抗氧化活性研究方法-课件)ppt讲稿)
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《化学生物学实验课件：抗氧化活性测定》
DPPH方法的原理
2
菜或其他植物材料。
了解DPPH自由基的工作原理，其用
于测定抗氧化活性。
3
抗氧化活性测定的步骤
将样品与DPPH反应，并测定吸收度 变化，以计算抗氧化能力。
实验结果
实验结果显示，不同样品的抗氧化活性不同。某些样品表现出较高的抗氧化能力，可能对健康有益。
讨论与分析
通过对实验结果的讨论与分析，我们可以得出结论，如何根据抗氧化活性来 评估样品的营养价值和潜在功效。
2. Chen, L. et al. (2018). Evaluation of antioxidant activity of plant extracts: A comparative study. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 66(16), 4073-4080.
化学生物学实验课件：抗 氧化活性测定
本课件介绍了抗氧化活性测定的实验目的、实验步骤以及实验结果的讨论与 分析。通过这一实验，我们能够了解样品的抗氧化能力。
实验目的
通过抗氧化活性测定实验，我们的目的是评估不同样品的抗氧化能力，从而 了解其潜在的健康益处。
实验步骤
1蔬
结论
本实验验证了不同样品的抗氧化活性差异，并提供了评估样品健康益处的方法。
参考文献
1. Smith, A. et al. (2015). Antioxidant activity measurement: methodologies and limitations. Journal of Food Science, 80(4), R981-R993.
抗氧化活性实验方法
抗氧化活性实验方法（体外实验）之迟辟智美创作1、清除DPPH 自由基能力的测定称取一定量的DPPH ，用无水乙醇配制成0.04mg/mL 的DPPH 溶液.分别取2mL 分歧浓度（2，4，6，8mg/mL ）的溶液，加入2mL DPPH 溶液，混合均匀，室温放置30min 后，5000r/min 离心10min.取上清液于517nm 处测吸光值.用Vc 作为阳性对比.样品对DPPH 自由基的清除率用以下公式计算：DPPH ()1201100%A A A -=-⨯清除率 A 0—2mL 无水乙醇+ 2mL DPPH 溶液的吸光值；A 1—2mL 样品溶液+ 2mL DPPH 溶液的吸光值；A 2—2mL 样品溶液+ 2mL 无水乙醇的吸光值.2、总还原能力的测定在10mL 离心管中分别加入0.2mol/L pH 6.6的磷酸缓冲液 2.5mL 和分歧浓度（2，4，6，8mg/mL ）的溶液1mL ，加入2.5 mL 1%铁氰化钾，混合均匀后于50℃ FeCl 3，混匀后静置10min ，在700nm 处检测吸光值.Vc 作为阳性对比.3、对Fe 2+离子螯合能力的测定分别取1mL 分歧浓度（2，4，6，8mg/mL ）的溶液和3.7mL 蒸馏水，加入2mmol/L 的FeCl 2溶液0.1mL 和5mmol/L 的菲洛嗪溶液0.2mL ，25℃水浴10min ，于562nm 处测吸光值.EDTA 为阳性对比.样品对Fe 2+的螯合率计算公式如下：Fe 2+()1201100%A A A -=-⨯螯合率 A 0—1mL 蒸馏水取代反应体系中样品溶液后的吸光值；A 1—样品溶液反应后的吸光值；A 2FeCl 2溶液后的吸光值.4、超氧自由基（O 2-）清除率的测定采纳邻苯三酚自氧化法测定.取50mmol/L Tris-HCl 缓冲液（pH8.2）4.5mL ，置25℃水浴中保温20min ，分别加入1mL 样品溶液和0.4mL 25mmol/L 邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min ，加入1mL 8mmol/L HCl 终止反应，于299nm 处测定吸光度（A x ），空白对比组以相同体积蒸馏水取代样品.按下式计算O 2-清除率：O 2-00100%x A A A -=⨯清除率 A 0—空白对比液吸光度；A x —样品溶液吸光度.5、羟自由基（•OH ）清除率的测定利用H 2O 2与Fe 2+2O 2 1mL 、9mmol/L FeSO 4 1mL 、9mmol/L 水杨酸-乙醇溶液1mL ，分歧浓度的样品溶液1mL.最后加H 2O 2启动反应，37℃反应30min ，以蒸馏水为参比，在510nm 下测定各浓度的吸光度.考虑到样品自己的吸光值，以9mmol/L FeSO 4 1mL 、9mmol/L 水杨酸-乙醇溶液1mL ，分歧浓度的样品溶液1mL 和1mL 蒸馏水作为样品的本底吸收值.按下式计算•OH 清除率： •OH 001100%x x A A A ⎛⎫-=-⨯ ⎪⎝⎭清除率A 0—空白对比液的吸光度；A x —加入样品溶液后的吸光度；A x0—不加显色剂H 2O 2样品溶液本底的吸光度.。
体内活性氧的生成和抗氧化1课件
线粒体活性氧Βιβλιοθήκη 成系统单胺氧化酶• 该酶紧密结合于线粒体外膜上，是含黄素蛋白的酶，催 化的主要化合物为单胺类，在此过程中产生过氧化氢
RCH２NH２
酶－FAD
RCH＝NH
酶—FADH２
H２O２
O２
微粒体活性氧生成系统
Cyto p450的自氧化作用
NADPH-Cyto p450还原酶的酶 系统生成反应
Cyto c
Cyto a-a3 复合体Ⅳ
抗霉素A
O2 H2O
线粒体活性氧生成系统
线粒体呼吸链
• 辅酶 Q • 半醌的自氧 化作用
• 泛醌能非酶性氧化， 由泛半醌自氧化形成 超氧阴离子
NAD（P）
Q
O2‾•+H
H
†
NAD（P）†
QH•
O2
• 黄素蛋白酶的酶性生 成反应
• 黄素蛋白酶生成O2‾•的 机制与其辅酶FAD在 还原过程中产生了 FAD半醌自由基有关 ，FAD半醌自由基可 以将一个电子交给O2 生成O2‾•
MPO-H2O2-卤化物系统
吞噬细胞的脱颗粒 作用及颗粒中髓过 氧化物酶的释放促 使MPO系统的激活 ，MPO催化卤素离 子与H2O2反应生成 HOCl，羰基醛等活 性氧
ONOOH的生成
铁离子
• 铁如EDTA-Fe或ADP-Fe复合物能增加活性 氧的毒性
• 催化自氧化作用
Fe
2GSH+2O2 GSSG+2O2‾•+2H† • 催化脂氢过氧化物均裂产生ROO•和RO•
抗氧化酶
• 超氧化物歧化酶（SOD） O2‾•+O2‾•+2H† SOD H2O2+O2
SOD基因缺陷，引起 肌萎缩性侧索硬化症
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩PPT课件
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
黄酮清除O2-·自由基能力的实验结果
28
26
24
22
清除率 (%)
20
18
16
14
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
图5 提取浓度与清除率的关系曲线
由图5可知：在实验浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清 除O﹣2·自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
黄酮清除·OH自由基能力的实验结果
20
18
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清除率 (%)
14
12
10
8
6
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
图6 提取浓度与清除率的关系曲线
由图6可知：在一定的浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对 清除·OH自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
（3）测定黄酮对自由基的清除能力来研究骨碎补中 总黄酮抗氧化活性 。 并 且 骨碎补中黄酮类化合物 在浓度实的验增浓加度而范加围强内。清除O2-·、·OH效果都随黄酮
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
欢迎各位老师提问和指导
THA谢NK谢Y！OU!
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
2.实验部分
黄酮的提取工艺
采用乙醇热回流法提取。 工艺流程：
骨碎补粉碎→过筛（40目）→石油醚脱酯→ 乙醇热回流提取→过滤→滤液浓缩→总黄酮提取 液
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
黄酮清除O2-·自由基能力的实验结果
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清除率 (%)
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图5 提取浓度与清除率的关系曲线
由图5可知：在实验浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清 除O﹣2·自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
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黄酮清除·OH自由基能力的实验结果
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清除率 (%)
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图6 提取浓度与清除率的关系曲线
由图6可知：在一定的浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对 清除·OH自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
（3）测定黄酮对自由基的清除能力来研究骨碎补中 总黄酮抗氧化活性 。 并 且 骨碎补中黄酮类化合物 在浓度实的验增浓加度而范加围强内。清除O2-·、·OH效果都随黄酮
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
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骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
2.实验部分
黄酮的提取工艺
采用乙醇热回流法提取。 工艺流程：
骨碎补粉碎→过筛（40目）→石油醚脱酯→ 乙醇热回流提取→过滤→滤液浓缩→总黄酮提取 液
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
抗氧化及抗氧化剂课件.
• 羟基自由基可参加的化学反应： 1、抽氢反应：羟基自由基可以参与磷脂抽氢 并引起一系列反应，导致细胞膜损伤；从脱 氧核糖上抽氢，引起细胞突变。 2、加成反应：羟基自由基可和芳香环反应， 还可以和DNA及RNA上嘌呤和嘧啶的碱基 反应，生成嘌呤和嘧啶的自由基，引起细胞 的突变和死亡。 3、电子转移反应： Cl- + ·OH Cl + OH ·
• 超氧阴离子自由基既可以接受一个电子氧 化其他物质而被还原，也可以提供一个电 子还原其他物质而被氧化，这就构成了超 氧阴离子自由基的主要化学性质。
• 超氧阴离子自由基可参与的化学反应： 氧化反应、还原反应、歧化反应、 电子转移：O2-· + Cl Cl · + O2 Harber-Weiss反应： Fe H 2 O 2+ O 2O + OH + OH · 2 ·
• 过氧化氢在体内的重要来源是超氧阴离 子自由基的歧化反应： 2 O2- · + 2H+ H2O2 + O2
另外羟基自由基相互反应也可以产生过 氧化氢。
• 羟基自由基是已知的最强的氧化剂，是氧气 的三电子还原产物。 O2 + 3e + 3H+ H2O + · OH 羟基自由基的反应性极强，寿命也极短。它 几乎可以和所有细胞成分发生反应，对机体 危害极大。
• 类胡萝卜素类抗氧化剂 类胡萝卜素是指与胡萝卜素和叶黄素具 有相类似结构的一大类天然色素，在自然界 中广泛存在。 目前，已知胡萝卜素的成员大约有600多 种，大多数具有强的抗氧化功能。
• 类胡萝卜素是一类由8个类异戊二烯单位组 成且含有多个双键的碳氢化合物及它们的氧 化衍生物。
C40H56
• 根据类胡萝卜素的化学结构，可以将其分为 胡萝卜素和叶黄素。
讲座 抗氧化研究方法
10 October 2014
27
第二节 化学与抗氧化研究
2.1 自由基的发生与检测 2.2 氧化损伤的检测
10 October 2014
28
2.2 自由基发生与检测实验模型
2.2.1 自由基发生体系 2.2.2 自由基的检测 2.23自由基的清除试验
10 October 2014
29
2.2 自由基发生与检测实验模型
自由基与肺气肿
自由基与缺血后再灌注损伤
自由基与眼病
自由基与炎症
自由基与贫血
10 October 2014
25
氧自由基对人类的影响
自由基与疾病 自由基与免疫
自由基与衰老
自由基与营养
10 October 2014
26
研究发现机体中的一些过渡金属能加剧自由基 反应的进行，从而表现出一定的毒性。 Fe2+、Cu+参与Fenton反应； Pb2+、Co2+、Hg2+、Ni2+、Mo3+、Cd2+可增加细 胞的脂质过氧化，并进一步损伤组织。 另外，其它金属对环境的污染及和自由基的 关系也有一些报导。
H2O2+Fe2+
· OH-+OH-+Fe3+
10 October 2014
16
1.2
1.2.1 1.2.2
氧化损伤
自由基与氧化损伤 机体自由 基的形成
10 October 2014
17
1.2.1 自由基与氧化损伤
实际上所有的内源化合物都是毒物潜
在的靶标，然而毒理学上相关的靶标 是大分子，如核酸（特别是DNA）和 蛋白质。在小分子中，膜脂质最为常 见。
维生素C的抗氧化机制及其营养作用的研究进展ppt课件
9
2．3牙龈萎缩、出血
• 健康的牙床紧紧包住每一颗牙齿。牙龈 是软组织，当缺乏蛋白质、钙、VC时易 产生牙龈萎缩、出血。
2．4预防动脉硬化
• 可促进胆固醇的排泄，防止胆固醇在动 脉内壁沉积，甚至可以使沉积的粥样斑 块溶解。
10
2.5抗氧化剂
• 可以保护其它抗氧化剂，如维生素A、 维生素E、不饱和脂肪酸，防止自由基对 人体的伤害。
维生素C的抗氧化机制及 其营养作用的研究进展
1
• 在组织病理损伤中自由基引起的脂质过 氧化起着十分重要的作用，细胞损伤的 程度可由抗氧化机制来调节，因此寻求 有效的抗氧化剂就成为了预防、治疗组 织器官自由基损伤的关键问题。天然抗 氧化剂主要有水溶性抗氧化剂维生素C和 脂溶性抗氧化剂维生素E，目前对这两种 维生素的研究已比较深入，现综述如下。
8
2．2坏血病
• 血管壁的强度和VC有很大关系。微血管是所 有血管中最细小的，管壁可能只有一个细胞的 厚度，其强度、弹性是由负责连接细胞具有胶 泥作用的胶原蛋白所决定。当体内VC不足， 微血管容易破裂，血液流到邻近组织。这种情 况在皮肤表面发生，则产生淤血、紫癍；在体 内发生则引起疼痛和关节涨痛。严重情况在胃、 肠道、鼻、肾脏及骨膜下面均可有出血现象， 乃至死亡。
中。 8、坚固结缔组织。 9、促进胶原蛋白的合成，防止牙龈出血。
21
6、防病作用
22
• 一项调查表明，每天稍增加一些水果与 蔬菜的摄入，就可能起到防病作用。
• 维生素C可能对若干慢性疾病有保护作用。 然而，从前瞻性的研究结果来看，维生 素C与心血管病或癌症的关系，并非始终 如一。为了评估血浆维生素C的水平与所 有原因（心血管病、缺血性心脏病和癌 症）死亡率之间的关系，英国剑桥大学 临床医学院Khaw等，对19496名45～ 79岁成人，进行了4年的前瞻性调查。 (Lancet 2001,357∶657)
2．3牙龈萎缩、出血
• 健康的牙床紧紧包住每一颗牙齿。牙龈 是软组织，当缺乏蛋白质、钙、VC时易 产生牙龈萎缩、出血。
2．4预防动脉硬化
• 可促进胆固醇的排泄，防止胆固醇在动 脉内壁沉积，甚至可以使沉积的粥样斑 块溶解。
10
2.5抗氧化剂
• 可以保护其它抗氧化剂，如维生素A、 维生素E、不饱和脂肪酸，防止自由基对 人体的伤害。
维生素C的抗氧化机制及 其营养作用的研究进展
1
• 在组织病理损伤中自由基引起的脂质过 氧化起着十分重要的作用，细胞损伤的 程度可由抗氧化机制来调节，因此寻求 有效的抗氧化剂就成为了预防、治疗组 织器官自由基损伤的关键问题。天然抗 氧化剂主要有水溶性抗氧化剂维生素C和 脂溶性抗氧化剂维生素E，目前对这两种 维生素的研究已比较深入，现综述如下。
8
2．2坏血病
• 血管壁的强度和VC有很大关系。微血管是所 有血管中最细小的，管壁可能只有一个细胞的 厚度，其强度、弹性是由负责连接细胞具有胶 泥作用的胶原蛋白所决定。当体内VC不足， 微血管容易破裂，血液流到邻近组织。这种情 况在皮肤表面发生，则产生淤血、紫癍；在体 内发生则引起疼痛和关节涨痛。严重情况在胃、 肠道、鼻、肾脏及骨膜下面均可有出血现象， 乃至死亡。
中。 8、坚固结缔组织。 9、促进胶原蛋白的合成，防止牙龈出血。
21
6、防病作用
22
• 一项调查表明，每天稍增加一些水果与 蔬菜的摄入，就可能起到防病作用。
• 维生素C可能对若干慢性疾病有保护作用。 然而，从前瞻性的研究结果来看，维生 素C与心血管病或癌症的关系，并非始终 如一。为了评估血浆维生素C的水平与所 有原因（心血管病、缺血性心脏病和癌 症）死亡率之间的关系，英国剑桥大学 临床医学院Khaw等，对19496名45～ 79岁成人，进行了4年的前瞻性调查。 (Lancet 2001,357∶657)
抗氧化活性测定方法
总黄酮测定方法仪器与设备：1.恒温混匀仪BG-200 (杭州朗基科学仪器有限公司)2.移液枪(p1000, p200)3.分析天平（SHIMADZU PHILIPPINES MANUFACTURING INC. AUY 220日本岛津）4.15×150 mm 玻璃试管5.具塞玻璃试管, 10 mL6.容量瓶, 1000, 100, 10 mL7.紫外-可见分光光度计（UV-1800 日本岛津）试剂：1.硼氢化钠(成都市科隆化工试剂厂, NaBH4, FW 37.83, 粉末, 分析纯,≥97.0%) 避光干燥保存。
2.三氯化铝(天津博迪化工股份有限公司，AlCl3·6H2O, FW 165,分析纯，晶体, ≥99.0%)3.四氯苯醌(FW245.88,Aladdin Industrial Corporation 中国上海，FW245.88≥98%,分析纯)4.乙醇(EtOH) (成都市科隆化工试剂厂，FW46.07，无水乙醇, ≥99.7%,分析纯)5.四氢呋喃(THF) (广东广华科技股份有限公司，FW 72.11，≥99.0%,分析纯)6.冰乙酸(成都市科隆化工试剂厂, FW60.05, 99.8%,分析纯)7.盐酸(成都市科隆化工试剂厂,36.0%-37% w/v, 12 M,分析纯)8.槲皮素(国药集团化学试剂有限公司，FW302.24, ≥ 98%, 生化试剂BR)9.香兰素(天津博迪化工股份有限公司, FW152.15, ≥ 99.0%,分析纯)试剂配制：1.0.3, 0.5, 1.0,2.0, 4.0, 5.0, 6.0, 8.0, 10.0 mM 槲皮素溶液，溶剂为四氢呋喃：乙醇（THF:EtOH）=1:1。
配制10 mM 槲皮素标准溶液：准确称取151.12 mg槲皮素，用上述溶剂定溶至50mL容量瓶。
2.50.0 mM NaBH4乙醇溶液：称取189.2 mg NaBH4, 无水乙醇溶解，定容100mL容量瓶。
鱼肉抗氧化能力及活性成分之探讨课件.ppt
Antioxidant Properties from Enzymatic Hydrolysates of Tilapia. CHIA-NAN ANNUAL
BULLETIN, 35, 141-151.
9、Halliwell, B. a. G., J. M. C. (1984). Oxygen toxicity, oxygen radicals, transition
8
魚肉游離胺基酸、胜肽組成及抗氧化效果
87.5％
9
抑制亞麻油酸自氧化
10
還原力試驗
11
螯合金屬離子
12
分析步驟
取吳郭魚肉250克以500克蒸餾水均質2分鐘，各添 加3種商業酵素(Protease A、Protease N、 Papain)1.25克在50℃下水解0、3、6、9個小時。
↓ 在水解完後添加沸水反應10分鐘使酵素失活。
2
飲食中添加抗氧化物質，可幫助還原氧化物質， 避免疾病的發生。(Wu, 2006)
魚類具有高量之肌肽（carnosine）和甲肌肽 （anserine）等雙胜肽類物質，已知與 pH 緩衝功 能能有關。(Johnson et al, 1989)
3
旗魚
旗魚(Xiphias gladius，swordfish)屬於大洋洄游性 魚類，廣布於世界各溫、熱帶海域，台灣周邊海 域亦可發現它的蹤跡，尤其是以東部黑潮暖流經 過的海域最多。 (曾等，2008)
傳統水產加工原料是以海洋魚業之魚貨物為主， 而旗魚在國內加工上常用於冷凍加工品、罐頭、 煉製品等。(蕭，2005)
oxidation in rat skeletal muscle. LIPIDS, 29(7), 461-466.
抗氧化活性研究方法19页PPT
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢谢！Biblioteka 抗氧化活性研究方法6、纪律是自由的第一条件。——黑格 尔 7、纪律是集体的面貌，集体的声音， 集体的 动作， 集体的 表情， 集体的 信念。 ——马 卡连柯
8、我们现在必须完全保持党的纪律， 否则一 切都会 陷入污 泥中。 ——马 克思 9、学校没有纪律便如磨坊没有水。— —夸美 纽斯
10、一个人应该：活泼而守纪律，天 真而不 幼稚， 勇敢而 鲁莽， 倔强而 有原则 ，热情 而不冲 动，乐 观而不 盲目。 ——马 克思