菌体理化性质鉴定试验

紫花苜蓿根瘤菌的鉴定及其与土壤理化性质相关性分析紫花苜蓿（Trifolium pratense L.）是一种广泛种植的牧草和绿肥植物，其与根瘤菌的共生对土壤氮素固定和植物生长发育有重要影响。

本文旨在利用分子生物学技术对紫花苜蓿根瘤菌进行鉴定，并分析其与土壤理化性质之间的相关性。

为了确定根瘤菌的菌株类型，我们自农田土壤中分离紫花苜蓿根部的根瘤样品，并使用无菌技术将根瘤菌分离培养。

然后，从分离培养的纯株中提取细菌基因组DNA，并使用通用引物扩增16S rRNA基因，得到了长度为约1.5 kb的DNA片段。

通过测序并与NCBI数据库进行比对，我们得到了根据16S rRNA基因序列确定的根瘤菌的物种分类。

通过对多个菌株基因序列比对和系统发育分析，我们发现分离株中主要存在于根瘤菌属（Rhizobium）和致病根瘤菌属（Agrobacterium）中的不同物种。

其中，绝大部分菌株属于根瘤菌属，与已报道的Rhizobium leguminosarum和Rhizobium trifolii最为相似。

而少数菌株属于致病根瘤菌属，与已报道的Agrobacterium radiobacter和Agrobacterium tumefaciens最为相似。

这些结果表明，紫花苜蓿与多种根瘤菌共生，其中优势菌株属于Rhizobium属。

然后，我们收集了不同地点的土壤样品，并分析了其理化性质，包括土壤pH值、有机质含量和速效氮含量。

通过与紫花苜蓿根瘤菌的鉴定结果进行对比分析，我们发现不同根瘤菌物种与土壤理化性质之间存在一定的相关性。

首先，我们发现根瘤菌的物种组成与土壤pH值密切相关。

在土壤pH值较高（6.5-7.5）的地区，多数菌株属于Rhizobium属；而在土壤pH值较低（5.0-6.0）的地区，少数菌株属于Agrobacterium属。

这与已有研究结果一致，表明不同根瘤菌物种对土壤pH值有不同的适应性。

其次，我们发现根瘤菌的物种组成与土壤有机质含量密切相关。

三种食用菌产品品质检测一、检测组分水分、灰分、可溶性糖、粗脂肪、粗蛋白、挥发性香气物质、纤维素、氨基酸、重金属、农药残留。

二、检测方法2.1样品预处理2.1.1干法灰化除汞外大多数金属元素和部分非金属元素的测定都能够用此法处理样品。

2.1.2浸提法振荡浸渍法: 将样品剪碎, 放在合适的溶剂中浸渍、振荡即可从样品中分离出被测成分。

( 挥发性香气成分)2.1.3溶剂萃取法2.1.4蒸馏法2.2水分2.2.1直接干燥法取一干净烧杯及蒸发皿放至95~105摄氏度干燥烘箱内, 烘30~60min, 取出冷却至室温, 称重, 复烘30min, 两次质量差不超过0.5mg视为恒重。

精密称取处理好的试样20~30g于恒重的烧杯内, 置于烘箱, 烘3小时。

盖上蒸发皿, 取出冷却, 称重, 复烘30min, 直至前后两次质量差不超过0.5mg, 即为恒重。

水分=m1-m2/m1-m0x100%式中: m0-----------烧杯及蒸发皿的质量; gm1-----------干燥前烧杯、蒸发皿及样品的质量; gm2------------干燥后烧杯、蒸发皿级样品质量; g2.2.2减压干燥法2.2.3共沸蒸馏法2.3灰分2.3.1高温灼烧法操作方法:1、取大量适宜的瓷坩埚置高温炉中, 在600℃下灼烧0.5小时, 冷至200℃以下后取出, 放入干燥器中冷至室温, 精密称量, 并重复灼烧至恒量。

2、加入2-3克固体样品或5-10克液体样品后, 精密称量．3, 液体样品须先在沸水浴上蒸干, 固体或蒸干后的样品, 先以小火加热使样品充分炭化至无烟, 然后置高温炉中, 在550—600℃灼烧至无炭粒, 即灰化完全。

冷至200℃以下后取出放入干燥器中冷却至室温, 称量。

重复灼烧至前后两次称量相差不超过0.5mg为恒量。

计算:X=(m1-m2)/(M3-m2) X 100x-样品中灰分的含量, ％;m1-坩埚和灰分的质量, g;m2-坩埚的质量, g;m3-坩埚和样品的质量, g。

常见细菌理化性质鉴定试验淀粉水解：淀粉在酸的催化作用下，能发生水解；淀粉的水解过程：先生成分子量较小的糊精(淀粉不完全水解的产物)，糊精继续水解生成麦芽糖，最终水解产物是葡萄糖。

培养基：将细菌接种在平板上，置37度温箱中培养24h，加革兰氏碘液于菌落上，观察颜色变化，呈蓝色者为阴性，无蓝色为阳性。

甲基红试验：是根据肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红这个原理进行的测验。

产氨实验（乙酰胺肉汤）原理：铜绿假单胞菌产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，滴加纳氏试剂（碘化汞钾），氨在碱性条件下与碘化汞钾作用，生成红色络合物。

操作：将纯培养物接种到装有乙酰胺肉汤的试管中，在36℃±1℃下培养20h～24h。

然后向每支试管培养物加入1～2滴钠氏试剂，检查各试管的产氨情况，如表现出从深黄色到砖红色的颜色变化，则为阳性结果，否则为阴性。

吲哚试验：是指有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚(靛基质)，经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，则为吲哚试验阳性。

过氧化氢酶试验（又名：接触酶试验）一、原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。

二、试剂3%过氧化氢溶液：临用时配制。

三、试验方法挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果。

四、结果于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。

革兰氏阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。

脲酶试验原理：存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。

它是一种酰胺酶、能酶促有机物质分子中酶键的水解。

脲酶的作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和碳酸。

临床医学检验技术(师)：免疫原和抗血清制备必看考点三1、单选制备细胞核与核膜抗原前需将细胞破碎，常用的方法有（）A.研磨法B.超声破碎法C.自溶法D.酶处理法E.十二烷基磺酸钠处理正确答案：A参考解析：研磨法常（江南博哥）用于组织匀浆的制备。

2、单选从免疫血清中粗提γ球蛋白最简便的方法为（）A.亲和层析B.离子交换层析C.凝胶过滤D.超速离心E.硫酸铵盐析正确答案：E参考解析：免疫球蛋白纯化的方法很多，有单一法，但大多数采用二步法以上相结合的方法，特别是以硫酸铵盐析为基础，再经过层析柱的方法来提高免疫球蛋白及其各成分的纯度最为常用。

3、单选以下哪一个是对半抗原的正确描述（）A.只有和载体结合后才能和抗体分子结合B.是大分子C.是多肽D.没有免疫原性E.只能诱生体液免疫应答正确答案：D参考解析：半抗原是只有抗原性而无免疫原性的物质。

其可与抗体或致敏淋巴细胞特异性结合，但不能单独诱发免疫应答，在体内单独存在时不引起抗体产生，当其与蛋白质或胶体颗粒结合后，则可引起抗体形成。

半抗原可与其特异性抗体结合。

如细菌的多糖和类脂质等。

在半抗原与蛋白质结合物中，一般是蛋白质使结合物具有抗原性，而半抗原则决定结合物的抗原特异性。

4、单选下列物质中免疫原性最强的是（）A.核酸B.蛋白质C.多糖D.半抗原E.脂类正确答案：B5、单选抗原抗体结合反应最终出现肉眼可见沉淀现象，其原因是（）A.从亲水胶体变为疏水胶体B.从疏水胶体变为亲水胶体C.抗原抗体结合导致蛋白变性所致D.抗原抗体结合和盐析共同作用所致E.抗原抗体反应是单向反应正确答案：A6、单选首次与第二次免疫接种的时间间隔最好为（）A.1周内B.10~20天C.7~10天D.20~30天E.30天以上正确答案：B参考解析：初次免疫与第二次免疫的间隔时间多为2~4周，再次免疫后两周内进行。

7、单选免疫接种后易引起局部持久溃疡和形成肉芽肿的佐剂为（）A.弗氏不完全佐剂B.弗氏不完全佐剂+卡介苗C.细胞因子佐剂D.多聚核苷酸E.肉毒素正确答案：B参考解析：弗氏不完全佐剂加卡介苗即弗氏完全佐剂，可提高佐剂效能，但注射后易产生局部持久性溃疡和肉芽肿。

芽孢杆菌定性定量检测方法近年来，微生态制剂在调控动物体内微生态平衡等方面的研究和应用正逐步深入，我国现在已经允许使用的安全微生物有很多种，枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis）因具有稳定性好、抗性强、复活率高等自身优势，成为研究和应用较多的菌种之一。

它在目标动物肠道中，通过生物夺氧作用，拮抗致病微生物，并产生多种消化酶和多种营养物质，调节消化道健康，增强动物体的免疫功能，预防疾病的发生，达到促进目标动物的生长、提高饲料的转化率的目的。

在微生态制剂检测中芽孢杆菌的数量以及芽孢率是衡量微生态制剂产品质量的重要指标。

本文旨在介绍芽孢杆菌的特点及其快速、简便的定性、定量检测芽孢杆菌的方法。

一、枯草芽孢杆的理化性质枯草芽孢杆菌菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色（见图1），在液体培养基中生长时，常形成皱褶。

需氧菌。

单个细胞微米、着色均匀。

无荚膜，全身鞭毛能活动。

革兰氏阳性菌，芽孢微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大（显微形态见图2）。

图1 枯草芽孢杆菌平板菌落图2 枯草芽孢杆菌显微形态二、芽孢孢子的定性检测1、染色基本方法如下：（1）取微生态制剂样品1g，加入99mL无菌水，充分摇匀，37℃ 20-30min；（2）用接种环，取菌液，涂于载玻片，风干固定；（3）在涂菌液加入%孔雀绿饱和水溶液，染色10分钟后，用水冲洗至无绿色即可，再用%品红液染色1min，水冲洗、风干后镜检（100倍油镜加香柏油1滴）。

2、结果判断：芽孢孢子呈绿色，营养体呈红色。

三、芽孢孢子的定量检测1、血球计数板法（1）原理：利用血球计数板在光学显微镜下，查出芽孢个数，再用公式计算出1克样品中含芽孢个数。

（2）仪器：血球计数板（25×16格），光学显微镜，刻度吸管，三角瓶，振荡器和玻璃球。

（3）方法和步骤：?a、取样及样品制备：称取待测样品1克（精确到克）装入盛有99毫升水的三角瓶中，然后用振荡器或加玻璃球摇匀，使菌液均匀分布。

ATB细菌鉴定系统标准操作规程1. 目的规范ATB细功鉴定系统操作规程，保证检验质量。

2. 授权操作人经培训并通过考核的微生物实验室工作人员。

3. 原理细菌理化性质不同，分解底物导致PH改变而产生不同颜色。

经光电比色法测定来判断反应结果。

每张卡上有32项生化反应，采用终点判读法，培养4或24小时待反应完成后，由读数仪判读结果。

4. 工作环境相对湿度“ 10%〜85%;温度15〜30C ;电源电压：100〜240V、50/60Hz。

5操作程序5.1试条的选择rapid ID 32 E:肠杆菌科细菌（4小时）rapid ID 32 A:厌氧菌（4小时）rapid ID 32 Strep：链球菌（4小时）ID 32 E:肠杆菌/其它革兰阴性杆菌ID 32 STAPH :葡萄球菌ID 32 GN :非发酵菌/非肠道发酵革兰阴性菌ID 32 C:酵母菌ATB G 5:肠杆菌科细菌ATB PSE 5: 非发酵菌ATB STAPH5 :葡萄球菌ATB STREP 5:链球菌（包括肺炎链球菌）ATB FUNGUS 3:念珠菌届/新型隐球菌ATB ENTEROC5:肠球菌Rapid ATB E 4:快生长肠杆菌科细菌（4小时）ATB UR 5 :尿液中的肠杆菌ATB HAEMO :嗜血杆菌/卡它菌ATB ANA : 厌氧菌6. 操作流程6.1根据细菌种类选试条。

将试条和培养其从冰箱取出，室温放置15〜20分钟。

6.2校正比浊仪。

6.3使用新鲜的纯培养物进行检测（菌龄:18-24小时）6.4悬浮液：0.85% NaCL或去离子水6.5:培养基:ATB培养基和/或其它专用培养基6.6:调制相应的鉴定菌悬液浓度，使用DENSITMAT比浊仪校正浓度6.7配制相应的药敏菌悬液浓度，转移适当体积至ATB培养基。

6.8使用电子连续加样枪分配适量体积至检测试条各孔。

6.9对于鉴定试条，在需要的测试孔滴加石蜡油2滴。

6.10盖上试条盖，把试条放入湿盒，350 C/290 C± 2 C孵育。

生物技术制药题库生物技术制药是一种利用现代生物技术，借助微生物、植物、动物等生物体生产药品的技术。

其中，基因工程制药利用重组DNA技术生产蛋白质或多肽类药物，细胞工程制药则是利用动、植物细胞培养生产药物的技术。

酶工程制药则是将酶或活细胞固定化后用于药品生产，而发酵工程制药则是利用微生物代谢过程生产药物的技术。

抗体工程制药则利用抗原和抗体的特异性结合性质生产药物。

先导化合物是指通过优化药用、减少毒性和副作用，使其转变为一种新药的化合物。

生物药物则是利用微生物学、生物学、医学、生物化学等的研究成果，从生物体、生物组织、细胞、体液等，综合利用微生物学、化学、生物化学、生物技术、药学等学科的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。

细胞的生长形态可以分为贴壁细胞和悬浮细胞，其中贴壁细胞需要有贴附的支持物表面，依靠贴附因子生长。

兼性贴壁细胞则生长不严格依赖支持物。

牛痘病毒可以构建多价疫苗腺病毒，逆转录病毒则用于基因治疗，杆状病毒则用于外源基因表达。

生物碱是一种含氮有机化合物，而生理活性物质则对细胞内生化代谢和生理活动起着调节作用。

植物抗毒素是指在植物防御系统内能对抗微生物进攻的某些次级代谢产物，有些时候连续合成，有些时候在被刺激下才会产生抗毒素，或仅在被诱导下其产量才能增加。

生物转化是利用生物离体培养细胞，固定化的植物（或微生物）细胞或从这些有机体中分离得到的酶等，对外源底物进行结构修饰而获得更有价值产物的一种技术。

抗体是B细胞在抗原的刺激下分化为浆细胞，产生具有与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。

免疫球蛋白具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白，而多克隆抗体则由多个克隆细胞产生的针对多种抗原决定簇的混合抗体制剂，也称第一代人工抗体。

20、基因工程抗体是一种第三代抗体，利用DNA重组技术对抗体分子进行切割、拼接或修饰，或者直接合成基因序列，再将基因导入细胞表达产生的抗体。

21、药用酶是指可用于预防和治疗疾病的酶。