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胃癌组织中趋化因子受体 CXCR7的表达变化及意义辛琪;张娜;张传山;杨艳;刘炜【摘要】目的：观察趋化因子受体CXCR7在胃癌组织中的表达，并探讨其意义。
方法采用免疫组化和免疫荧光双染法检测160例胃癌标本（观察组）及30例正常胃组织（对照组）中的CXCR7。
结果观察组CXCR7阳性表达率为78．75％，对照组为6．67％，P＜0．01。
观察组CXCR7在间质纤维母细胞和血管内皮的阳性表达率分别为81．88％、88．75％，对照组分别为23．33％、33．33％，P均＜0．01。
观察组中，肿块直径≥5 cm、肠型胃癌、浸润深度达T3＋T4层、临床分期Ⅲ～Ⅳ期者CXCR7阳性表达率明显升高，P均＜0．05。
结论胃癌组织中CXCR7表达升高，并促进肿瘤微环境中间质纤维母细胞和血管内皮的生成，有助于判断病情与预后。
【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2014(000)040【总页数】3页(P68-70)【关键词】胃癌;CXCR7蛋白;趋化因子;微环境【作者】辛琪;张娜;张传山;杨艳;刘炜【作者单位】天津市第三中心医院天津市人工细胞重点实验室，天津300170;天津市大港医院;天津市第三中心医院天津市人工细胞重点实验室，天津300170;天津市大港医院;天津市大港医院【正文语种】中文【中图分类】R735.2胃癌是人类常见的消化道肿瘤之一，胃癌患者的预后与肿瘤的侵袭、转移密切相关。
远处转移已成为提高患者生存率的主要障碍，因此研究胃癌转移的分子机制，探寻能够治疗胃癌的潜在靶点具有重要的现实意义。
近来研究表明，基质细胞衍生因子1(SDF-1)及其受体在肿瘤的生长、侵袭、转移过程中发挥重要的调控作用，而SDF-1被认为是通过其惟一受体CXCR4起作用。
近来研究却发现，SDF-1还存在另一趋化因子受体CXCR7，并认为其对肿瘤进程也有潜在作用［1，2］，但目前对于 CXCR7在胃癌中的作用国内未见报道。
本研究利用免疫组化及免疫荧光染色法检测胃癌组织中CXCR7的阳性表达率及部位，并探讨其意义。
趋化因子受体7在胃癌组织中的表达及其临床意义的Meta分析杨婧;黄显斌;郝相勇;魏丽;景武堂;郭天康【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】2017(25)2【摘要】目的系统评价趋化因子受体7(chemokine factor receptor 7,CXCR7)在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法检索Pub Med、EMBASE、Web of Science、C N K I、C B M、维普和万方数据库关于C X C R7在胃癌中表达的病例对照研究.结果用Rev Man5.3对比值比(odds ratio,OR)及95%置信区间(confidence interval,CI)进行统计分析.结果共纳入4个病例对照研究,共425个病例,胃癌组320例,正常对照组105例.Meta分析结果显示:CXCR7在胃癌组织中呈高表达(OR=46.35,95%CI:19.99-107.43).并且CXCR7的表达与胃癌组织的浸润深度(OR=0.17,95%CI:0.05-0.58)、淋巴结转移(OR=0.23,95%C I:0.12-0.44)、临床分期(O R=0.29,95%CI:0.16-0.54)有关.至于CXCR7是否影响胃癌组织的分化,目前尚不能确定,需要更多的研究来明确、证实.结论胃癌组织中CXCR7的表达高于正常组织.C X C R7在胃癌组织中的表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移和临床分期有关,说明CXCR7在胃癌的发展、转移中发挥作用.【总页数】8页(P139-146)【关键词】趋化因子受体7;胃癌;病例对照研究;Meta分析【作者】杨婧;黄显斌;郝相勇;魏丽;景武堂;郭天康【作者单位】甘肃省人民医院普外一科【正文语种】中文【中图分类】R195.1【相关文献】1.胃癌组织中半乳糖凝集素1及趋化因子受体4的表达及其临床意义 [J], 吴晓清;尤小兰;汪正;唐小丽;张琪;金芝祥;王道荣2.胃癌组织中埃兹蛋白的表达及临床意义的Meta分析 [J], 张继旺;周丽3.胃癌组织中神经纤连蛋白2过表达临床意义的Meta分析 [J], 张玲玲; 曹辉; 许钟; 黄立敏; 杨赟翰; 白班俊4.趋化因子受体CCR7在胃癌组织中的表达及临床意义 [J], 史建华; 高军; 王玉琼; 汪志平5.Trop2在胃癌组织中的表达及其临床意义的Meta分析 [J], 俞程彬;毛伟征因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
㊀基金项目:江苏省基础研究计划(自然科学基金)－青年基金项目(Ｎｏ.ＢＫ２０１８０５７４)作者简介:刘业锋ꎬ男ꎬ副主任医师ꎬ研究方向:普外及全科医学的常见病多发病的诊治ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｌｉｕｙｆｊｒ＠１６３.ｃｏｍ通信作者:王星ꎬ男ꎬ博士ꎬ讲师ꎬ研究方向:代谢性疾病药理与中药药理ꎬTel:153****6608ꎬE －ｍａｉｌ:ｓｔａｒ１００００＠ｓｉｎａ.ｃｏｍＣｕｌｌｉｎ７在胃癌中的表达及相关性分析刘业锋１ꎬ李飞１ꎬ谢伟１ꎬ王星２(１.句容市人民医院普外科ꎬ江苏句容２１２４００ꎻ２.中国药科大学药学院药理系ꎬ江苏南京２１１１９８)摘要:目的㊀探讨泛素连接酶ＣＵＬ７蛋白抗体(Ｃｕｌｌｉｎ７)在胃癌中的表达及其对胃癌发生发展的作用ꎮ方法㊀自癌症基因组图谱(ＴＣＧＡ)数据库下载胃癌患者ｍＲＮＡ水平数据ꎬ并进行生存状况分析ꎻ并收集了６０例接受手术治疗胃癌患者的胃癌和癌旁组织样本ꎬ免疫组化分析Ｃｕｌｌｉｎ７的表达水平ꎬ并评估Ｃｕｌｌｉｎ７表达水平与胃癌患者临床病理特征之间的相关性ꎻ同时通过在人胃癌ＨＧＣ－２７细胞系中过表达或敲除Ｃｕｌｌｉｎ７基因ꎬ利用四甲基偶氮唑盐(ＭＴＴ)㊁集落形成㊁划痕㊁Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移和Ｍａｔｒｉｇｅｌ侵袭实验研究Ｃｕｌｌｉｎ７对胃癌细胞增殖㊁迁移和侵袭的影响ꎮ结果㊀Ｃｕｌｌｉｎ７在胃癌组织中高表达ꎬ且Ｃｕｌｌｉｎ７高表达的患者总生存期㊁首次进展和进展后生存时间更短ꎬ同时Ｃｕｌｌｉｎ７的表达与胃癌患者分化程度㊁神经侵袭㊁血管侵袭㊁浸润深度㊁淋巴结转移㊁临床分期相关ꎬ差异有统计学意义ꎬ而Ｃｕｌｌｉｎ７在胃癌细胞中的过表达促进细胞增殖㊁迁移和侵袭ꎬ而用短发夹ＲＮＡ(ｓｈＲＮＡ)敲低Ｃｕｌｌｉｎ７可以抑制胃癌细胞的增殖㊁迁移和侵袭ꎬ差异有统计学意义ꎮ结论㊀Ｃｕｌｌｉｎ７的上调可能是促进胃癌发生和发展的重要因素ꎬ可作为胃癌诊断㊁预后新的生物标志物以及新的治疗靶点ꎮ关键词:胃癌ꎻ泛素连接酶ＣＵＬ７蛋白抗体ꎻ预后ꎻ临床病理特征ꎻ增殖ꎻ迁移ꎻ侵袭中图分类号:Ｒ７３０.２３１㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２４)０４－０３２７－０６ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２４.０４.００３ＡｎａｌｙｓｉｓｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｏｆＣｕｌｌｉｎ７ｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒＬＩＵＹｅｆｅｎｇ１ꎬＬＩＦｅｉ１ꎬＸＩＥＷｅｉ１ꎬＷＡＮＧＸｉｎｇ２(１.ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙꎬＴｈｅＰｅｏｐｌｅᶄｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｕｒｏｎｇꎬＪｕｒｏｎｇ２１２４００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙꎬＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＮａｎｊｉｎｇ２１１１９８ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣｕｌｌｉｎ７ｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒａｎｄｉｔｓｒｏｌｅｉｎｔｈｅｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｄｅｖｅｌ￣ｏｐｍｅｎｔｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＤｏｗｎｌｏａｄｔｈｅｍＲＮＡｌｅｖｅｌｄａｔａｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓｆｒｏｍＴｈｅＣａｎｃｅｒＧｅｎｏｍｅＡｔ￣ｌａｓ(ＴＣＧＡ)ｄａｔａｂａｓｅꎬａｎｄａｎａｌｙｚｅｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｓｔａｔｕｓꎻＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＣｕｌｌｉｎ７ｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒａｎｄａｄｊａｃｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓｏｆ６０ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇｓｕｒｇｉｃａｌｔｒｅａｔｍｅｎｔｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＣｕｌｌｉｎ７ａｎｄｔｈｅｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄ.ＡｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅꎬｔｈｒｏｕｇｈｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｒｋｎｏｃｋｏｕｔｏｆＣｕｌｌｉｎ７ｇｅｎｅｉｎｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒＨＧＣ－２７ｃｅｌｌｌｉｎｅꎬｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＣｕｌｌｉｎ７ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙ３－(４ꎬ５－ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ－２－ｙｌ)－２ꎬ５－ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ(ＭＴＴ)ꎬｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎꎬｗｏｕｎｄｈｅａｌｉｎｇꎬＴｒａｎｓｗｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄＭａｔｒｉｇｅｌｉｎｖａｓｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｃｕｌｌｉｎ７ｉｓｈｉｇｈｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒꎬａｎｄｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣｕｌｌｉｎ７ｈａｖｅｓｈｏｒｔｅｒｏｖｅｒａｌｌｓｕｒｖｉｖａｌꎬａｎｄｓｈｏｒｔｅｒｆｉｒｓｔｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｏｓｔｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅｓ.ＡｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅꎬｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣｕｌｌｉｎ７ｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎꎬｎｅｒｖｅｉｎｖａｓｉｏｎꎬｖａｓｃｕｌａｒｉｎｖａｓｉｏｎꎬｄｅｐｔｈｏｆｉｎｖａｓｉｏｎꎬｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｓｔａｇｅｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ.ＴｈｅｅｃｔｏｐｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣｕｌｌｉｎ７ｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｓｉｇｎｉｆｉ￣ｃａｎｔｌｙｐｒｏｍｏｔｅｓｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎꎬｗｈｉｌｅｋｎｏｃｋｉｎｇｄｏｗｎＣｕｌｌｉｎ７ｗｉｔｈｓｈｏｒｔｈａｉｒｐｉｎＲＮＡ(ｓｈＲＮＡ)ｃａｎｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＵｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＣｕｌｌｉｎ７ｍａｙｂｅａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｆａｃｔｏｒｐｒｏｍｏｔｉｎｇｔｈｅｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒꎬａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄａｓａｎｅｗｂｉｏｍａｒｋｅｒｆｏｒｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓａｓｗｅｌｌａｓａｎｅｗｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＧａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒꎻＣｕｌｌｉｎ７ꎻＰｒｏｇｎｏｓｉｓꎻＣｌｉｎｉｃａｌｐａｔｈｏｌｏｇｙｆｅａｔｕｒｅｓꎻＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎻＭｉｇｒａｔｉｏｎꎻＩｎｖａｓｉｏｎ㊀㊀胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一ꎬ发病率逐年上升ꎬ其中东亚地区占一半ꎬ胃癌初期症状隐匿和诊断较晚是胃癌高死亡率的最主要原因[１]ꎮ目前ꎬ胃癌的最佳治疗方法是手术切除ꎬ辅以辅助化疗或放疗ꎮ然而ꎬ胃癌的复发率仍然很高ꎬ胃癌患者的预后较差ꎬ且胃癌晚期患者的临床疗效仍然较差ꎮ因此ꎬ胃癌发生㊁增殖和转移的内在分子机制值得进一步研究ꎬ以期改善临床治疗效果ꎮ泛素连接酶ＣＵＬ７蛋白抗体(Ｃｕｌｌｉｎ７)基因是Ｅ３连接酶家族的成员ꎬ参与蛋白质泛素化ꎬ以供进一步的蛋白酶体降解ꎬ控制正常发育㊁初级细胞过程等ꎬ且研究表明ꎬＣｕｌｌｉｎ７的过度表达与肿瘤的发生密切相关[２]ꎮＡｎ等[３]研究表明Ｃｕｌｌｉｎ７在肝癌组织中高表达ꎬ尤其是在转移性肝癌组织中ꎬ能显著促进肝癌细胞增殖㊁生长㊁迁移和侵袭ꎻ且Ｃｕｌｌｉｎ７可增强人类表皮生长因子受体２(ｈｕｍａｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ－２ꎬＨＥＲ２)阳性乳腺癌患者对曲妥珠单抗治疗的抵抗力[４]ꎮ同时Ｃｕｌｌｉｎ７在胶质瘤细胞中过表达ꎬ并通过激活核转录因子－κＢ(ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ－κＢꎬＮＦ－κＢ)促进肿瘤发生[５]ꎮ但是ꎬＣｕｌｌｉｎ７在胃癌中的作用尚不清楚ꎬ因此ꎬ我们研究了Ｃｕｌｌｉｎ７在胃癌中的表达及对胃癌发生发展的作用ꎬ为寻找胃癌新的治疗靶点提供依据ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀患者及临床样本㊁细胞和抗体㊀石蜡包埋组织切片取自２０２０年１月至２０２１年１２月在句容人民医院存档的胃癌样本和匹配的相邻正常组织标本(ｎ＝６０)ꎮ手术切除前无患者接受放疗或化疗ꎮ肿瘤组织标本取自肿瘤边界ꎬ从距离肿瘤边缘５ｃｍ以上的正常胃组织中取癌旁胃组织样本ꎬ并作为对照ꎬ所有标本的组织病理学诊断均由两名训练有素的病理学家确认ꎮ研究经医院伦理委员会审查批准(伦理委员会批准证书编号:２０１９０３２)ꎮ纳入标准:①所有患者均接受手术治疗ꎬ符合胃癌诊断标准[６]ꎻ②首次诊断并治疗胃癌ꎬ术前未接受新辅助放化疗等治疗措施ꎻ③既往无癌症病史ꎻ④无较严重的基础医学疾病等ꎻ⑤患者或其家属应了解自己的义务和权利ꎬ并签署同意书ꎮ排除标准:①伴有胃溃疡㊁慢性萎缩性胃炎㊁间质瘤等良性疾病的患者ꎻ②拒绝参加的ꎬ病理资料缺失或不完整ꎻ③合并其他系统性肿瘤ꎮ人胃癌细胞株ＨＧＣ－２７购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库ꎻＣｕｌｌｉｎ７㊁β－ａｃｔｉｎ及相应的二抗均购自Ａｂｃａｍ公司ꎻＲＰＭＩ１６４０培养基㊁胎牛血清购自Ｇｉｂｃｏ公司ꎻＴＲＩｚｏｌ试剂㊁ＦａｓｔＫｉｎｇ一步法反转录荧光定量试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司ꎻＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００购自ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎꎻＴｒ￣ａｎｓｗｅｌｌ小室购自Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司ꎻ四甲基偶氮唑盐[３－(４ꎬ５－ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ－２－ｙｌ)－２ꎬ５－ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅꎬＭＴＴ]试剂盒购自碧云天生物技术公司ꎮ１.２㊀免疫组织化学检测㊀手术切除标本用福尔马林固定ꎬ乙醇系列脱水ꎬ二甲苯处理ꎬ石蜡固定ꎮ４μｍ厚的组织切片脱蜡ꎬ再水化ꎬ用３％过氧化氢在甲醇中孵育ꎮ随后用ｐＨ８.０ＥＤＴＡ高温高压修复法回收抗原ꎬ１％ＢＳＡ孵育切片ꎮ载玻片用兔抗人多克隆抗体Ｃｕｌｌｉｎ７(１ʒ２５０稀释)在４ħ孵育过夜ꎬ阴性对照为正常非免疫兔血清ꎻ二抗室温孵育６０ｍｉｎ后ꎬ用链霉亲和素过氧化物酶复合物孵育载玻片ꎮ用３ꎬ３ᶄ－二氨基联苯胺进行过氧化物酶反应ꎬ用苏木精反染色ꎬ切片脱水ꎬ透明ꎬ盖上盖片ꎬ用中性胶密封ꎮ肿瘤和正常组织标本由两名独立的病理学家进行评估ꎬＣｕｌｌｉｎ７的表达主要集中在细胞核内ꎬ如果肿瘤组织或正常组织中检测到１０％以上的细胞表达ꎬ则认为切片呈阳性ꎮ１.３㊀Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ实验㊀用蛋白裂解缓冲液裂解细胞ꎬ离心提取ꎬ１０％十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳(ｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓꎬＳＤＳ－ＰＡＧＥ)分离蛋白ꎬ然后转移至聚偏二氟乙烯(ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅｆｌｕｏｒｉｄｅꎬＰＶＤＦ)膜ꎮ５％脱脂奶粉室温封闭２ｈꎬ一抗Ｃｕｌｌｉｎ７和β－ａｃｔｉｎ４ħ过夜孵育后ꎬ用含Ｔｗｅｅｎ－２０的磷酸盐缓冲液(ＰＢＳＴ)洗涤３次ꎮ二抗室温孵育２ｈꎬＰＢＳＴ洗涤３次后ꎬ通过增强的化学发光检测试剂检测结合的抗体ꎮ采用ＩｍａｇｅＪ软件用于分析条带的灰度值ꎮ１.４㊀质粒构建和稳定转染Ｃｕｌｌｉｎ７细胞系的建立㊀按照文献方法[３]ꎬＣｕｌｌｉｎ７过表达质粒ꎬＣｕｌｌｉｎ７－ｐｃＤ￣ＮＡ３.１(＋)由ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司合成ꎬＣｕｌｌｉｎ７特异性短发夹ＲＮＡ(ｓｈｏｒｔｈａｉｒｐｉｎＲＮＡꎬｓｈＲＮＡ)由上海吉凯基因医学科技股份有限公司设计合成ꎮ根据说明书ꎬ用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００分别将Ｃｕｌｌｉｎ７－空载质粒或Ｃｕｌｌｉｎ７－过表达质粒和空载ｓｈＲＮＡ或ｓｈＣｕｌ￣ｌｉｎ７分别导入ＨＧＣ－２７细胞ꎬ用嘌呤霉素筛选２周后ꎬ获得稳定的转染细胞系ꎮ１.５㊀实时荧光定量ＰＣＲ(ｑＲＴ－ＰＣＲ)㊀采用ＴＲＩｚｏｌ试剂提取ＲＮＡꎬ并应用ＦａｓｔＫｉｎｇ一步法反转录荧光定量试剂盒进行ｑＲＴ－ＰＣＲꎬβ－ａｃｔｉｎ作为加载对照ꎬ重复５次ꎬ引物序列如下:Ｃｕｌｌｉｎ７(正义引物:５ᶄ－ＧＡＧＡＡＣＴＣＣＧＣＴＡＣＡＧＧＧＡＡＴ－３ᶄꎬ反义引物:５ᶄ－ＣＣＣＡＧＣＡＴＣＴＴＧＴＧＧＣＡＧＴ－３ᶄ)ꎬβ－ａｃｔｉｎ(正义引物:５ᶄ－ＣＡＴＧＴＡＣＧＴＴＧＣＴＡＴＣＣＡＧＧＣ－３ᶄꎬ反义引物:５ᶄ－ＣＴＣＣＴＴＡＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡＴ－３ᶄ)ꎮ１.６㊀ＭＴＴ检测方法㊀转染２４㊁４８㊁７２ｈ后ꎬ加入２０μＬ的ＭＴＴꎬ３７ħ孵育４ｈꎬ去除旧培养基后ꎬ加入二甲基亚砜ꎬ３７ħ培养２０ｍｉｎꎮ测定波长为４９０ｎｍꎬ参比波长为６６０ｎｍꎬ每组重复５个孔ꎮ１.７㊀集落形成实验㊀细胞以每皿３００个细胞的密度接种在６ｃｍ长的培养皿中ꎮ培养３周后ꎬ将细胞固定ꎬ结晶紫染色ꎬ根据每个克隆内的细胞数计数可见集落ꎮ所有实验都重复５次ꎮ用形成的集落数除以所培养的细胞总数来确定细胞的培养效率ꎮ１.８㊀细胞划痕实验㊀将各组细胞以每孔１ˑ１０６个的密度接种在具有完全培养基的６孔板中ꎬ当细胞融合度达到９０％时ꎬ使用无菌塑料吸管尖端创建单个划痕ꎬ然后用ＰＢＳ轻轻清洗两次ꎬ更换完整的培养基ꎮ在０ｈ和２４ｈ用倒置显微镜拍摄细胞迁移情况并测量创面宽度ꎮ１.９㊀细胞侵袭和迁移实验㊀使用Ｍａｔｒｉｇｅｌ涂层的Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室进行细胞侵袭实验ꎬ该小室包含８μｍ孔的聚碳酸酯过滤器ꎬ且涂有５０μＬ１ｍｇ ｍＬ－１Ｍａ￣ｔｒｉｇｅｌ基质ꎮ将２００μＬ无血清培养基中的细胞(２ˑ１０５)接种于上室ꎬ而将６００μＬ含１０％胎牛血清的培养基加入下室ꎮ孵育２４ｈ后ꎬ将迁移到膜下表面的细胞固定在４％多聚甲醛中ꎬ并用０.５％结晶紫染色ꎮ对于每个膜ꎬ在１０倍放大倍数下计算５个随机视野ꎮ细胞迁移实验类似于侵袭实验ꎬ只是Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室未涂有Ｍａｔｒｉｇｅｌꎮ１.１０㊀统计分析㊀所有统计分析均使用ＳＰＳＳ２２.０软件进行ꎮ使用Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ方法分析生存曲线ꎬ使用Ｌｏｇｒａｎｋ检验比较生存差异ꎬ数据从ＴＣＧＡ数据集中下载ꎻ计量资料以平均值(ｍｅａｎ)ʃ标准差(ｓ)表示ꎬ采用ｔ检验进行差异比较ꎻ计数资料表示为例数和百分率(％)ꎬ采用χ２检验进行差异比较ꎻＰ<０.０５表示差异具有统计学意义ꎮ２㊀结果２.１㊀Ｃｕｌｌｉｎ７在胃癌组织中的表达并与不良预后的相关性㊀为了探讨Ｃｕｌｌｉｎ７在胃癌进展中的作用ꎬ首先研究了Ｃｕｌｌｉｎ７在胃癌组织中的表达ꎮ如表１所示ꎬ肿瘤组织中Ｃｕｌｌｉｎ７表达高于癌旁组织(Ｐ<０.００１)ꎬ并且通过分析ＴＣＧＡ数据集中胃癌组织和正常胃上皮组织的基因表达谱ꎬＣｕｌｌｉｎ７在胃癌组织中也上调(Ｐ<０.００１ꎬ见图１Ａ)ꎻ生存分析显示(数据从ＴＣＧＡ数据集下载)ꎬ与Ｃｕｌｌｉｎ７表达低的患者相比ꎬＣｕｌｌｉｎ７高表达的患者总生存期㊁首次进展和进展后生存时间更短(Ｐ<０.００１)(见图１Ｂ~Ｄ)ꎬ差异有统计学意义ꎮ这些结果表明ꎬＣｕｌｌｉｎ７在胃癌组织中上调并且与不良预后呈正相关ꎮ图１㊀Ｃｕｌｌｉｎ７在胃癌组织中的表达及与不良预后的相关性㊀注:与正常组织比较ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎮ表１㊀Ｃｕｌｌｉｎ７蛋白在胃癌组织中的表达组别例数阴性(％)阳性(％)胃癌组织６０２０４０癌旁组织６０４９１１χ２２８.６７９Ｐ０.０００２.２㊀Ｃｕｌｌｉｎ７表达上调与胃癌晚期临床病理特征的相关性㊀如表２所示ꎬＣｕｌｌｉｎ７的表达与分化程度(Ｐ<０.０５)㊁神经侵袭(Ｐ<０.００１)㊁血管侵袭(Ｐ<０.０５)㊁浸润深度(Ｐ<０.０１)㊁淋巴结转移(Ｐ<０.００１)㊁临床分期(Ｐ<０.０１)相关ꎬ但与性别㊁年龄㊁肿瘤位置㊁肿瘤大小无关ꎮ２.３㊀过表达Ｃｕｌｌｉｎ７基因与胃癌细胞体外增殖㊁迁移和侵袭能力的相关性㊀采用ＨＧＣ－２７细胞建立稳定过表达Ｃｕｌｌｉｎ７蛋白的细胞系ꎬ如图２Ａ和２Ｂ所示ꎬＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和ｑＲＴ－ＰＣＲ均证实了转染率ꎬ与空白组细胞相比ꎬ转染了Ｃｕｌｌｉｎ７表达载体的ＨＧＣ－２７细胞在蛋白(Ｐ<０.００１)和ｍＲＮＡ(Ｐ<０.００１)水平上均上调ꎮ且如图２Ｃ和２Ｄ所示ꎬ与空白组细胞相比ꎬ过表达Ｃｕｌｌｉｎ７的细胞增殖能力增加ꎬ４８ｈ(Ｐ<０.０１)和７２ｈ(Ｐ<０.００１)增殖能力高于空白组ꎬ且产生了更多更大的细胞集落(Ｐ<０.００１)ꎮ如图２Ｅ所示ꎬ孵育２４ｈ后ꎬ过表达Ｃｕｌｌｉｎ７的细胞横向移动能力高于空白组(Ｐ<０.０１)ꎬ且如图２Ｆ所示ꎬ与空白组细胞相比ꎬ过表达Ｃｕｌｌｉｎ７的细胞迁移(Ｐ<０.００１)和侵袭(Ｐ<０.００１)能力提高ꎮ２.４㊀敲减Ｃｕｌｌｉｎ７基因与胃癌细胞体外增殖㊁迁移和侵袭能力的相关性㊀采用ｓｈＲＮＡ在ＨＧＣ－２７细胞系中产生了稳定的Ｃｕｌｌｉｎ７基因敲减ꎬ如图３Ａ和３Ｂ所示ꎬＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和ｑＲＴ－ＰＣＲ均证实了转染率ꎬ与空白组细胞相比ꎬ转染了Ｃｕｌｌｉｎ７ｓｈＲＮＡ的ＨＧＣ－２７细胞在蛋白(Ｐ<０.００１)和ｍＲＮＡ(Ｐ<０.００１)水平上均降低ꎮ且如图３Ｃ和３Ｄ所示ꎬＣｕｌｌｉｎ７基因敲减抑制了ＨＧＣ－２７细胞的生长ꎬ敲减Ｃｕｌｌｉｎ７基因的细胞在４８ｈ(Ｐ<０.０５)和７２ｈ(Ｐ<０.０１)的增殖能力低于空白组ꎬ且集落数低于空白组(Ｐ<０.００１)ꎮ同时如图３Ｅ所示ꎬ孵育２４ｈ后ꎬ敲减Ｃｕｌｌｉｎ７基因的细胞横向移动能力低于空白组(Ｐ<０.０１)ꎬ且如图３Ｆ所示ꎬ与空白组细胞相比ꎬ敲减Ｃｕｌｌｉｎ７基因降低了ＨＧＣ－２７细胞的迁移(Ｐ<０.００１)和侵袭(Ｐ<０.００１)能力ꎮ表２㊀Ｃｕｌｌｉｎ７与胃癌患者临床病理特征的关系临床病理特征例数Ｃｕｌｌｉｎ７阴性(％)阳性(％)χ２Ｐ性别男４９１６(３２.６５)３３(６７.３５)女１１４(３６.３６)７(６３.６４)０.０５６０.８１３年龄(岁)<６０２１８(３８.１０)１３(６１.９０)ȡ６０３９１２(３０.７７)２７(６９.２３)０.３３００.５６６肿瘤位置胃食管连接部１６５(３１.２５)１１(６８.７５)胃体２１７(３３.３３)１４(６６.６７)胃窦幽门部２３８(３４.７８)１５(６５.２２)０.０５３０.９７４分化程度高８６(７５.００)２(２５.００)中２６９(３４.６２)１７(６５.３８)低２６５(１９.２３)２１(８０.７７)８.５９６０.０１４神经侵袭有３２４(１２.５０)２８(８７.５０)无２８１６(５７.１４)１２(４２.８６)１３.３９３０.０００血管侵袭有３１６(１９.３５)２５(８０.６５)无２９１４(４８.２８)１５(５１.７２)５.６４００.０１８肿瘤大小<５ｃｍ２４１１(４５.８３)１３(５４.１７)ȡ５ｃｍ３６９(２５.００)２７(７５.００)２.８１３０.０９４浸润深度Ｔ１~Ｔ２２５１４(５６.００)１１(４４.００)Ｔ３~Ｔ４３５６(１７.１４)２９(８２.８６)９.９０９０.００２淋巴结转移有３３３(９.０９)３０(９０.９１)无２７１７(６２.９６)１０(３７.０４)１９.３９４０.０００临床分期Ⅰ~Ⅱ２２１３(５９.０９)９(４０.９１)Ⅲ~Ⅳ３８７(１８.４２)３１(８１.５８)１０.３７１０.００１图２㊀Ｃｕｌｌｉｎ７过表达对胃癌细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的影响(ｘʃｓꎬｎ＝５)注:与空白组比较ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎻ与０ｈ比较ꎬ＃＃＃Ｐ<０.００１ꎮ图３㊀敲减Ｃｕｌｌｉｎ７基因对胃癌细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的影响(ｘʃｓꎬｎ＝５)注:与空白组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎻ与０ｈ比较ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎬ＃＃＃Ｐ<０.００１ꎮ３㊀讨论胃癌的高发病率和高死亡率已成为威胁人类健康的公共卫生问题ꎮ然而ꎬ胃癌是一种异质性疾病ꎬ发病机制复杂ꎬ涉及遗传㊁饮食㊁地域等多种因素[７]ꎮ在胃癌发生过程中ꎬ患者早期症状不明显ꎬ同时许多胃癌患者在手术切除原发性肿瘤后仍会发生转移ꎬ转移仍然是胃癌有效治疗的主要障碍[８]ꎬ迫切需要确定导致胃癌增殖㊁侵袭和转移的新机制ꎮ蛋白质泛素化是一种翻译后修饰过程ꎬ在基因转录㊁细胞周期转换㊁ＤＮＡ复制及修复㊁信号转导和病毒感染等各种生物过程中起着重要作用[９]ꎬ作为组织Ｅ３泛素连接酶的分子支架ꎬＣｕｌｌｉｎ７参与蛋白质泛素化过程ꎬ比如Ｃｕｌｌｉｎ７Ｅ３连接酶的底物识别亚基Ｆｂｗ８介导细胞周期蛋白Ｄ１的泛素化和细胞周期进程[１０]ꎮ研究表明ꎬＣｕｌｌｉｎ７通过调控生长㊁分化和细胞凋亡的通路促进肿瘤进展ꎬＣｕｌｌｉｎ７的过表达与癌症的发生和发展有关[２]ꎮＣｕｌｌｉｎ７促进癌细胞的上皮－间质转化并促进肝癌的转移[１１]ꎬ且Ｃｕｌｌｉｎ７在人类肺癌中表达增加ꎬ并且敲低Ｃｕｌｌｉｎ７表达抑制肺癌细胞增殖[１２]ꎮ在本研究中ꎬＣｕｌｌｉｎ７在胃癌组织和癌旁组织中存在差异ꎬ同时通过分析ＴＣＧＡ数据集中胃癌组织和正常胃上皮组织的基因表达谱ꎬＣｕｌｌｉｎ７在胃癌组织中也上调ꎬ差异有统计学意义ꎬ且生存分析显示Ｃｕｌｌｉｎ７水平高的患者总生存期㊁首次进展和进展后生存时间更短ꎬ而在大多数胃癌样本中观察到Ｃｕｌｌｉｎ７的过度表达ꎬ其核积累随着肿瘤分化程度的降低而增加ꎬ且与胃癌㊁神经侵袭㊁血管侵袭㊁浸润深度㊁淋巴结转移和临床分期密切相关ꎬ表明Ｃｕｌｌｉｎ７在胃癌中具有临床相关性ꎮ为了研究Ｃｕｌｌｉｎ７表达对胃癌增殖㊁迁移和侵袭的影响ꎬ在人胃癌ＨＧＣ－２７细胞系中通过异位过表达或ｓｈＲＮＡ检测Ｃｕｌｌｉｎ７功能的获得或丧失ꎮ来自ＭＴＴ㊁集落形成㊁划痕实验㊁Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移和Ｍａｔｒｉｇｅｌ侵袭测定的数据表明ꎬＣｕｌｌｉｎ７在胃癌细胞中的异位表达促进细胞增殖㊁迁移和侵袭ꎬ而用ｓｈＲＮＡ敲低Ｃｕｌｌｉｎ７表达可以抑制胃癌细胞的增殖㊁迁移和侵袭ꎬ差异有统计学意义ꎮ因此ꎬＣｕｌｌｉｎ７可能对胃癌细胞的增殖㊁存活㊁迁移和肿瘤发生至关重要ꎮ总之ꎬ本研究表明ꎬＣｕｌｌｉｎ７的上调可能是促进胃癌发生和发展的重要因素ꎬ可作为胃癌诊断㊁预后新的生物标志物以及新的治疗靶点ꎮ参考文献:[１]㊀ＨＵＨꎬＫＯＮＧＱꎬＨＵＡＮＧＸＸꎬｅｔａｌ.Ｌｏｎｇｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇＲＮＡＢＬＡＣＡＴ２ｐｒｏｍｏｔｅｓｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｖｉａｔｈｅｍｉＲ－１９３ｂ－５ｐ/ＭＥＴＴＬ３ｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＪＣａｎｃｅｒꎬ２０２１ꎬ１２(１１):３２０９－３２２１.[２]ＬＩＹꎬＺＡＮＧＡꎬＦＵＪꎬｅｔａｌ.Ｃｕｌｌｉｎ７ｉｎｔｕｍｏｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ:ａｎｏｖｅｌｐｏｔｅｎｔｉａｌａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒｔａｒｇｅｔ[Ｊ].Ｎｅｏｐｌａｓｍａꎬ２０２１ꎬ６８(３):５７２－５７９.[３]ＡＮＪꎬＺＨＡＮＧＺＧꎬＬＩＵＺＹꎬｅｔａｌ.ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣｕｌ￣ｌｉｎ７ｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ[Ｊ].ＢｍｃＣａｎｃｅｒꎬ２０１７ꎬ１７(１):８２８.[４]ＱＩＵＮꎬＨＥＹＦꎬＺＨＡＮＧＳＭꎬｅｔａｌ.Ｃｕｌｌｉｎ７ｅｎｈａｎｃｅｓｒｅ￣ｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂｔｈｅｒａｐｙｉｎＨｅｒ２ｐｏｓｉｔｉｖｅｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｖｉａｄｅｇｒａｄｉｎｇＩＲＳ－１ａｎｄｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＩＧＦＢＰ－３ｔｏａｃｔｉｖａｔｅｔｈｅＰＩ３Ｋ/ＡＫＴｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔꎬ２０１９(４６４):２５－３６.[５]ＸＵＪꎬＺＨＡＮＧＺꎬＱＩＡＮＭꎬｅｔａｌ.Ｃｕｌｌｉｎ－７(ＣＵＬ７)ｉｓｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｓｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓｖｉａＮＦ－ｋａｐｐａＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎ[Ｊ].ＪＥｘｐＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓꎬ２０２０ꎬ３９(１):５９.[６]国家卫生健康委员会.胃癌诊疗规范(２０１８年版)[Ｊ].中华消化病与影像杂志(电子版)ꎬ２０１９ꎬ９(３):１１８－１４４.[７]ＬＥＥＳＷꎬＬＥＥＴꎬＳＵＬＨＪꎬｅｔａｌ.ＤｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎＳｏｍａｔｉｃＭｕｔａｔｉｏｎＰｒｏｆｉｌｅｓｂｅｔｗｅｅｎＫｏｒｅａｎＧａｓｔｒｉｃＣａｎｃｅｒａｎｄＧａｓｔｒｉｃＡｄｅｎｏｍａＰａｔｉｅｎｔｓ[Ｊ].ＪＣｌｉｎＭｅｄꎬ２０２１ꎬ１０(９):２０３８.[８]ＷＡＮＧＳＷꎬＳＨＥＮＧＨꎬＺＨＥＮＧＦꎬｅｔａｌ.Ｈｅｓｐｅｒｅｔｉｎｐｒｏ￣ｍｏｔｅｓＤＯＴ１ＬｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎａｎｄｒｅｄｕｃｅｓｈｉｓｔｏｎｅＨ３Ｋ７９ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｔｏｉｎｈｉｂｉｔｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓ[Ｊ].Ｐｈｙｔｏ￣ｍｅｄｉｃｉｎｅꎬ２０２１(８４):１５３４９９.[９]ＧＯＥＣＫＥＬＥＲ－ＦＲＩＥＤＪＬꎬＤＥＮＮＹＲＡꎬＪＯＳＨＩＤꎬｅｔａｌ.ＩｍｐｒｏｖｅｄｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎｏｆＦ５０８ｄｅｌ－ＣＦＴＲｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓｗｉｔｈａｆｏｌｄｉｎｇｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒａｎｄａｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｐｒｏｔｅｉｎｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ[Ｊ].ＢｉｏｏｒｇＭｅｄＣｈｅｍＬｅｔｔꎬ２０２１(４８)１２８２４３.[１０]ＳＨＩＬꎬＤＵＤꎬＰＥＮＧＹꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆＣｕｌｌｉｎ７Ｅ３ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｌｉｇａｓｅｓｉｎｃａｎｃｅｒ[Ｊ].Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓꎬ２０２０ꎬ９(１０):９８.[１１]ＺＨＡＮＧＤꎬＹＡＮＧＧꎬＬＩＸꎬｅｔａｌ.ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＬｉｖｅｒＣａｒｃｉ￣ｎｏｍａＣｅｌｌＩｎｖａｓｉｏｎａｎｄＭｅｔａｓｔａｓｉｓｂｙＫｎｏｃｋｄｏｗｎｏｆＣｕｌｌ￣ｉｎ７ＩｎＶｉｔｒｏａｎｄＩｎＶｉｖｏ[Ｊ].ＯｎｃｏｌＲｅｓꎬ２０１６ꎬ２３(４):１７１－８１.[１２]王芳ꎬ包迪.Ｃｕｌｌｉｎ７在肺癌组织中的表达及临床意义[Ｊ].临床肺科杂志ꎬ２０１８ꎬ２３(３):４０２－４０５.(收稿日期:２０２３－０５－１８)«药学研究»关于抵制学术不端行为的声明捏造与篡改数据㊁抄袭剽窃㊁重复发表㊁虚假署名㊁一稿多投等学术不端行为不仅违反学术规范和道德ꎬ同时也有悖于国家相关法律法规ꎬ在学术界乃至社会造成恶劣影响ꎮ为加强科技道德规范ꎬ促进科研诚信ꎬ本刊编辑部严格遵守«中华人民共和国著作权法»等相关法律法规ꎬ坚决反对学术不端行为ꎮ编辑部将对所有来稿采用中国知网 科技期刊学术不端文献检测系统 进行检测来稿是否存在抄袭㊁一稿多投㊁伪造等学术不端行为ꎬ如来稿与已经刊发的文章雷同率在３０％以上ꎬ本刊即退稿ꎮ对最终认定为属于学术不端的论文ꎬ本刊会及时通知作者ꎬ在做出最终处理决定前ꎬ允许作者就此问题做出解释和申辩ꎻ如果该论文是已经正式刊出的ꎬ则以书面的形式通知论文作者ꎬ取消论文的录用资格ꎮ重复发表者ꎬ向相关期刊发通告函ꎬ责成撤稿ꎻ如给本刊造成声誉或是其他损失的ꎬ本刊将保留继续追索赔偿的权利ꎮ对情节严重的作者ꎬ就此事件向作者所在单位和该领域内的其他科技期刊进行通报ꎻ对严重抄袭剽窃㊁一稿多投的论文作者作为第一作者所撰写的论文ꎬ３年内本刊将一概不予录用ꎮ。
胃癌耐药细胞系传统型蛋白激酶C的表达及活性韩英;时永全;郑悦;张宏博;樊代明【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2001(22)15【摘要】目的观察传统型蛋白激酶C(cPKCs)在胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR1.0、耐药亚系SGC7901/VCR0.3,SGC7901/VCR0.7及药敏细胞系SGC7901表达及活性的变化,以及对细胞内药物浓度的影响. 方法用免疫荧光化学及蛋白印迹方法观察传统型蛋白激酶C在胃癌耐药细胞系及药敏细胞系的表达;竞争蛋白结合法测定PKC的活性;应用流式细胞仪观察细胞内药物浓度的变化. 结果PKCα,PKCβⅠ,PKCβⅡ及PKCγ在胃癌耐药细胞系及药敏细胞系均有表达,PKCα在耐药细胞表达呈强阳性,在药敏细胞表达呈阳性;PKCβⅠ及PKCβⅡ在耐药细胞及药敏细胞表达均为阳性; PKCγ在耐药细胞及药敏细胞表达均为强阳性. 免疫蛋白印迹实验证实,随耐药指数的增加,PKCα表达呈逐渐增高的趋势,薄层扫描蛋白印迹带的吸光度(A)分别为9584.17, 9421.06, 8534.64, 8088.79,而PKCβⅠ,PKCβⅡ及PKCγ在耐药细胞系、耐药亚系及其药敏细胞系表达无明显变化. PKC活性检测结果提示,随耐药指数的增加,PKC活性呈逐渐增高的趋势,以细胞质及细胞核的PKC活性增高为主. 结论传统型蛋白激酶C在维持胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR的多药耐药中起重要作用且具有同工酶特异性.【总页数】4页(P1358-1361)【作者】韩英;时永全;郑悦;张宏博;樊代明【作者单位】第四军医大学西京医院全军消化病研究所,;第四军医大学西京医院全军消化病研究所,;第四军医大学学员旅六大队,;第四军医大学西京医院全军消化病研究所,;第四军医大学西京医院全军消化病研究所,【正文语种】中文【中图分类】R735【相关文献】1.MG7Ag在胃癌细胞系SGC 7901及其耐药亚系中的表达及功能 [J], 韩英;时永全;聂永战;何风田;樊代明2.胃癌细胞系SGC7901耐阿霉素和顺铂细胞系的建立及其耐药可持续性的质控研究 [J], 杜静平;陈鹏;费洪新;杨明慧;陈正华3.RPL6／Taxreb107在胃癌耐药细胞系SGC7901／ADR中的差异表达及其与MDR相关性的初步研究 [J], 杜静平;曹云新;等4.蛋白激酶C亚型在人胃癌组织中的表达及与胃癌生长的相关性 [J], 徐秀英;姜若兰5.蛋白激酶C活性、表达及亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药相关性的研究 [J], 孙爱民;袁亚维;陈龙华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
胃癌患者癌组织及血清中lncRNA-GC1的表达及其对化疗耐药性的影响陈域;郭欣;陈芦斌;石秦川;刘靖圆【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2022(51)12【摘要】目的探讨长链非编码RNA-GC1(lncRNA-GC1)在胃癌筛查中的价值,以及对胃癌患者化疗耐药性的影响。
方法选取2019年1月至2021年1月于该院行手术治疗的86例胃癌患者作为研究对象,另纳入同期进行体检的86例健康体检者作为健康对照组。
收集胃癌患者的血液及组织标本,收集健康对照者的血液标本。
采用实时荧光定量PCR测定组织和血清lncRNA-GC1表达水平。
选取胃癌细胞MKN-45进行培养,建立稳定转染胃癌细胞系MKN-45 GC1,对照细胞为MKN-45 Vecc。
应用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞活力,3-D细胞培养实验检测细胞增殖和生长能力。
结果胃癌患者癌组织中lncRNA-GC1表达水平明显高于癌旁组织(1.45±0.16 vs.0.82±0.07,t=15.362,P<0.001);血清lncRNA-GC1表达水平明显高于健康对照组(0.78±0.13 vs.0.54±0.05,t=6.887,P<0.001)。
胃癌患者癌组织中lncRNA-GC1表达水平与肿瘤最大径、神经侵犯、淋巴结转移有关(均P<0.05),胃癌患者血清中lncRNA-GC1表达水平与肿瘤最大径、淋巴结转移和临床分期有关(均P<0.05)。
受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,血清lncRNA-GC1水平诊断胃癌的曲线下面积为0.849[95%CI(0.790,0.907),P<0.001]。
转染后的MKN-45 GC1细胞中lncRNA-GC1表达水平明显高于MKN-45 Vec细胞。
MTT实验结果表明,MKN-45 GC1细胞的细胞活力较MKN-45 Vec细胞明显升高;加入顺铂后,MKN-45 GC1和MKN-45 Vec细胞的细胞活力均下降,但MKN-45 GC1细胞的细胞活力仍明显高于MKN-45 Vec细胞。
趋化因子受体7在胃癌组织及细胞中的表达及意义师阿盟;董蕾;史海涛;贾淼;郭晓燕;姜炅;秦斌【摘要】目的：探讨趋化因子受体7（CXCR7）在胃癌组织及细胞中的表达及意义。
方法收集35例胃癌患者的癌组织和癌旁组织，采用RT-PCR及免疫组化分别检测CXCR7 mRNA和蛋白的表达水平，并结合临床资料进行分析；体外培养5种不同分化程度的胃癌细胞系（HGC-27未分化腺癌；MGC-803低分化粘液腺癌；BGC-823低分化腺癌；SGC-7901中分化腺癌；MKN-28高分化腺癌），采用免疫荧光检测各细胞系中CXCR7的表达水平。
结果（1）胃癌组织中CXCR7的mRNA和蛋白表达均明显高于癌旁组织（均为P<0.01）；（2）胃癌组织中CXCR7的表达与患者的性别、年龄、吸烟史、Hp感染、肿瘤部位及病理类型等均无明显关系，但有饮酒史的胃癌患者CXCR7的表达高于无饮酒史的患者（P<0.05）；（3）CXCR7在5种不同胃癌细胞系表达程度不一，与分化程度无明显关系，其在中分化胃腺癌细胞系SGC-7901表达程度最高。
结论 CXCR7在胃癌组织中呈高表达，在胃癌细胞系中表达程度不一，推测其可能在胃癌的发生发展中具有重要的作用。
%Objective To investigate the expression status of CXCR7 in gastric cancer tissues and cell lines. Methods The expression status of CXCR7 was detected in 35 primary gastric cancer tissues and matched adjacent tissues by immunohistochemistry and RT-PCR. The correlation of CXCR7 expression with the clinicopathological parameters and risk factors of gastric cancer was analyzed. The expression of CXCR7 in gastric cell lines (HGC-27, MGC-803, BGC-823, SGC-7901 and MKN-28)was also detected by immunofluorescence assay. Results The expression of CXCR7 was significantly higher in gastric cancer tissues than in adjacenttissues (P<0.01). CXCR7 expression was not correlated with age, gender, smoking history, Helicobacter pylori infection, tumor location or the pathological type, but showed a higher expression level in patients with a alcohol-drinking history than in those without (P<0.05). CXCR7 was expressed with variable intensities in the 5 gastric cancer cell lines without correlation with the degrees of cell differentiation;its expression was the highest in SGC-7901 cells, a moderately differentiated human gastric adenocarcinoma cell line. Conclusions CXCR7 is highly expressed in gastric cancer tissues with variable intensities in 5 gastric cancer cell lines, suggesting its important role in gastric cancer progression.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2014(000)012【总页数】5页(P1780-1784)【关键词】趋化因子受体;CXCR7;胃癌【作者】师阿盟;董蕾;史海涛;贾淼;郭晓燕;姜炅;秦斌【作者单位】西安交通大学医学院第二附属医院，陕西西安 710004;西安交通大学医学院第二附属医院，陕西西安 710004;西安交通大学医学院第二附属医院，陕西西安 710004;西安交通大学医学院第二附属医院，陕西西安 710004;西安交通大学医学院第二附属医院，陕西西安 710004;西安交通大学医学院第二附属医院，陕西西安 710004;西安交通大学医学院第二附属医院，陕西西安 710004【正文语种】中文胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居恶性肿瘤第2位。
趋化因子受体7(CXCR7)在胃癌腹膜转移中的表达及意义吴伟强;郗恒;高峰;胡祥【期刊名称】《西北国防医学杂志》【年(卷),期】2016(0)1【摘要】目的:研究胃癌中趋化因子受体7(CXCR7)的表达与腹膜转移的关系.方法:免疫组化法检测43例腹膜转移及50例无转移胃癌标本的CXCR7表达,分析腹膜转移灶CXCR7的表达与临床资料的关系.Logistic回归分析胃癌腹膜转移的危险因素.结果:腹膜转移组胃癌组织中CXCR7表达阳性率高于无腹膜转移组.转移灶中CXCR7的表达与肿瘤大小、浸润深度、分化程度显著相关(P＜0.05).肿瘤大小、浸润深度、分化程度、原发肿瘤CXCR7的表达是胃癌腹膜转移的危险因素.结论:CXCR7在胃癌中高表达,可能对胃癌的腹膜转移起到促进作用.【总页数】3页(P1-3)【作者】吴伟强;郗恒;高峰;胡祥【作者单位】兰州军区兰州总医院结直肠肛门外科,甘肃兰州 730050;成都市第三人民医院药剂科;兰州军区兰州总医院结直肠肛门外科,甘肃兰州 730050;大连医科大学第一附属医院胃肠外科【正文语种】中文【中图分类】R737.1【相关文献】1.不同分子分型乳腺癌组织中趋化因子CXCL12及其受体CXCR4和CXCR7的表达及临床意义 [J], 吴唯;钱立元;戴荆;丁波泥;陈学东2.胆囊癌患者癌组织中趋化因子CXCL12及其受体CXCR4、CXCR7表达及意义[J], 郝炯;赵君;蔡凤梅;张冠军3.趋化因子受体7(CXCR7)在食管鳞形细胞癌组织中的表达及其临床意义 [J], 郭晶;卢春来;古杰;葛棣4.胃癌组织中趋化因子受体 CXCR7的表达变化及意义 [J], 辛琪;张娜;张传山;杨艳;刘炜5.趋化因子受体CXCR1及CXCR2在胃癌腹膜转移中的表达及意义 [J], 姜磊;胡祥;王文俊;康新;王小周因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人胃癌血管特异性结合多肽的体内筛选及其三维结构模拟的初步分析郅敏;肖高铿;郅慧;董蕾;乔泰东;樊代明;吴开春【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2004(025)021【摘要】目的: 利用噬菌体随机环七肽库在小鼠肾包膜下荷人胃癌模型体内筛选能够与人胃癌血管内皮细胞结合的特异性分子,对其多肽进行计算机空间结构模拟分析. 方法:制备免疫抑制小鼠肾包膜下人胃癌移植瘤模型,用随机环七肽库在其体内进行4轮筛选,对随机获得的14个克隆进行测序. 通过细胞ELISA检测所得到的特异性小肽在脐静脉内皮细胞(HUVEC),SGC7901,LoVo,Eca-109及Hep-G2细胞系上的结合能力. 并通过计算机分子模拟多肽CGNSNPKSC的空间结构. 结果:成功获得14个噬菌体克隆,并呈现出2种氨基酸序列,其中多肽CGNSNPKSC,相比于对照细胞SGC7901, LoVo, Eca-109, Hep-G2,其同HUVEC结合能力明显增强. 利用计算机技术成功地模拟并分析了该多肽的空间结构. 结论:多肽CGNSNPKSC同血管内皮细胞结合能力较强;空间结构稳定,是一个高亲水多肽,更容易形成折曲的抗原表位,很有可能是一个极具肿瘤血管靶向治疗前景的多肽.【总页数】4页(P1958-1961)【作者】郅敏;肖高铿;郅慧;董蕾;乔泰东;樊代明;吴开春【作者单位】西安交通大学第二医院消化内科,陕西,西安,710004;第四军医大学西京医院消化病研究所,陕西,西安,710033;沈阳药科大学,辽宁,沈阳,110016;沈阳药科大学,辽宁,沈阳,110016;西安交通大学第二医院消化内科,陕西,西安,710004;第四军医大学西京医院消化病研究所,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院消化病研究所,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院消化病研究所,陕西,西安,710033【正文语种】中文【中图分类】R73-3【相关文献】1.内毒素休克小鼠肝脏血管内皮细胞特异性结合肽的体内筛选及初步鉴定 [J], 袁利华;刘承武;姚琦;牛茂昌;李志杰;邓鹏;刘靖华;姜勇2.胃癌血管特异性短肽GEBP11结合受体的免疫沉淀法筛选 [J], 吕艳香;梁树辉;刘洋;梁淑丽;乔丽娟;苗雨;王飙落;吴开春;丁杰3.多肽pd20分子胃癌肝转移导向性的体内特异性鉴定 [J], 师红利;王海;姜荣兴;沈皓;呼圣娟4.噬菌体展示技术体内筛选小鼠肾脏特异性多肽 [J], 阳艳丽;王自正5.肿瘤特异单链抗体库的构建及肿瘤血管特异性结合抗体的体内筛选 [J], 秦玺;田媛;胡宝成;薛建红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
