36 植物种子生命力的快速测定.TTC法一、原理TTC(2,3,5-三苯基氯化四氮唑)的氧化态是无色的,可被氢还原成不溶性的红色三苯甲月替(TTF)。
应用TTC的水溶液浸泡种子,使之渗入种胚的细胞内,如果种胚具有生命力,其中的脱氢酶就可以将T TC作为受氢体使之还原成为三苯甲月替而呈红色,如果种胚死亡便不能染色,种胚生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色,因此,可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生命力。
二、材料、仪器设备及试剂(一)材料:水稻、小麦、玉米、棉花、油菜等待测种子。
(二)仪器设备:1. 小烧杯;2. 刀片;3. 镊子;4. 温箱;(三)试剂:0.12%~0.5%TTC溶液(TTC可直接溶于水,溶于水后,呈中性,pH7±0.5,不宜久藏,应随用随配)。
三、实验步骤1. 将种子用温水(约30℃)浸泡2~6h,使种子充分吸胀。
2. 随机取种子100粒,水稻种子要去壳,豆类种子要去皮,然后沿种胚中央准确切开,取其一半备用。
3. 将准备好的种子浸于TT C试剂中,于恒温箱(30~35℃)中保温30m in。
4. 染色结束后要立即进行鉴定,因放久会褪色。
倒出TTC溶液,再用清水将种子冲洗1~2次,观察种胚被染色的情况,凡种胚全部或大部分被染成红色的即为具有生命力的种子。
种胚不被染色的为死种子,如果种胚中非关键性部位(如子叶的一部分)被染色,而胚根或胚芽的尖端不染色都属于不能正常发芽的种子Ⅱ.染料染色法原理有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性,有选择吸收外界物质的能力,一般染料不能进入细胞内,胚部不染色。
而丧失生命力的种子,其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收能力,染料可自由进入细胞内使胚部染色。
实验23种子生活力的快速测定种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。
它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据,与播种时的用种量直接有关。
测定种子生活力常采用发芽实验,即在适宜条件下,让种子吸水萌发,在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。
但是常规方法(直接发芽)测定种子生活力所需时间较长,特别是有时为了应急需要,没有足够的时间来测定发芽率,遇到休眠种子也无法知道。
而采用以下的化学方法,则能在较短时间内获得结果。
Ⅰ 氯化三苯基四氮唑法( TTC 法)一、原理凡有生命活力的种子胚部,在呼吸作用过程中都有氧化还原反应,在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲( TTF ),而且种子的生活力越强,代谢活动越旺盛,被染成红色的程度越深。
死亡的种子由于没有呼吸作用,因而不会将TTC 还原为红色。
种胚生活力衰退或部分丧失生活力,则染色较浅或局部被染色。
因此,可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。
二、实验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料玉米、小麦等种子。
(二)试剂0.5% TTC 溶液:称取 0.5 gTTC 放在烧杯中,加入少许 95% 乙醇使其溶解,然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。
溶液避光保存,若变红色,即不能再用。
(三)仪器设备恒温箱,培养皿,刀片,烧杯,镊子,天平。
三、实验步骤1. 浸种将待测种子在 30 ~35 ℃温水中浸种(大麦、小麦 6 小时,玉米 5 小时左右),以增强种胚的呼吸作用。
2. 显色取吸胀的种子 200 粒,用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半,将其中的一半置于 2 只培养皿中,每皿 100 个半粒,加入适量的 0.5% TTC 溶液,以覆盖种子为度。
然后置于30 ℃恒温箱中 1 h 。
观察结果,凡胚被染为红色的是活种子。
将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚,作同样染色处理,作为对照观察。
华南农业大学实验报告专业班次11农学1班组别201130010110 题目种子生活力的快速测定(TTC法)姓名梁志雄日期2012-11-21一、实验原理有活力种胚中的脱氢酶可以将TTC还原成不溶性的红色TTF,如果种胚死亡或种胚生活力衰退,则不能染色或染色较浅,因此,可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生活力二、实验材料与实验器材水稻种子、恒温箱、小白瓷碗、镊子、小烧杯三、实验步骤1、实验之前将种子放在微波炉里稍微加热,将水稻种子用温水(30~35℃)浸泡2~6h,使种子充分吸涨2、随机抽取30粒水稻种子,小心剥去种皮,千万不要伤害种胚,然后把处理好的种子置于小白瓷碗中,加入0.5%TTC溶液,以刚好浸没种子为度,与恒温箱中(30~35℃)中保温0.5-1h。
3、染色结束后要立即进行鉴定,因放置太久会褪色。
倒出TTC溶液,再用清水将种子清洗1~2次,观察种胚染色的情况。
凡种胚全部或大部分被染成红色即为具有生活力的种子,种胚不被染色的为死种子。
四、数据记录记录本实验测得染色种子25粒,无色种子5粒,其中染色的25粒种子中有19粒种子染色是比较深的,说明其生长活性物质多,生命力强。
根据以下公式种子活力(%)=有活力的种子数/种子总数×100%可以知道种子活力=25/30*100%=83.3%六、实验总结有生活力的种子能够进行呼吸代谢,在呼吸过程中的代谢物质跟TTC反应生成红色TTF,且代谢物质越多,颜色越深,代谢强度越大。
从本实验结果来看,种子生命力总体上时比较强的,且其中的19粒染色较深的那些则更高。
另外TTC法还可以运用于花粉活力的测定。