土壤磷酸酶测定方法

土壤酸性磷酸酶活性测定方法土壤酸性磷酸酶活性的测定⑴原理该方法以对硝基苯磷酸二钠（即pNPP）为基质，基质在土壤酸性磷酸酶的催化下水解生成黄色色的对硝基苯酚（即pNP），该黄色溶液在410nm处有最大吸收光值，根据对硝基苯酚的生成数量与黄色溶液的吸光度呈正比来进行定量分析，以此来反映土壤酸性磷酸酶的活性，采用的是对硝基苯磷酸二钠比色法。

⑵测定方法①称取壤土0.2g、砂土0.5g、粘土0.1g风干土于10mL离心管中，加入0.2 mL甲苯和4 mL ph6.5 磷酸缓冲液，再加1 mL 0.05 mol/L对硝基苯磷酸二钠溶液（用磷酸缓冲液配制），摇匀后加盖，放进36~37℃的培养箱中进行培养1个小时；②培养完成后取出加入0.5 mol/L的CaCl2 1 mL 及0.5 mol/L的NaOH 4 mL，摇匀；③而后在2500r/min下离心5min；取上层清夜于10ml 离心管4000r/min下再离心5min.④取上清液在410 nm处比色，并记录吸收光值。

⑶标准曲线的制作①取13支玻璃试管，按顺序编号，并按表2加入试剂。

表2对硝基苯酚标准曲线配制表离心管号0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、120.005?mol/mLpNP（mL）0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08 0.09 0.10 0.11 0.12H2O（mL）0.8、0.79、0.78、0.77、0.76、0.75、0.74、0.73、0.72 0.71 0.70 0.69 0.68pNP的含量（?mol）0、0.00005、0.0001、0.00015、0.0002、0.00025、0.0003、0.00035、0.0004 0.00045 0.0005 0.00055 0.0006摇匀0.2mol/LpH6.5磷酸缓冲液（mL） 40.5mol/L CaCl2（mL） 10.5mol/L NaOH（mL） 4②混匀后，转入10mL的离心管中，在2500r/min下离心5min，再在4000r/min下离心5min以0号作为对照，在A410nm波长下测光吸收值，并记录光吸收值A410。

土壤磷酸酶测定（酸性、中性和碱性磷酸酶）1. 分析意义土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。

在pH4-9的土壤中均有磷酸酶。

积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。

研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。

磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

2. 试验原理Kroll等（1955）最早提出用苯基磷酸盐作基质，以酚的释放量表示磷酸酶活性。

测定磷酸酶主要根据酶促作用生成的有机基团量或无机磷量计算磷酸酶活性。

前一种通称为有机基团含量法，是目前较为常用的测定磷酸酶的方法。

后一种称为无机磷含量法。

研究证明，磷酸酶有三种最适pH：4-5，6-7和8-10。

所以，测定酸性、中性和碱性反应土壤的磷酸酶，要提供相应的pH缓冲液才能测出该土壤的磷酸酶最大活性。

测定磷酸酶常采用的pH缓冲体系有醋酸盐缓冲液（pH5.0-5.4），柠檬酸盐缓冲液（pH7.0），三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.0-8.5），硼酸缓冲液（pH9-10）。

测定磷酸酶时，用各种磷酸一酯作为基质。

常用的基质有苯磷酸二钠、酚酞磷酸钠、甘油磷酸钠、α或β萘酚磷酸钠、ρ-硝基苯磷酸钠等。

3. 试剂配制a. 0.5％磷酸苯二钠（用缓冲液配制）；b. pH5醋酸盐缓冲液、pH7柠檬酸盐缓冲液、pH9.4硼酸盐缓冲液；c. 氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2.6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10mL 96％乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。

保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用；d. 酚的标准溶液：酚原液－取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中；酚工作液－取10mL 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01毫克酚）；e. 甲苯；f. 0.3％硫酸铝溶液。

4. 标准曲线绘制：取1、3、5、7、9、11和13mL酚工作液，置于50mL容量瓶中，每瓶加入5mL缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，即得0.0002、0.0006、0.0010、0.0014、0.0018、0.0022和0.0026mg ·g -1浓度的酚标准溶液梯度。

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土壤酸性磷酸酶（S-ACP）检测
土壤酸性磷酸酶（Soil acid phosphatase, S-ACP）是土壤磷酸酶的一种，土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。

通常按照其最适 pH 范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

酸性环境中，土壤酸性磷酸酶催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可表征土壤酸性磷酸酶的活性。

迪信泰检测平台采用生化法，利用醋酸盐缓冲液-比色法可高效、精准的检测土壤酸性磷酸酶活性变化。

此外，我们还提供其他土壤酶类检测服务，以满足您的不同需求。

生化法测定土壤酸性磷酸酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周。

项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。

2. 相关参数（中英文）。

3. 图片。

4. 原始数据。

5. 土壤酸性磷酸酶活性信息。

迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。

土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。

它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。

土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。

根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。

人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。

土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。

本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚-次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。

二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。

3）PH6.7柠檬酸盐缓冲液：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。

将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。

4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml 丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B 液）。

将A、B溶液保存在冰箱中。

使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。

6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液。

绘制标准曲线时，再将此溶液稀释10倍供用。

三、操作步骤标准曲线制作：分别吸取稀释后的标准液0、1、3、5、7、9、11、13ml，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。

再加入4ml苯酚钠溶液和3ml 次氯酸钠溶液，随加随摇匀。

20min后显色，定容。

1h内在分光光度计上于578nm 波长处比色。

然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯。

土壤酶活性测定方法土壤酸性磷酸酶活性的测定1.试剂制备(1)0.115mp-硝基苯磷酸钠溶液取10.67 GP硝基苯磷酸二钠（6H2O，分子量371.1）溶于pH4。

5 5在普通缓冲液中稀释至250ml，在4℃冰箱中保存。

(2)通用缓冲液（ph4.5）（缓冲液久置会有沉淀）储备溶液由以下成分组成：三羟甲基氨基甲烷12.1g顺丁烯二酸11.6g柠檬酸14g硼酸6.3g溶于500ml 1nnaoh（40g定容1L），加入蒸馏水至1L。

取200ml储备溶液，加入0.1nhcl或浓HCl，将pH值调节至4.5。

最后，稀释至1L。

（3）甲苯(4)0.5mol/lcacl2.2h2o溶液：36.75gcacl2。

2H 2O定容500ml（无水CaCl2:11.1g定容200ml）（5）0.5mol/lnaoh 溶液：20gnaoh定容1L 2。

测量步骤取1g土壤，置于50ml三角瓶中，加4ml通用缓冲液（ph4.5）、0.25ml甲苯和1ml0.115mp-硝基苯磷酸钠溶液,摇匀后，置于37℃恒温箱中1h。

培养结束后，加入1ml0 5mol/L氯化钙溶液和4ml 0 5mol/LNaOH溶液，用浓滤纸过滤至50ml容量瓶中，用蒸馏水定容后在410nm处比较颜色。

3.计算方法土壤酸性磷酸酶的活性用单位时间内每克土中的对硝基苯酚的毫克数表示，w（mgg-1h-1）=m1/（m×t）式中：M1——标准曲线上发现的样品中对硝基苯酚的质量（mg）；T-反应时间（H）=1hm-样品土壤重量（g）无土壤ck:用1ml蒸馏水代替1g土壤；每批土样做2个；无基质ck:用1ml蒸馏水代替1mlpnpp。

每个处理做1个。

标准曲线的制备：1）对硝基苯酚标液：1g对硝基苯酚定容1l，低温保存。

2）取标液0、1、2、3、4、5ml于0-6号硬质试管中，分别加ph6.5通用缓冲液4ml，cacl2.2h2o溶液1ml，naoh溶液4ml，② 混合后，将定量滤纸过滤至50ml容量瓶中。

磷酸酶活性测定磷酸酶可催化磷酸脂类或磷酸酐的水解,其活性的高低直接影响着土壤有机磷的分解转化及其生物有效性(耿玉清等，2008)。

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，可作为反映土壤磷素水平的一项生物指标（于群英，2001）。

测定方法: 磷酸苯二钠比色法1. 试剂配制（1） pH9.8氯化铵―氢氧化铵缓冲液100mL：取20g纯氯化铵，溶于100mL浓氢氧化铵中。

（2） 8%铁氰化钾液100mL:取8g铁氰化钾，溶于蒸馏水中，稀释至100mL(此液只能用一周)。

（3） 2% 4-氨基氨替比林液100mL:取2g 4-氨基氨替比林溶于水中，稀释至100mL(此液只能用一周)。

（4） 0.5%磷酸苯二钠溶液500mL:取2.5g磷酸苯二钠溶于水中，稀释至500mL。

（5）酚的标准溶液：酚原液：取1g重蒸酚（phenol,又名石碳酸）溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中。

酚工作液：取10mL酚原液稀释至1L（每mL含0.01mg酚）。

（6）甲苯。

2. 操作步骤（1）标准曲线绘制：取1，3，5，7，9，11，13mL酚工作液置于50mL容量瓶中，另取一管做空白对照，分别加入20mL蒸馏水。

再加入0.25mL缓冲液、0.5mL 4-氨基氨替比林液，0.5mL铁氰化钾液。

每次加入试剂要充分摇动，最后定容至50mL。

在15min内，在分光光度计上于510nm处比色测定溶液的光密度。

最后绘成标准曲线。

（2）土壤磷酸酶活性测定：称5.00g风干土样，置于50mL三角瓶中，加5滴甲苯后再加入20mL0.5%磷酸苯二钠,充分振荡后于37℃恒温箱中培养2h。

取培养后的滤液5mL，按标准曲线所述方法显色，比色测定。

土壤样品酶活性测定分三次进行：新鲜土样测量一次，风干后测量一次，风干土样保存1个月后再测量一次。

3. 结果计算磷酸酶活性，以2h后100g土壤中P2O5的毫克数表示。

土壤磷酸酶的测定实验报告概述说明1. 引言1.1 概述土壤磷酸酶是一种广泛存在于土壤中的酶类，它在土壤磷素循环和生态系统中具有重要的功能和作用。

通过测定土壤磷酸酶活性，可以了解土壤中的磷循环情况以及其对植物生长和农业生产的影响。

本实验旨在探究土壤样品中磷酸酶的活性，并通过实验方法的运用来测定和分析其活性水平。

1.2 文章结构本文共分为五个主要部分：引言、正文、结果与分析、讨论与解释以及结论和展望。

引言部分将介绍本实验的背景和目的，并简要描述文章结构，使读者能够清晰理解全文内容。

正文将详细介绍土壤磷酸酶的基本概念以及测定实验方法，并提供实验步骤和条件信息。

结果与分析部分将展示测定结果，并对数据进行详细分析和讨论。

讨论与解释部分将解释实验结果的意义，并对影响磷酸酶活性因素进行深入分析，同时还将对相关研究成果进行比较分析。

最后，结论和展望部分将总结实验结果并给出进一步工作建议。

1.3 目的本文的目的是通过测定土壤磷酸酶活性的实验，探讨土壤中磷酸酶的特性、影响因素以及其在土壤磷循环和生态系统中的作用。

通过本次实验可以为土壤质量评价、植物营养关系研究以及农业生产提供科学依据和参考意见。

此外，文章还旨在扩展读者对于土壤生态系统中微生物酶类功能及其重要性的认识，并为未来相关研究提供参考方向。

2. 正文2.1 土壤磷酸酶介绍土壤磷酸酶是一种重要的土壤酶，它参与了土壤中有机磷的转化和释放过程。

磷是植物生长必需的营养元素之一，但通常以无机形式存在于土壤中，难以被植物吸收利用。

这就需要依靠土壤中的磷酸酶将有机磷转化为无机磷，提供给植物进行吸收和利用。

2.2 测定实验方法测定土壤磷酸酶活性的常见方法包括显色法、比色法和荧光法等。

其中较为常用的是显色法，具体步骤如下：1. 取少量土壤样品，并将其保存在干燥、密封的容器中。

2. 准备适当浓度的柠檬酸钠缓冲液，并调节pH值到适宜范围。

3. 加入柠檬酸钠缓冲液和显色底液到样品中，并进行混合均匀。

土壤磷酸酶（酸性、中性和碱性磷酸酶1.土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。

在pH4-9的土壤中均有磷酸酶。

积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。

研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。

磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

2.Kroll等（1955）最早提出用苯基磷酸盐作基质，以酚的释放量表示磷酸酶活性。

测定磷酸酶主要根据酶促作用生成的有机基团量或无机磷量计算磷酸酶活性。

前一种通称为有机基团含量法，是目前较为常用的测定磷酸酶的方法。

后一种称为无机磷含量法。

研究证明，磷酸酶有三种最适pH：4-5，6-7和8-10。

所以，测定酸性、中性和碱性反应土壤的磷酸酶，要提供相应的pH缓冲液才能测出该土壤的磷酸酶最大活性。

测定磷酸酶常采用的pH缓冲体系有醋酸盐缓冲液（pH5.0-5.4），柠檬酸盐缓冲液（pH7.0），三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.0-8.5），硼酸缓冲液（pH9-10）。

测定磷酸酶时，用各种磷酸一酯作为基质。

常用的基质有苯磷酸二钠、酚酞磷酸钠、甘油磷酸钠、α或β萘酚磷酸钠、ρ-硝基苯磷酸钠等。

（用缓冲液配制）；取0.125g 2.6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10mL 96％乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。

保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用；－取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中；－取10mL 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01毫克酚）；取1、3、5、7、9、11和13mL酚工作液，置于50mL容量瓶中，每瓶加入5mL 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，即得0.0002、0.0006、0.0010、0.0014、-1浓度的酚标准溶液梯度。

30min后比色测定。

绘制标准曲0.0018、0.0022和0.0026mg?g线。

5g风干土置于200mL三角瓶中，加2.5mL甲苯，轻摇15min后，加入20mL0.5％磷酸苯二钠（酸性磷酸酶用醋酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液），仔细摇匀后放入恒温箱，在37?下培养24h。

土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法。

土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。

它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。

土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。

根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。

人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。

土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。

本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚-次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。

二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。

3）PH6.7柠檬酸盐缓冲液：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。

将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。

4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml 丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B 液）。

将A、B溶液保存在冰箱中。

使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。

6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液。

绘制标准曲线时，再将此溶液稀释10倍供用。

三、操作步骤标准曲线制作：分别吸取稀释后的标准液0、1、3、5、7、9、11、13ml，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。

再加入4ml苯酚钠溶液和3ml 次氯酸钠溶液，随加随摇匀。

20min后显色，定容。

1h内在分光光度计上于578nm 波长处比色。

然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

土壤过氧化氢酶过氧化物酶磷酸酶蔗糖酶脲酶测定方法土壤中的过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶和脲酶是土壤中重要的酶类，对于土壤质量的评价和土壤生态系统的健康状况具有重要意义。

以下将介绍测定这些酶类的方法。

1.土壤过氧化氢酶检测方法：过氧化氢酶（Catalase, CAT）是土壤中一种重要的氧化酶，参与有机物的降解和土壤氧化还原过程。

测定土壤过氧化氢酶的常用方法为测定土壤样品的过氧化氢气体释放量。

实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的过氧化氢底物（如双酚酸），在室温下反应一段时间。

（2）反应结束后，用紫外光度计测定反应液中过氧化氢的吸光度。

（3）根据吸光度的变化，计算出土壤样品中的过氧化氢酶活性。

2.土壤过氧化物酶检测方法：过氧化物酶（Peroxidase, POD）是土壤中一类重要的酶类，参与土壤的有机物降解和氧化还原过程，是土壤抗氧化系统的重要组成部分。

测定土壤过氧化物酶的常用方法为测定土壤样品中过氧化物酶的催化能力。

实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的过氧化氢底物（如过氧化氢），在适宜的温度和pH条件下反应一段时间。

（2）反应结束后，用显色试剂（如双对苯偶氮、间苯二胺等）与反应液中的过氧化氢发生反应，形成有色物质。

（3）用分光光度计测定反应液中有色物质的吸光度，并根据吸光度的变化计算出土壤样品中过氧化物酶的活性。

3.土壤磷酸酶检测方法：磷酸酶（Phosphatase, AP）是土壤中一种重要的酶类，参与有机磷的矿化和土壤磷循环过程。

测定土壤磷酸酶的常用方法为测定土壤样品中磷酸酶对底物（如对硝基酚磷酸酯）的水解能力。

实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的磷酸酶底物，在适宜的温度和pH条件下反应一段时间。

（2）反应结束后，用显色试剂（如酚氨反应液）与反应液中的产物发生反应，形成有色物质。

（3）用分光光度计测定反应液中有色物质的吸光度，并根据吸光度的变化计算出土壤样品中磷酸酶的活性。