微生物染色法

WOIRD格式革兰染色抗酸染色：分支杆菌属，诺卡放线菌属。

石炭酸复红染色，金永染色。

芽孢染色：用于区分细菌的芽孢和营养细胞。

结果芽孢染成绿色，营养细胞为红色。

晶体染色：观察苏云金杆菌不同变种的晶体形状大小。

结果晶体染成紫色，芽孢为透明椭圆形，仅见具有轮廓的折光体。

鞭毛染色：有赖夫生染色法、银盐染色法，西萨-基尔染色法等。

一般以西萨-基尔（Cesares-Gill）染法效果最佳。

异染颗粒染色：用于白喉棒状杆菌染色，直接涂片或改良阿伯特法染色。

墨汁荚膜染色：观察菌体有无荚膜，如新型隐球菌。

碳素墨汁。

镀银染色：螺旋体吉姆萨染色：螺旋体荧光染色魏申染色（wayson）染色：鼠疫耶尔森杆菌。

铬酸P、A、S真菌类染色。

结果：曲霉菌、念球菌属、细胞浆菌属、隐球菌属为红紫色。

曲霉菌丝周边紫红色，弹力纤维紫色，背景绿色。

Mann氏甲基蓝伊红染色法：病毒包涵体染色。

Negri氏小体红色。

Nacchiavello氏染色：病毒包涵体染色。

结果：包涵体、立克次氏体均染红色，其余组织呈蓝色。

Crocott-Gomori氏六胺银法：新型隐球菌碘染色法吉姆萨染色：衣原体乳酸酚棉蓝染色，糖原染色：真菌，前者适用于所有真菌，呈蓝色。

吉姆萨染色，瑞氏染色：鞭毛虫，滴虫，锥虫，疟原虫，弓形虫，隐孢子虫等原虫。

三色染色，碘染色：阿米巴等原虫。

荧光素吖啶橙染色：疟原虫。

金胺-酚染色：隐孢子虫。

甲苯胺蓝，四胺银染色：耶氏肺孢子虫。

专业资料整理。

·健康科学·几种常用的微生物染色方法汇总黄波因微生物细胞比较小且透明，在普通的光学显微镜下不容易进行观察。

染色以后微生物细胞会与背景形成比较鲜明的色差，从而可以清楚地观察到微生物的形态，有利于鉴别、强化细化或细胞组分与周围环境之间产生的反差，方便利用普通光学显微镜对微生物细胞进行观察的简便方法。

一、微生物染色原理因微生物细胞含有大量的水分，所以对光线的吸收、反射及水溶液之间的差异不明显，机体属于无色、透明样，且与周围的环境背景之间也没有明显的反差，在普通的光学显微镜下不容易进行识别，所以必须对微生物进行染色，经过染色以后，菌体会与背景有明显色差的形成，才能更加清楚地观察到其形态与结构。

微生物细胞主要是有由蛋白质、核酸等两性电解质以及其他的化合物所组成，所以会表现出两性电解质的性质。

而两性电解质又兼具了碱性基、酸性基，在酸性溶液当中，会解离出含有碱性基呈碱性带正电；在碱性溶液当中，会解离出酸性基呈酸性带负电。

经过测定后，细菌等电pH值在2~5之间，所以在中性、碱性或是偏酸性的溶液中，细菌的等电点均小于上述中溶液的pH值，因此，细菌是带负电荷，容易和带正电荷的碱性染料相互结合，所以应用碱性染料色的比较多。

此外，微生物体内的各种结构的结合力与染料不同，所以可以使用各种染料对微生物的结构分别进行染色，便于观察。

二、染料的种类与选择染料可以分为2种类型：①天然染料，包含胭脂虫红、地衣素、石蕊、苏木素等，大部分都是从植物中所提取的，成分较为复杂。

②人工染料，又被称为煤焦油染料，大部分都是从焦煤油中所提取的，属于苯的衍生物。

大部分染料都属于带色有机酸或是碱类，有的也与有机溶剂相溶，为了使其能够在水中易溶，通常会把它们制作成盐类。

染料按照电离后的染料离子，所带的电荷性质，将其可分为以下几种类型。

（一）酸性染料该类染料进行电离以后，染料离子带负电，例如伊红、刚果红、苯胺黑等，可以和碱性的物质进行结合，成为盐；当培养基为糖类，而分解产酸的时候会使pH值下降，同时细菌所带的正电荷会增加，这时应该选择酸性染料，微生物容易被染色。

微生物的染色原理
微生物的染色原理在实验室中被广泛应用，以便观察和研究微生物的形态、结构和分布。

常用的染色方法包括革兰氏染色、抗酸染色和目标特异性染色等。

革兰氏染色是最常用的微生物染色方法之一。

它基于细菌细胞壁的特性，将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。

染色过程中，先通过紫色染料普鲁士蓝霜处理细菌细胞，使其呈紫色。

随后用碘酒金溶液进行固定，不易被冲洗掉。

然后使用乙醇洗去多余染料，并通过红色染料孔雀石绿进行反染，使革兰氏阴性细菌呈绿色。

抗酸染色用于分辨酸杆菌，如结核分枝杆菌和变形杆菌等。

这种染色方法基于酸性染料的特点，如琼红和文氏染料，能够着色酸杆菌。

染色过程包括涂片染色、定着、洗涤和固定等步骤，最终观察酸杆菌的红色或粉红色。

目标特异性染色常用于检测特定微生物或其特定组分。

例如，荧光染色可以利用荧光染料与微生物靶标结合，使其发出荧光信号；免疫染色可以利用抗体识别特定微生物蛋白质，再用染色剂标记抗体，显示出目标微生物的位置。

总之，微生物染色的原理是通过特定的染料与微生物结构或组分的相互作用，使其呈现出可视化的颜色或荧光信号。

这些染色方法对于微生物的鉴定、分类和研究具有重要的意义。

微生物染色液配制及染色法2.1 美蓝染色法2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95%乙醇30mL0.01%氢氧化钾溶液100mL 将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。

2.1.2 染色法将涂片在火焰上固定，待冷。

滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。

2.1.3 结果菌体呈蓝色。

2.2 革兰氏染色法2.2.1 结晶紫染色液结晶紫1g95%乙醇20mL1%草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。

2.2.2 革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。

2.2.3 沙黄复染液沙黄0.25g95%乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。

2.2.4 染色法2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。

2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。

2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。

2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染1min。

水洗，待干，镜检。

2.2.5 结果革兰氏阳性菌呈紫色。

革兰氏阴性菌呈红色。

注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。

2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红0.3g95%乙醇10mL5%酚水溶液90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。

2.3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸3mL95%乙醇97mL2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。

2.3.4 染色法2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。

染液如因蒸发减少时，应随时添加。

染5min，倾去染液，水洗。

2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。

常用的微生物染色方法微生物染色是微生物学研究中非常重要的方法，通过染色可以使微生物的形态和结构更加清晰，便于观察和研究。

下面将介绍几种常用的微生物染色方法。

1. 革兰氏染色法（Gram染色）：革兰氏染色法是最常用的微生物染色方法之一、该方法可以根据细胞壁结构的差异将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

革兰氏阳性菌具有较厚的细胞壁，可以保留紫色的革兰氏染料-碘-酒精复合物，呈紫色；而革兰氏阴性菌由于细胞壁较薄，无法保留染料-碘-酒精复合物，经酒精洗涤后以褪色方式显现嫩蓝色。

2. 去瓶球菌染色法（Ziehl-Neelsen染色）：该染色方法主要用于诊断结核菌感染。

结核菌具有酸酒杆菌的特征，该染色方法通过热定性进行，即将杆菌加热固定在玻璃片上。

染色液为仲子红与甲苯红的酒精醚溶液，结核菌上的脂质物质可以吸附染色液，呈现红色。

3.金黄色葡萄球菌染色法：金黄色葡萄球菌染色采用的是接种在含有豆粉和盐的琼脂糖平板上的细菌进行。

染色液为碘酸钾和碘甘液的混合物，在细菌细胞内部染出棕色团块。

4. 吉姆萨染色法（Giemsa染色）：吉姆萨染色法主要用于染色血液细胞、细菌和寄生虫等。

染色液为吉姆萨染料溶液，通过染色液和蒸馏水的混合来染色。

吉姆萨染色方法对捕获染色成分极为敏感，将蓝色碱性染料用于碱性碳水化合物和核酸材料，将红色和紫红色酸性染料用于酸性成分，如蛋白质和细胞质组分。

5. 格拉姆-韦瑞染色法（Gram-Weigert染色）：该染色法用于菌体内基质和胞外多糖的特异染色。

六元蔗糖银试剂与格拉姆染色特殊染料结合，生成黑色的沉淀物，用以观察菌体内多糖地点和部位。

6.碘染色法：碘染色用于染色藻类和真菌。

该染色法主要原理是将菌丝或细胞的内部特异性细胞器染为紫黑色，以便更容易观察和研究。

7.寇歇染色法：寇歇染色法主要应用于真菌的染色，染色方法与碘染色类似，可以观察到真菌菌丝和孢子的形态和结构。

总结起来，微生物染色方法有很多种，每种方法适用于特定的微生物和研究目的。

细菌染色和涂片观察的方法细菌的染色和涂片观察是微生物学中非常重要的实验方法，可以帮助我们识别和研究细菌的形态、结构和特征。

下面将详细介绍细菌染色和涂片观察的方法。

一、细菌染色方法：1.革兰氏染色法：革兰氏染色法是细菌染色中最常用的方法之一、通过该方法，细菌可以被分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

步骤：(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。

(2)用火炬预热玻璃片，使玻璃片夹持菌液返燃。

(3)在火焰中反复将菌液加热，使其彻底干燥。

(4)将干燥的玻片放在青霉素醛固定液中，固定细菌片。

(5)用生理盐水将玻璃片在微生物操作台上反复冲洗，去除青霉素醛固定液。

(6)将玻璃片放在碘酒液中浸泡3-5分钟，使菌液变成深度蓝黑色。

(7)洗净玻片，以去除碘酒液。

(8)将玻片放入95%乙醇中，进行除膜操作，1-2秒钟后取出。

(9)玻片反复在试管中加乙醇，直至洗涤液基本为无色，然后将玻片放入流动水中漂洗。

(10)用草绿素溶液染色，将玻片浸泡5分钟。

(11)用水漂洗片面，直至玻片颜色基本不变。

(12)用纤维纸轻轻拍去多余的水分，放在显微镜载物玻片上中间，覆盖一层玻璃标本纸，压平，尽量避免产生气泡。

(13)利用显微镜观察染色结果，革兰氏阳性菌为紫色或紫蓝色，革兰氏阴性菌为粉红色。

2.肥湖水染色法：肥湖水染色法也是常用的细菌染色法之一，可以用来观察鞭毛、纤毛等细菌结构。

步骤：(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。

(2)用火焰热熔玻璃片，使其保持与菌液接触状态，避免菌液干燥。

(3)将玻璃片放在肥湖水溶液中浸泡2-3分钟。

(4)用生理盐水将玻璃片反复冲洗，去除肥湖水溶液。

(5)用希森润湿法将玻璃片上覆盖一层希森润湿剂。

(6)利用显微镜观察染色结果，鞭毛呈现鲜绿色，纤毛呈现暗蓝色。

二、涂片观察方法：1.涂片制备：涂片制备是观察细菌形态和结构最常用的方法之一、涂片制备的步骤如下：(1)在无菌条件下，将细菌涂布于玻璃片上。

(2)用火焰或紫外线灭菌，使其迅速晾干。

微生物的染色一、的容易染色容易染色包括涂布、干燥、固定、染色、冲洗和镜检等环节，详细操作过程为：取洁净的载片一张，将其在火焰上微微加热，除去上面的油脂，冷却，在中心部位滴加一小滴无菌水，用接种环在火焰旁从斜面上挑取少量菌体与水混合后，涂成直径lcm左右的匀称薄层；待其自然干燥后，在微火上通过3-4次使其固定；然后在涂片处滴加草酸铵结晶紫溶液1-2滴，染色lmin后，倾去染液，用水轻轻冲洗，并用吸水纸轻轻吸去载片上的水分；最后用生物显微镜举行镜检。

二、微生物的革兰染色完成涂布、干燥、固定3个环节后，用草酸钱结晶紫染色lmin，用水冲洗；再滴加革兰冲去残水，并用碘液笼罩媒染lmin，用水冲去碘液；斜置载片于一烧杯上，滴加95％，并轻轻摇动载片，至液不展现紫色时为止，立刻用水冲净乙醇并用滤纸轻轻吸干；用番红染液复染lmin，水洗；吸干并镜检。

三、微生物的抗酸染色抗酸染色通常是鉴别分枝杆菌属的染色法。

分枝杆菌属其菌体中含有分枝菌酸，用一般染色法不被着色，需在加热条件下与石炭酸复红牢固结合形成复合物，而且用酸性乙醇处理不能使其脱色。

由不同色彩差别对照可知，经抗酸染色后，草分枝杆菌细胞内含有枝菌酸，而其余4种微生物不含枝菌酸。

四、微生物的芽孢染色细菌的芽孢壁结构比养分细胞的细胞壁结构要复杂，而且致密，透性低，着色和脱色都比养分细胞困难。

因此，普通采纳碱性染料并在微火上加热，或延伸染色时光，使菌体和芽孢都同时染上色后，再用蒸馏水冲洗，并用另一种对照鲜亮的染料使菌体着色，如此可以在显微镜下显然区别芽孢和养分体的形态。

可以观看到，苦味诺卡菌、沟戈登菌和草分枝杆菌无芽孢，而胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌有芽袍，其芽孢主要展现在末端，显微镜下，芽孢展现浅色微透亮，养分体展现深色。

五、微生物的荚膜染色荚膜是某些细菌细胞壁外存在的一层胶状黏液性物质，与染料亲和力低，普通采纳复染色的办法，使背景与菌体之间形成一透亮区，将菌体映衬出来便于观看辨别。