紫外可见分光光度计原理、使用及维护

紫外可见分光光度计普析紫外可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域的研究和实验中。

本文将从紫外可见分光光度计的原理、应用以及操作步骤等方面进行介绍。

一、紫外可见分光光度计的原理紫外可见分光光度计是利用物质对紫外可见光的吸收特性进行定量分析的仪器。

根据光的波长范围，可分为紫外光区和可见光区两部分。

紫外光区的波长范围为200-400 nm，可见光区的波长范围为400-800 nm。

紫外可见分光光度计的工作原理是通过光源产生的光经过样品后，被光电二极管或光电倍增管接收，形成光谱图，再通过计算机进行数据处理和分析。

在分析过程中，样品溶液的吸收特性会使光强发生变化，根据吸光度与物质浓度之间的线性关系，可以通过测量吸光度来确定物质的浓度。

二、紫外可见分光光度计的应用紫外可见分光光度计在科研和实验中有着广泛的应用。

以下是其中几个常见的应用领域：1. 生物化学分析：紫外可见分光光度计可用于蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度测定和纯度分析，如蛋白质含量的测定、核酸的纯度检测等。

2. 药物分析：紫外可见分光光度计可用于药物的含量测定、质量控制和稳定性研究，如药物溶液的吸光度测定、药物的光解动力学研究等。

3. 环境监测：紫外可见分光光度计可用于水质、大气和土壤等环境样品的污染物分析和监测，如水中重金属离子的测定、大气中挥发性有机物的测定等。

4. 食品安全检测：紫外可见分光光度计可用于食品中添加剂、农药残留、重金属等有害物质的检测，如食品中硝酸盐含量的测定、食品中防腐剂的测定等。

三、紫外可见分光光度计的操作步骤使用紫外可见分光光度计进行实验时，需要按照以下步骤进行操作：1. 打开仪器电源，并预热一段时间，使光源和光电二极管稳定工作。

2. 根据实验需要选择合适的光源和检测器，设置光的波长范围。

3. 取一定量的样品溶液，注入样品池中，并调节样品池的位置，使光线通过样品溶液。

紫外可见分光光度计维护方法紫外可见分光光度计是一种常用的分析仪器，用于测量物质溶液中的吸收光谱。

随着使用时间的增长，分光光度计有可能发生故障或出现误差，因此对于光度计的维护至关重要。

本文将介绍紫外可见分光光度计的维护方法，以帮助用户正确使用和维护这一仪器。

紫外可见分光光度计是一种高精度的光学仪器，可以用于分析溶液中的物质。

为了保证其准确性和长时间的稳定性，需要定期进行维护和保养。

本文将从日常使用注意事项、清洁和校准等方面介绍光度计的维护方法。

二、日常使用注意事项1. 防护措施：使用光度计前，请戴上适当的防护措施，如手套和安全眼镜，以防止试剂溅到皮肤或眼睛中。

2. 光度计环境：确保使用光度计的环境干净、整洁，并远离灰尘、湿气和化学品等可能影响仪器性能的因素。

3. 样品处理：在使用光度计测量之前，样品应先进行适当的处理。

如有需要，应根据样品特性进行稀释、过滤或其他处理以确保准确的测试结果。

1. 仪器表面：光度计外壳和控制面板应定期清洁。

使用干净的软布蘸取少量酒精轻轻擦拭，并确保酒精不会溅到仪器内部。

2. 光路系统：光度计的光路系统包括光源、单色器、样品室和检测器等部分。

定期检查和清洁这些部件是维护光度计正常工作的重要步骤。

a. 光源检查：检查光源是否正常工作，如发光强度是否均匀、灯泡是否破损等。

如果发现问题，应及时更换光源或联系售后维修。

b. 单色器校准：根据使用手册的指引，定期进行单色器的校准，以确保其工作稳定和准确。

c. 样品室清洁：样品室是紫外可见分光光度计中最容易受污染的部分。

定期清洁样品室内部，可使用软布或棉签轻轻擦拭，确保没有灰尘或污渍。

d. 检测器校准：定期校准光度计的检测器，以确保测试数据的准确性。

检测器校准需要专业技术，建议联系售后进行校准操作。

1. 波长校准：紫外可见分光光度计的准确性依赖于波长校准的准确性。

定期进行波长校准是保证光度计准确测量的关键。

根据使用手册的指引使用标准溶液进行波长校准，确保光度计波长显示的准确性。

【光度计】紫外可见分光光度计的维护和保养光度计维修保养紫外可见分光光度计属于精密光学仪器，出厂前经过精细的装配和调试，如果能对仪器进行恰当的维修与保养，不仅能保证仪器的可靠性和稳定性，也可以延长仪器的使用寿命。

1、工作环境检查：1）放置要求：仪器应平稳的摆放在水平固定的桌面上。

(因为分光光度计为精密光学仪器,在运行的过程中如果桌面不稳，会影响其工作状态,且仪器处在工作状态时，灯丝处于高温状态,此时如果有剧烈的震动会导致灯丝折断。

)2）温度要求：工作环境的温度在5-35度之间。

(仪器在工作状态时内部较热需要用仪器自身的散热风扇与外界空气进行热交换散热,如果外界温度过高,会导致仪器内部温度过高,从而加速仪器电器件与灯的老化速度,从而影响仪器的使用寿命。

)3）湿度要求：工作环境的相对湿度不超过85%。

（仪器内部有很多电器元件与光学件，在湿度太高的情况下，电器件容易老化或烧坏，光学件表面的镀铝膜也容易发霉。

）4）空气状况：空气中不应有足以引起腐蚀的有害气体和过多的尘土存在。

2、样品室检查：1）在开机之前，先要检查样品室中是否有比色皿或其他物品，因为仪器在开机后要进行一系列的功能自检，如果有物品放在样品室中会导致自检出错。

2）每次使用后应检查样品室是否积存有溢出溶液，须经常擦拭样品室，以防止废液对部件或光路系统的腐蚀。

3）在测试完成后，请及时将样品从样品室中取出，否则，液体挥发会导致镜片发霉。

对易挥发和腐蚀性的液体，尤其要注意！如果样品室中有漏液，请及时擦拭干净，否则会引起样品室内的部件腐蚀和螺钉生锈。

3、仪器的表面清洁：仪器外壳表面经过喷漆工艺处理过，如果不小心将溶液漏洒在外壳上，请立即用湿毛巾擦拭干净，杜绝使用有机溶液擦拭。

如果长时间不用时，请注意及时清理仪器表面的灰尘。

4、比色皿清洗：在每次测量结束或溶液更换时，您需要对比色皿进行及时清洗，然后放在低浓度酸性溶液里浸泡，浸泡后用蒸馏水冲洗比色皿的内外壁，否则比色皿壁上的残留溶液会引起测量误差。

应用分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。

常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。

我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。

基本原理分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。

它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。

朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A= kcl式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。

c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。

组成各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。

1.光源在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。

热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。

2．单色器单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。

单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。

色散元件常用棱镜和光栅。

3.吸收池吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。

吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。

4、检测器检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。

现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。

5、信号显示系统常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。

操作步骤操作之前1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。

所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。

每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。

紫外可见分光光度计的原理与使用方法单光束分光光度计的原理是：光源发出光束通过准直系统，经过光栅
的分光作用后进入样品池，与样品发生相互作用后经过检测器，最后由显
示器显示吸光度数值。

双光束分光光度计的原理是：光源发出光束，一部分经过参比池进行
比较，另一部分经过样品池与样品相互作用，分别被检测器检测后与参比
值进行比较，最后由显示器显示吸光度数值。

使用紫外可见分光光度计的方法如下：
1.准备工作：
-检查仪器是否处于正常工作状态，确认光源、检测器和显示器的功
能正常。

-清洁样品池，确保无杂质和残留。

2.样品处理：
-准备需要测量的样品溶液，并将其转移到清洁的样品池中。

-如果样品浓度过高，可能会引起光透过度低，此时可进行适当稀释。

3.测量步骤：
-打开仪器电源，进行预热，通常需要一段时间让光源稳定。

-选择合适的波长范围和检测模式（吸光度/透过度）。

-调节仪器，使得显示器上的示数为零或基线稳定。

-将样品池放入样品室，尽量避免空气泡存在。

-记录或保存测量数据，可以进行后续数据处理和分析。

4.清洁和维护：
-测量完成后，及时清洁样品池和其他相关部件，防止污染和积累。

-关闭仪器电源，注意安全操作。

总结一下，紫外可见分光光度计是一种基于比尔－朗伯定律原理的实验仪器，主要用于测量物质溶液或气体的光吸收特性。

使用时需要进行准备工作，处理样品并进行测量，同时注意仪器的清洁和维护。

可见、紫外分光光度计的原理及主注意事项1. 可见光分光光度计是一种用于测量物质在可见光范围内的吸收和透射性质的仪器。

2. 光分光光度计通过将光线经过一个样品，测量样品对光的吸收或透射程度来分析样品的化学性质。

3. 光分光光度计的工作原理是根据比尔-朗伯定律，即物质吸收光的强度与所通过的物质的浓度成正比。

4. 光分光光度计使用一个光源（通常是钨灯），产生一个连续的光谱。

5. 光谱由一个棱镜或光栅进行分散，将不同波长的光分开。

6. 样品室中的样品使得特定波长的光被吸收，其吸收的程度与样品中特定物质的浓度成正比。

7. 光分光光度计使用一个光电传感器（通常是光敏电阻或光电二极管）来测量透射光强度或吸收光强度。

8. 光强度的测量可能需要使用对数放大器，以扩大测量范围。

9. 可见光分光光度计通常使用滤光片或干涉仪来选择特定波长的光。

10. 特定波长的光通过样品室时，将吸收度或透射度转换成电信号，并通过显示器显示。

11. 主要注意事项是确保样品室中没有灰尘或杂质，以确保准确的光强度测量。

12. 样品室需要定期清洁和校准，以确保准确的测量结果。

13. 使用前需要校准光度计，校准时使用已知浓度的标准溶液进行比较测量。

14. 校准光度计时需要调整零点（零吸光度）和100%吸光度。

15. 使用过程中应避免直接暴露于阳光下，以免对测量结果产生影响。

16. 样品应在恒温条件下进行测量，以确保测量结果的准确性。

17. 需要关闭背光灯和关闭光源等降低能耗的操作。

18. 外部环境的噪音和干扰可能会影响光度计的测量结果，需要尽量减少干扰源。

19. 需要定期检查光源的亮度，以保证光度计的正常运行。

20. 测量结果应进行数据记录和保存，便于后续分析和比较。

21. 使用过程中需要严格遵守操作规程，以确保实验的可重复性和结果的准确性。

22. 在使用前请务必阅读和理解光度计的使用说明书，以确保正确操作。

23. 在进行吸收光度测量时，应选择透明、无色的样品进行测量。

紫外可见分光光度计工作原理及故障排除方法总结紫外可见分光光度计是实验室普及率最高的一类光谱仪器。

由于灵敏度高、选择性好、准确度高、适用浓度范围广，最重要是分析成本低、操作简便、快速。

因此，长期在分析领域扮演很重要的角色。

但是经常会有用户因更换光源而烦恼，每次数据有差别，都觉得是光源惹得祸，本文主要来解析光源寿命的一些问题，并附上紫外分光度计使用故障排除方法总结。

1、紫外可见分光光度计原理结构图在紫外可见分光光度计中，常用光源分两类，热辐射光源和气体放电光源。

热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光驱，如氢灯和氘灯。

2、常用光源：氘灯、钨灯寿命元析仪器采用进口“长寿”型灯源，氘灯可达2000小时，钨灯3000小时。

一般仪器在开机初始化时氘灯和钨灯均点亮。

随即可以根据程序控制来关闭不使用的那只光源。

例如测试紫外区时则可关闭钨灯；反之关闭氘灯。

这样就延长了那只不使用的光源灯的寿命，同时还可以减少不必要的光谱或光噪声的干扰，可谓一举两得。

至于光源灯的寿命这是一个老话题了，其中的因素太多了，如：使用次数、开启关闭频率（尤其对氘灯而言）、环境温度、灯的质量、外电网电压的稳定程度、供电电路的稳定度、使用间隔等等。

3、紫外可见分光光度计常见故障的排除（一）光源部分：(1)故障：氘灯不亮；原因：氘灯寿命到期（此种原因几率最高）；检查：灯丝电压、阳极电压均有，灯丝也可能未断（可看到灯丝发红）；处置：更换氘灯；(2)故障：钨灯不亮；原因：钨灯灯丝烧断（此种原因几率最高）；检查：钨灯两端有工作电压，但灯不亮；取下钨灯用万用表电阻档检测。

处置：更换新钨灯；(3)故障：钨灯不亮；原因：没有点灯电压；检查：保险丝被熔断；处置：更换保险丝（如更换后再次烧断则要检查供电电路）；(4)故障：氘灯不亮；原因：氘灯起辉电路故障；检查：氘灯在起辉的过程中，一般是灯丝先要预热数秒钟，然后灯的阳极与阴极间才可起辉放电，如果灯在起辉的开始瞬间灯内闪动一下或连续闪动，并且更换新的氘灯后依然如此，有可能是起辉电路有故障，灯电流调整用的大功率晶体管损坏的几率最大。

菁华紫外可见分光光度计说明书
摘要：
一、菁华紫外可见分光光度计概述
二、菁华紫外可见分光光度计的工作原理
三、菁华紫外可见分光光度计的使用方法
四、菁华紫外可见分光光度计的维护与保养
五、菁华紫外可见分光光度计的应用领域
正文：
一、菁华紫外可见分光光度计概述
菁华紫外可见分光光度计是一种精密的分析仪器，用于测量物质在紫外和可见光区域的吸收光谱。

该仪器广泛应用于化学、生物学、环境科学等领域，用于物质的定性鉴别、定量分析以及反应动力学研究等。

二、菁华紫外可见分光光度计的工作原理
菁华紫外可见分光光度计基于朗伯比尔定律进行测量。

当光通过吸收介质时，介质对光的吸收程度与介质中物质的浓度成正比。

菁华紫外可见分光光度计通过测量样品在紫外和可见光区域的吸光度，进而计算出样品中物质的浓度。

三、菁华紫外可见分光光度计的使用方法
使用菁华紫外可见分光光度计进行测量时，需先将样品制备成均匀的溶液，然后将溶液倒入比色皿中。

接下来，设置仪器的波长范围和测量时间，进行吸光度测量。

最后，根据测量结果和朗伯比尔定律计算出样品中物质的浓度。

四、菁华紫外可见分光光度计的维护与保养
为了保证菁华紫外可见分光光度计的测量精度和稳定性，需要定期进行维护和保养。

首先，应避免将仪器暴露在高温和潮湿的环境中。

其次，定期清洁比色皿，避免污染。

最后，定期校准仪器，确保测量精度。

五、菁华紫外可见分光光度计的应用领域
菁华紫外可见分光光度计在多个领域都有广泛应用，包括化学分析、生物学研究、环境监测等。

紫外可见分光光度计是一种广泛应用于化学、生物、药物等领域的实验仪器，它可以用来测量样品对紫外和可见光的吸收情况，从而得到样品的吸光度和浓度等重要参数。

在科研实验室和生产现场中，紫外可见分光光度计的操作和使用技巧非常重要，正确的操作可以确保实验结果的准确性和可靠性。

下面将介绍紫外可见分光光度计的操作和使用方法：一、准备工作1.1 样品的制备：首先要准备好需要测量的样品，确保样品的制备符合实验要求，并且样品溶液的浓度和透明度在光度计测量范围内。

1.2 仪器的准备：打开紫外可见分光光度计的电源，将仪器预热至稳定的工作温度，同时检查仪器的灯泡和光栅等部件是否正常。

二、测量操作2.1 校准仪器：在进行测量之前，必须对仪器进行校准，保证测量结果的准确性。

2.2 装样品：将样品溶液分别加入光度计的比色皿或石英比色皿中，注意不要留下气泡或杂质。

2.3 设定参数：根据样品的特性和测量要求，设定光度计的波长、光程和测量范围等参数。

2.4 测量数据：开始测量之后，观察样品的吸光度变化曲线，并记录下稳定的吸光度数值。

三、数据处理3.1 计算浓度：根据测得的吸光度数值，使用比色法或标样法计算出样品的浓度。

3.2 分析结果：根据测得的数据，分析样品的吸收特性和浓度变化规律，得出实验结论。

四、仪器维护4.1 清洁保养：每次使用完毕后，要及时清洁光度计的仪器和光学部件，确保仪器的稳定性和精度。

4.2 故障排除：如果在使用过程中发现仪器出现故障或异常，及时进行故障排除和维修处理。

五、注意事项5.1 防止污染：在操作过程中要注意避免样品污染或交叉污染，确保测量结果的准确性。

5.2 安全操作：使用化学药品和致癌物质时，要做好个人防护，避免对身体造成伤害。

通过以上对紫外可见分光光度计的操作和使用方法的介绍，相信大家对这一实验仪器有了更加深入的了解。

正确的操作和使用方法可以帮助科研人员和实验人员获得准确可靠的实验数据，为科学研究和生产实践提供有力支持。

【光度计】关于紫外可见分光光度计的维护介绍光度计维护和修理保养紫外—可见分光光度计是由光源、单色器、吸取池、检测器和信号处理器等部件构成。

光源的功能是供应充分强度的、稳定的连续光谱。

紫外光区通常用氢灯或氘灯.见光区通常用钨灯或卤钨灯。

单色器的功能是将光源发出的复合光分解并从中分出所需波长的单色光。

色散元件有棱镜和光栅两种。

日常维护要懂得分析仪器的日常维护和对紧要技术指标的简易测试方法，常常对仪器进行维护和测试，以保证仪器工作状态。

1.温度和湿度是影响仪器性能的紧要因素。

他们可以引起机械部件的锈蚀，使金属镜面的干净度下降，引起仪器机械部分的误差或性能下降；造成光学部件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀，产生光能不足、杂散光、噪声等，甚至仪器停止工作，从而影响仪器寿命。

维护保养时应定期加以校正。

应具备四季恒湿的仪器室，配置恒温设备，特别是地处南方地区的试验室。

2.环境中的尘埃和腐蚀性气体也会影响机械系统的快捷性、降低各种限位开关、按键、光电偶合器的牢靠性，也是造成必需学部件铝膜锈蚀的原因之一、因此必需定期清洁，保障环境和仪器室内卫生条件，防尘等。

3.仪器使用确定周期后，内部会积累确定量的尘埃，由维护和修理工程师或在工程师引导下定期开启仪器外罩对内部进行除尘工作；同时将各发热元件的散热器重新紧固，对光学盒的密封窗口进行清洁，必要时对光路进行校准，对机械部分进行清洁和必要的润滑，恢复原状，再进行一些必要的检测、调校与记录。

原子荧光光度计的检定和校准中的常见问题原子荧光光谱分析方法已广泛应用于卫生检验、农业、冶金、地质、环保、医学等多个领域，因而开展原子荧光光度计的检定、校准工作是计量测试行业适应分析技术进展的必定要求。

依照JJG939—1998《非色散原子荧光光度计》国家计量检定规程的要求，以测定砷、锑元素的性能作为其检定/校准指标。

使用原子荧光光度计测定砷和锑的原理是：在酸性条件下，砷中进行原子化。

以砷、锑高强空心阴极灯作激发光源，使砷、锑原子发出荧光，荧、锑和硼氢化钾（或硼氢化钠）与酸产生的新生态的氢反应，生成氢化物气体。

分光光度计的原理与使用一、目的要求：1、学会紫外-可见分光光度计的原理和使用方法2、学会测量溶液的浓度.二、实验原理：1、分光光度计原理：分光光度计是目前化验室中使用比较广泛的一种分析仪器,其测定原理是利用物质对光的选择性吸收特性,以较纯的单色光作为入射光,测定物质对光的吸收,从而确定溶液中物质的含量.其特点是灵敏度高；准确度高；测量范围广；在一定条件下,可同时测定水样中两种或两种以上的物质组分含量等.分光光度计按其波长范围可分为可见分光光度计〔工作范围360～800nm〕、紫外-可见分光光度计〔工作范围200～1000nm〕和红外分光光度计〔工作范围760～400000nm〕等.2、在日常使用与维护当中应注意以下几点：第一,在使用仪器前,必须仔细阅读其使用说明书.第二,若大幅度改变测试波长,需稍等片刻,等灯热平衡后,重新调零与满度后,再测量.第三,指针式仪器在未接通电源时,电表的指针必须位于零刻度上.若不是这种情况,需进行机械调零.第四,操作人员不应轻易触动灯泡与反光镜灯,以免影响光效率.第五,放大器灵敏度换挡后,必须重新调零.第六,比色皿使用时要注意其方向性,并应配套使用,以延长其使用寿命.新的比色皿使用前必须进行配对选择,测定其相对厚度,互相偏差不得超过2%透光度,否则影响测定结果.使用完毕后,请立即用蒸馏水冲洗干净〔测定有色溶液后,应先用相应的溶剂或〔1+3〕的硝酸进行浸泡,浸泡时间不宜过长,再用蒸馏水冲洗干净〕,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率.第七,比色皿架与比色皿在使用中的正确到位问题.首先,应保证比色皿不倾斜.因为稍许倾斜,就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致,还有可能使入射光不能全部通过样品池,导致测试准确度不符合要求.其次,应保证每次测试时,比色皿架推拉到位.若不到位,将影响到测试值的重复性或准确度.第八,干燥剂的使用问题.干燥剂失效将会导致以下问题：①数显不稳,无法调零或满度.②反射镜发霉或沾污,影响光效率,杂散光增加.因此分光光度计应放置在远离水池等湿度大的地方,并且干燥剂应定期更换或烘烤.第九,分光光度计的放置位置应符合以下条件：避免阳光直射；避免强电场；避免与较大功率的电器设备共电；避开腐蚀性气体等.3、吸光光度法测定溶液浓度原理基于物质对不同波长的光波具有选择性吸收的能力而建立起来的分析方法. 〔1〕光线：光线的波长： 200nm-400nm 紫外线,400-750nm可见光, >750nm 红外线光具有波粒二相性,波长不同,其能量不同.〔2〕物质的吸收光谱与颜色：A．物质的原子吸收光谱和原子发射光谱：原子的最外层电子可以选择性吸收特征波长的电磁波成为激发态而产生的光谱称为原子吸收光谱.激发态原子恢复到基态,则释放出特征波长的光子,形成原子发射光谱.不同的溶液其光谱不同,即不同溶液对不同波长的光其吸收能力不同,对某一特定波长的光存在吸收峰. B．可见光由赤橙黄绿青兰紫等能量不同的光线组成,当可见光穿过某一溶液时,由于特定波长的光被吸收而使溶液呈现相应的颜色.〔如CuSO4由于吸收了可见光中的黄光<600nm>而成蓝色〕不同颜色的溶液对不同波长的光其吸收能力不同. 〔3〕光吸收的基本定律〔Lambert-Beer 定律〕：一束平行单色光〔Io〕通过有色的透明溶液时,一部分的光可以透过溶液〔It〕,另一部分被溶液吸收〔Ia〕,还有一部分被器皿表面反射〔Ir〕,则：Io=It+Ia+Ir .那么,该溶液透光率为: T = It / Io .1． Lambert 定律：设有一束平行单色光,通过液层厚度为b 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:A=Ig<Io/It>=Ig<1/T>=k2bk2 为吸光系数,为常数.与入射光波长、溶液性质、浓度和温度有关；A 为吸光度〔又称光密度O.D 或消光度E〕,当入射光波长、吸光溶液的浓度和温度一定时,A 与b 成正比.2． Beer 定律：设有一束平行单色光,通过浓度为c 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:A=lg<Io/It>=Ig<1/T>=k4ck2 为常数.由Beer 定律可知：当入射光波长、吸光溶液的厚度和温度一定时,A 与c 成正比.3． Lambert-Beer 定律：综合1.2.得： A=Kbc ,即：当入射光波长、吸光溶液的性质和温度一定时,A 与b、c 成正比.〔4〕吸光光度法的基本原理：1、不同物质,由于其分子结构和原子组成不同,故对光的吸收光谱不同〔如：CuSO4〕,在测定不同颜色的物质浓度时要用最大吸收的波长的入射光,这样测量的灵敏度最高.2、同一种物质,若浓度不同,则对同一波长的入射光的吸收能力〔吸光度〕也不同,且成正比关系.3、应此,利用特定波长的单色光〔通常用最大吸收波长的入射光〕照射不同浓度的某一溶液时,所得的吸光度大小应与溶液浓度呈线性关系,故可利用该线性关系通过计算或查标准曲线来求得未知溶液的浓度.〔5〕吸光光度法特点：1．灵敏度高：mg%级、甚至ug%级.2．准确度高：误差2-5%3．操作简便、快速,仪器设备不复杂,价格低廉,故应用广泛.三、实验器材：UV2000分光光度计四、实验步骤〔一〕 UV2000 型分光光度计的使用与注意事项1、插上插头,接通电源,打开暗箱盖,预热20min.* 注意：分光光度计在接通电源而不用时,必须打开暗箱盖,以免光电管老化.2、将准备好的试剂倒入比色杯中,用吸水纸擦去比色杯外侧水珠,并依次放入比色杯架中.* 注意：手拿比色杯毛面,试剂倒入杯中满2/3 即可,不得将比色杯放在仪器上.3、调节所需波长,选择功能至"T".4、调"0"：放入挡光板,按调"0"键调节.5、调"100%"：取出挡光板,盖上暗箱盖,调"100%",让光线通过"空白管".6、重复调"0"和调"100%"数次.7、将选择键由"T"调至"A",此时读数应由"100"至"0",若不为"0",可用"0%"键调节.8、拉动拉杆,分别读取"A 标"和"A 样".9、取出比色杯,弃去溶液,洗净晾干,备用.〔二〕计算1．利用标准管计算测定物含量：A 样=K 样b 样c 样A 标=K 标b 标c 标因为入射光的波长,溶液性质和温度以与比色杯的厚度都一样,即：K 样=K 标 b 样=b 标所以：A 样/ A 标= c 样/ c 标得：c 样= c 标×A 样/ A 标2．利用标准曲线进行计算：3．偏离Lambert-Beer 定律的原因1〕由于非但色光引起的偏离.2〕由于溶液本身原因引起的偏离：①由于介质不均匀引起的偏离②由于溶液中化学反应引起的偏离浓度的测定〔三〕CuSO4比色波长=650nm按上述操作步骤测定硫酸铜溶液A 样和A 标,按下式计算样品浓度：C 样 = C 标 * A 样 / A 标五、结果与思考1、如果用标准曲线法测定硫酸铜溶液浓度,该如何设计实验？2、分光光度计的维护要注意什么？3、比较各种分光光度计的使用范围.。