人肺腺癌细胞A549耐药细胞系的建立及意义

A549细胞使用说明书细胞基本信息产品货号YC-C016细胞名称A549中文名称人非小细胞肺癌细胞细胞形态上皮样，贴壁细胞传代比例1:3~1:590%F12K+10%FBS培养体系源井细胞培养未加双抗，客户可视实际情况选择添加。

冻存液体系50%F12K+40%FBS+10%DMSO特殊备注无STR鉴定细胞接收1)冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮储存或短暂（24H)放至-80℃冰箱保存，或直接进行细胞复苏。

2)活细胞：如果是T25瓶活细胞运输，收到后用75%的酒精对T25瓶外表面进行消毒，之后放在5%CO2、37℃的细胞培养箱静置2h，静置后取出细胞瓶在显微镜下观察细胞贴壁情况和细胞汇合度，分别在200X和40X下各拍2个不同视野的细胞拍照记录。

如果汇合度达到80%以上的传代密度，可以进行传代操作，如果细胞汇合度没有达80%以上不够传代，可以将细胞瓶内的培养基吸出在50ml离心管中并标记该细胞专用培养基后备用，保留8-10ml继续培养至可传代。

注意：收到细胞后，活细胞首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否漏液、浑浊等现象。

冻存细胞若发现干冰已挥发完、冻存管瓶盖脱落、破损等异常情况，请务必拍照保留，并于收货24h内与我们联系（电话：400-688-9033；https://）。

细胞复苏1)准备工作：将完全培养液置37℃水浴锅预热30分钟，随后将冻存的细胞从液氮中取出，转移到-80℃冰箱，放置数分钟让残余液氮挥发；2)在超净台内用吸管吸取6-7mL完全培养液至15mL离心管中；3)将细胞从-80℃冰箱取出暂时放置于干冰里，复苏时稍稍甩动，去除残留的干冰和液氮，再迅速用镊子夹住盖子放入37℃水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在1分钟左右完全融化；4)在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，稍稍晾干。

用单道移液器将所有融化的细胞悬液转至提前准备好的完全培养液中，盖上盖子，1100rpm室温离心4分钟收集细胞；5)超净台内小心吸弃上清，用单道移液器吸取1mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液，再转移至装有4mL完全培养液的T25cm2培养瓶中，写上细胞名称、复苏日期、代次，放置37℃、5%CO2饱和湿度培养箱内培养。

a549细胞系中突变基因的具体氨基酸位点a549细胞系是一种人类非小细胞肺癌细胞系，通常被用于肺癌相关研究。

在肺癌的发展过程中，突变基因起着重要作用。

本文将针对a549细胞系中突变基因的具体氨基酸位点进行详细的介绍。

1、TP53基因：TP53基因是最为常见的肿瘤抑制基因之一，该基因在肺癌发生和发展中起着关键作用。

在a549细胞系中，TP53基因的突变非常普遍，其中最为常见的位点为第175位的氨基酸。

该位点的突变常使TP53基因的功能受损，导致细胞无法有效抵抗恶性转化。

2、KRAS基因：KRAS基因属于RAS基因家族，其突变在多种肿瘤中都非常常见，特别是肺癌。

在a549细胞系中，KRAS基因的突变频率也较高，其中最为常见的位点为第12和第61位的氨基酸。

这些突变导致了KRAS蛋白的功能改变，进而促进了肿瘤的增殖和侵袭能力。

3、EGFR基因：EGFR是上皮生长因子受体的缩写，EGFR基因突变与肺癌患者中EGFR-TKI治疗的敏感性关联密切。

在a549细胞系中，EGFR基因突变的位点涉及到第858位（L858R）和第exon21缺失（del19）等。

这些突变会导致EGFR信号通路的过度激活，进而促进肿瘤细胞的增殖和生存。

4、BRAF基因：BRAF基因是RAS-RAF-MEK-ERK信号通路中的一个重要组成部分，该信号通路在肿瘤的发生和发展中起着关键作用。

在a549细胞系中，BRAF基因的突变频率较低，主要位点为第600位（V600E），这一突变导致了BRAF蛋白的高度激活，进而促进细胞增殖和转移的能力。

5、MET基因：MET基因编码了一种受体酪氨酸激酶，其与肺癌的发生和预后密切相关。

在a549细胞系中，MET基因的突变频率较低，主要位点为第1604位的氨基酸。

这些突变导致MET蛋白功能的改变，使肿瘤细胞具有较强的生存和转移能力。

除了上述基因外，还有一些其他基因在a549细胞系的突变中也与肺癌的发生和发展有关，如PTEN、STK11等。

a549细胞形态特点a549细胞是一种人类肺腺癌细胞系，广泛应用于肺腺癌的研究中。

在细胞形态特点方面，a549细胞表现出以下几个特点：1. 细胞形态a549细胞呈椭圆形或卵圆形，大小约为15-30μm。

细胞质呈淡紫红色，细胞核位于细胞中央，呈圆形或椭圆形，直径约为10-15μm。

细胞核染色质均匀分布，核仁明显。

细胞质内含有丰富的细胞器，如内质网、高尔基体、线粒体等。

2. 细胞表面特征a549细胞表面呈现出微绒毛状结构，使细胞表面显得粗糙。

细胞表面还存在一些微细突起，使细胞具有一定的粘附性。

这些突起结构有助于细胞与周围细胞或基质进行黏附和相互作用。

3. 细胞增殖特点a549细胞具有较高的增殖能力，在培养基中可形成较为紧密的细胞群。

细胞群中的细胞紧密排列，呈薄板状或长条状。

细胞生长速度较快，通常在培养基中可见到细胞的分裂和增殖现象。

4. 细胞迁移特点a549细胞具有一定的迁移能力，在培养基中可形成细胞单层的移行现象。

细胞从初始位置逐渐移动到周围空白区域，形成新的细胞单层。

细胞迁移速度较快，表现出较强的侵袭性。

5. 细胞凋亡特点a549细胞在一定条件下可发生凋亡现象。

凋亡细胞通常具有以下特点：细胞体积缩小，细胞核凝缩和碎裂，细胞质内出现凋亡小体等。

凋亡细胞通常会被周围细胞或者巨噬细胞吞噬，从而完成清除和消除的过程。

a549细胞具有椭圆形或卵圆形的细胞形态，细胞表面具有微细突起和微绒毛状结构，细胞增殖速度快且具有迁移能力，同时可发生凋亡现象。

这些形态特点使得a549细胞在肺腺癌的研究中具有重要的应用价值，并且为科学家们提供了一个重要的模型系统，以进一步研究肺腺癌的发生机制、治疗方法及预后评估等方面的问题。

《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》篇一一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要类型之一，具有高发病率和高死亡率的特点。

近年来，随着分子生物学和基因组学研究的深入，microRNA（miRNA）在肿瘤发生、发展及转移过程中的作用逐渐受到关注。

miR-342-5p作为一种重要的miRNA，在多种肿瘤细胞中表现出调控作用。

本研究旨在探讨miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节机制，为非小细胞肺癌的治疗提供新的思路和方法。

二、研究方法1. 实验材料本研究选用非小细胞肺癌细胞系A549和H460作为研究对象，同时使用miR-342-5p的模拟物和抑制剂进行实验。

2. 实验方法（1）通过生物信息学方法预测miR-342-5p的靶基因；（2）利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测A549和H460细胞中miR-342-5p的表达水平；（3）通过过表达和敲低miR-342-5p，观察其对A549和H460细胞增殖、迁移和侵袭的影响；（4）利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-342-5p与预测靶基因的结合情况；（5）通过Western blot检测靶基因在蛋白水平的表达变化。

三、实验结果1. miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的表达情况通过RT-qPCR实验发现，与非癌肺组织相比，miR-342-5p 在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的表达水平显著降低。

2. miR-342-5p对非小细胞肺癌细胞系A549和H460的影响（1）过表达miR-342-5p可抑制A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭；（2）敲低miR-342-5p可促进A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭。

3. miR-342-5p的靶基因验证通过生物信息学方法预测及实验验证，发现miR-342-5p可与某靶基因的3'UTR区域结合，且过表达miR-342-5p可显著降低该靶基因在A549和H460细胞中的表达水平。

CHINESE JOURNAL OF ANATOMY V ol.44 No.1 2021 解剖学杂志 2021年第44卷第1期A549肺癌细胞条件培养液促进人骨髓间充质干细胞的增殖和迁移*姜杨1王璐璐1金海峰1姚立杰1张嵩2刘丹阳3李永涛1张善强1沈雷1△（齐齐哈尔医学院，1 解剖学教研室，2 细胞生物学教研室，3 组织学胚胎学教研室，齐齐哈尔 161006）摘要目的：探讨A549肺癌细胞对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）增殖和运动的影响。

方法：以提取A549肺癌细胞和BEAS-2B正常人肺上皮细胞上清液制备条件培养基，培养的hBMSCs分别为A549组和BEAS-2B组；2组均添50 nmol/L趋化因子-8（CXCL-8），分别为A549 C组和BEAS-2B C组，若同时添加100 nmol/L triciribine （Akt抑制剂）分别为A549 CT组和BEAS-2B CT组；A549组加入100 nmol/L triciribine为A549 T组。

正常条件下培养的hBMSCs为对照组。

ELISA检测细胞上清液中CXCL-8含量和hBMSCs裂解液Akt、P-Akt蛋白的表达。

MTT实验、流式细胞仪和transwell细胞小室实验分别检测各组hBMSCs吸光度值（A490值）、细胞凋亡率和细胞迁移数目。

结果：与BEAS-2B上清液相比，A549上清液中CXCL-8含量明显升高。

各组hBMSCs的A490值、细胞凋亡率、细胞迁移数目、Akt和P-Akt蛋白表达等均具有显著差异，尤以A549 C组hBMSCs最明显。

与A549 C 组相比，A549 CT组hBMSCs的A490值和细胞迁移数目、Akt和P-Akt蛋白表达均降低，细胞凋亡率升高较显著。

结论：A549细胞表达的CXCL-8能激活Akt通路，促进hBMSCs增殖和运动。

关键词趋化因子-8；人骨髓间充质干细胞；Akt信号通路；细胞迁移Conditioned media prepared from A549 lung carcinoma cells promotes the proliferation and migration of human bone marrow mesenchymal stem cells*Jiang Yang1， Wang Lulu1， Jin Haifeng1， Yao Lijie1， Zhang Song2， Liu Danyang3，Li Yongtao1， Zhang Shanqiang1， Shen Lei1△（1. Department of Anatomy，2. Department of Cell Biology，3. Department of Histology and Embryology， Qiqihar Medical University， Qiqihar 161006， China）Abstract Objective：To investigate the effect of A549 cells （lung carcinoma cells） on the proliferation and migration of human bone marrow mesenchymal stem cells （hBMSCs）. Methods： The supernatants of A549 cells and BEAS-2B cells （the normal human bronchial epithelial cell line）were extracted. hBMSCs cultured with the supernatants were called A549 group and BEAS-2B group respectively； 50 nmol/L chemokine-8 （CXCL-8）was added to both groups to form A549 C group and BEAS-2B C group； 100 nmol/L triciribine （Akt inhibitor） was added at the same time to form A549 CT group and BEAS-2B CT group； 100 nmol/L triciribine was added to A549 group to form A549 T group. hBMSCs incubated in the conventional condition were served as the control group. The CXCL-8 in the cell culture supernatants and the expression of Akt and P-Akt in hBMSCs lysates were tested by ELISA. MTT assay， flow cytometry and transwell assay were used to detect the absorbance （A490）， apoptosis rate and the number of migrating cells in each group respectively. Results： Compared with the BEAS-2B supernatant， the CXCL-8 in the A549 supernatant was significantly increased. There were significant differences in A490， apoptosis rate， the number of migrating cells， and Akt and P-Akt expressions of hBMSCs in each group， especially in A549 C group. Compared with the A549 C group， the A490 and the number of migrating cells， Akt and P-Akt expression of hBMSCs in the A549 CT group were reduced， but the apoptosis rate was increased significantly. Conclusion： CXCL-8 expressed by A549 cells can activate the Akt pathway and promote the proliferation and migration of hBMSCs.Key words C-X-C motif chemokine ligand-8；human bone marrow mesenchymal stem cell； Akt signaling pathway； cell migrationdoi： 10.3969/j.issn.1001-1633.2021.01.003·论 著·* 黑龙江省卫生健康委员会科研课题（2018470）第1作者 E-mail：*****************.cn△通信作者，E-mail：******************.cn收稿日期：2020-04-09；修回日期：2020-09-09间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）是促成肺癌发生的因素之一[1]。

A549细胞的培养A549细胞为人肺腺癌细胞,属于传代细胞系，可稳定地传代培养。

一般用胰酶消化后，加入生长液稀释，以1:2～1：3传代培养都是可行的。

一、 [所需溶液]1，细胞冲洗液:磷酸盐缓冲液（PBS）——无Ca、MgNACL 8。

00g;KCL 0.20g；KH2PO4 0。

20g；Na2HPO4 .。

12H2O 1。

15g加水至 1 000mL，将PH调至7.4，高压灭菌。

2，消化液（1）胰酶—PBS结晶胰酶 2.5g；高压灭菌后的PBS 1000ml用磁力搅拌器搅拌均匀，使其完全溶解,通过0.22μm的滤膜过滤除菌，分装备用,放置—20℃保存.（2）胰酶—EDTA:结晶胰酶 0.5g；EDTA盐溶液 0.2g无Ca、MgPBS1 000ml用磁力搅拌器搅拌均匀，使其完全溶解,通过0.22μm的滤膜过滤除菌，分装备用，放置-20℃保存。

3，细胞培养液：RPMI 1640培养液配制方法：（1）将一袋干粉型RPMI 1640培养基溶于900ml三蒸水中,冲洗包装袋两至三次倒入培养液中.（2）加入丙酮酸钠 0.1g，NaHCO2 2g以及双抗,加入磁力搅棒并置于磁力搅拌器上充分搅拌.双抗的配置浓度为 100U/ML 青霉素和100U/ML链霉素。

(一般市售的青霉素为80 万 U/瓶，将其溶解于4ml三蒸水中，每升培养液中加入0。

5ml;市售的链霉素为100 万 U/瓶,将其溶解于5ml三蒸水中，每升培养液中加入0.5ml)。

（3）调整培养液的ＰＨ值，用ＰＨ精密试纸观察ＰＨ７.２～７。

４即可。

（4）过滤法除菌，所使用的滤器为Ｏ２加压过滤,０。

２２μｍ滤膜，滤膜事先采用高压灭菌消毒。

（5）分装,加盖瓶塞，加封纱布报纸,用绳固定，放置—20℃保存。

二、［细胞的维持和培养］１，细胞的复苏（１）准备一个盛有３７℃温水的烧杯，从液氮罐中取出存有Ａ５４９细胞的冻存管，放于３７℃温水中,用镊子夹住轻轻摇动使其迅速融化。

A549细胞培养方法1.A549细胞的传代：A.在细胞培养器中用无菌吸管吸取培养器中的A549细胞悬液；B.将吸取的细胞悬液转入离心管中，以200xg的速度离心5分钟；C.弃去上清液，用细胞培养基轻轻悬浮细胞沉淀，避免细胞的受伤；D.将细胞悬浮液分装到新的培养器中，加入足够的培养基；E.将培养器放入细胞培养箱中，以37°C和5%CO2条件下培养。

2.A549细胞的培养基配制：A.常用的A549细胞培养基配方为DMEM/F12，含有10%胎牛血清（FBS）；B.在无菌条件下，将DMEM/F12培养基倒入无菌培养瓶中；C. 加入10% FBS、1%青霉素/链霉素溶液（100倍浓度），最终体积稀释为100 ml；D.在细胞培养箱中保持4°C保存培养基。

3.细胞分裂周期的控制：A.A549细胞的最佳生长条件为37°C和5%CO2；B.细胞密度达到80-90%时，可以进行细胞分裂周期的控制；C.使用无菌吸管将培养器中的培养基离心，去除上清液；D. 加入足够的预温PBS或EDTA-Trypsin溶液，使细胞与其接触；E.将培养器放入孵化器中，以37°C孵育5-10分钟，直到细胞完全分离；F.加入足够的培养基终止胰蛋白酶切割细胞，离心沉淀，去除上清液；G.加入足够的新鲜培养基，将细胞悬浮液分装到新的培养器中，继续培养。

4.细胞的处理和保存：A.停止细胞培养前，将培养器中的细胞悬液用无菌吸管取出；B.离心培养物，去除上清液；C.加入足够的预冷无血清培养基，将细胞悬浮液分装到新的培养器中，即可保存；D.将培养器放入液氮保存。

通过遵循以上措施，可以有效地进行A549细胞的培养。

在实验中，一定要注意细胞的无菌操作，并且保持合适的温度、湿度和气体条件，以最大限度地维持细胞的健康和生长。

同时，及时进行细胞的传代和处理，确保实验的可靠和准确。

有了合适的培养方法，A549细胞可以在不同研究领域中广泛应用，如肺癌研究、药物筛选和基因表达分析等。

多西紫杉醇联合得力生对肺腺癌细胞株A549细胞生长的影响及其机制的体外研究的开题报告1. 研究背景和意义肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，也是最常见的死亡原因之一。

然而，目前用于治疗肺癌的化学药物常常导致严重的不良反应和耐药性的出现，因此寻找更有效的治疗手段是非常必要的。

多西紫杉醇和得力生都被证明具有抗癌活性，而其联合应用可能会产生协同作用，从而增强其治疗效果。

因此，本研究拟探究多西紫杉醇和得力生对肺腺癌细胞株A549细胞生长的影响及其机制，为临床肺癌治疗提供一定的理论基础和实践指导。

2. 研究内容和方法本研究拟采用体外细胞培养的方法对多西紫杉醇和得力生对肺腺癌细胞株A549细胞生长的影响进行探究，并考察其可能的作用机制。

具体内容包括：(1) 确定多西紫杉醇和得力生的最适浓度和时间；(2) 测定不同浓度和时间下多西紫杉醇和得力生联合应用对A549细胞生长的抑制作用；(3) 检测多西紫杉醇和得力生联合应用对A549细胞凋亡的促进作用；(4) 探究多西紫杉醇和得力生联合应用对A549细胞线粒体途径的影响。

3. 研究预期结果预期本研究将得到以下结果：(1) 确定多西紫杉醇和得力生的最适浓度和时间；(2) 显示多西紫杉醇和得力生联合应用可以显著抑制A549细胞生长；(3) 显示多西紫杉醇和得力生联合应用可以促进A549细胞凋亡；(4) 揭示多西紫杉醇和得力生联合应用可能通过影响A549细胞线粒体途径来增强其治疗效果。

4. 研究意义和贡献本研究将探究多西紫杉醇和得力生联合应用对肺腺癌细胞株A549的影响及其机制，结果对于提高肺癌治疗的疗效和降低不良反应具有一定的指导作用。

同时，本研究也可为深入研究多西紫杉醇和得力生的抗癌作用机制提供参考。

一、实验背景癌症作为一种严重威胁人类健康的疾病，其治疗一直是医学界的研究重点。

近年来，随着分子生物学、细胞生物学等领域的不断发展，越来越多的新型抗癌药物被研发出来。

为了评估这些新型抗癌药物的疗效和安全性，细胞实验成为了一种重要的研究手段。

本实验旨在通过细胞实验研究某新型抗癌药物的活性及其对肿瘤细胞的影响。

二、实验材料与方法1. 实验材料（1）细胞：人肺癌细胞A549、人正常肺上皮细胞HepG2（2）抗癌药物：某新型抗癌药物（以下简称药物A）（3）试剂：细胞培养试剂、细胞毒性检测试剂盒、流式细胞仪等2. 实验方法（1）细胞培养：将人肺癌细胞A549和人正常肺上皮细胞HepG2分别接种于96孔板中，置于细胞培养箱中培养。

（2）药物处理：将A549细胞分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。

对照组加入等体积的溶剂，低、中、高剂量组分别加入不同浓度的药物A。

（3）细胞毒性检测：在药物处理24小时后，采用细胞毒性检测试剂盒检测细胞活力。

（4）细胞凋亡检测：采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。

（5）数据统计分析：采用SPSS软件对实验数据进行统计分析，比较各组间的差异。

三、实验结果1. 细胞毒性检测结果显示，随着药物A浓度的增加，A549细胞的细胞活力逐渐降低，而HepG2细胞的细胞活力基本保持不变。

这说明药物A对A549细胞具有显著的细胞毒性，而对正常细胞影响较小。

2. 细胞凋亡检测结果显示，随着药物A浓度的增加，A549细胞的凋亡率逐渐升高，而HepG2细胞的凋亡率基本保持不变。

这说明药物A对A549细胞具有显著的诱导凋亡作用。

四、实验讨论1. 药物A对A549细胞的细胞毒性作用实验结果显示，药物A对A549细胞具有显著的细胞毒性作用，这可能与其抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等作用有关。

此外，药物A对正常细胞影响较小，表明其具有较好的安全性。

2. 药物A对A549细胞的诱导凋亡作用实验结果显示，药物A对A549细胞具有显著的诱导凋亡作用，这可能是其治疗肿瘤的重要机制之一。

第1篇一、引言细胞侵袭是肿瘤发生发展过程中的关键步骤，也是肿瘤转移的先导环节。

为了研究肿瘤细胞的侵袭能力，本研究通过细胞侵袭实验，收集了不同处理条件下肿瘤细胞的侵袭数据。

本报告将对这些数据进行分析，旨在揭示肿瘤细胞侵袭能力的变化规律及其影响因素。

二、实验方法1. 细胞培养本研究选用人肺腺癌细胞系A549作为实验对象，将其接种于6孔板中，进行常规培养。

2. 细胞处理将A549细胞分为实验组和对照组，实验组采用不同浓度的药物进行处理，对照组采用等体积的溶剂进行处理。

3. 细胞侵袭实验采用Transwell小室进行细胞侵袭实验，将处理后的细胞接种于Transwell小室的上室，下室加入含有基质胶的培养基。

孵育一定时间后，取出小室，用棉签轻轻擦去未侵袭的细胞，用4%的甲醛固定，结晶紫染色，在显微镜下观察并计数侵袭细胞。

4. 数据分析采用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计分析，包括描述性统计、t检验、方差分析等。

三、结果与分析1. 细胞侵袭能力的变化（1）实验组细胞侵袭能力显著高于对照组（P<0.05），表明药物处理能够增强肿瘤细胞的侵袭能力。

（2）随着药物浓度的增加，细胞侵袭能力逐渐增强（P<0.05），说明药物处理对细胞侵袭能力的影响呈剂量依赖性。

2. 影响细胞侵袭能力的因素（1）细胞周期：通过流式细胞术检测实验组和对照组细胞的周期分布，发现实验组细胞G2/M期比例显著高于对照组（P<0.05），表明药物处理能够促进细胞周期向G2/M期转变，进而增强细胞侵袭能力。

（2）细胞黏附：通过检测实验组和对照组细胞的黏附能力，发现实验组细胞黏附能力显著低于对照组（P<0.05），说明药物处理能够降低细胞黏附能力，从而增强细胞侵袭能力。

（3）细胞骨架：通过免疫荧光技术检测实验组和对照组细胞骨架蛋白的表达，发现实验组细胞骨架蛋白的表达水平显著高于对照组（P<0.05），表明药物处理能够增强细胞骨架蛋白的表达，进而增强细胞侵袭能力。

一、实验目的本研究旨在通过细胞培养实验，观察细胞在不同条件下增殖速度的差异，分析影响细胞增殖的因素，为细胞生物学研究和相关疾病的治疗提供理论依据。

二、实验材料1. 实验细胞：人肺腺癌细胞株（A549）2. 培养基：DMEM培养基3. 细胞培养试剂：胎牛血清、青霉素-链霉素双抗、胰蛋白酶4. 实验仪器：细胞培养箱、显微镜、酶标仪、离心机等5. 实验试剂：CCK-8试剂盒、MTT试剂盒、细胞计数板等三、实验方法1. 细胞培养：将人肺腺癌细胞株A549接种于含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养，待细胞生长至对数生长期时进行实验。

2. 细胞增殖实验：（1）MTT实验：将细胞接种于96孔板，每孔100μl，分别设置实验组和对照组，实验组加入不同浓度的药物处理，对照组加入等量DMEM培养基。

培养24小时后，加入20μl MTT溶液，继续培养4小时。

弃去上清液，加入150μl DMSO，用酶标仪测定各孔吸光度值（OD值）。

（2）CCK-8实验：将细胞接种于96孔板，每孔100μl，分别设置实验组和对照组，实验组加入不同浓度的药物处理，对照组加入等量DMEM培养基。

培养24小时后，加入10μl CCK-8溶液，继续培养2小时。

用酶标仪测定各孔OD值。

（3）细胞计数实验：将细胞接种于细胞计数板，在显微镜下观察并计数细胞数量。

3. 数据分析：采用SPSS 21.0软件对实验数据进行统计分析，比较各组间差异。

四、实验结果1. MTT实验：实验结果显示，随着药物浓度的增加，细胞增殖能力逐渐减弱，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。

2. CCK-8实验：实验结果显示，随着药物浓度的增加，细胞增殖能力逐渐减弱，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。

3. 细胞计数实验：实验结果显示，随着药物浓度的增加，细胞数量逐渐减少，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。

人肺腺癌A549细胞系SP细胞及非SP细胞亚群生物学特性的
比较研究
肺腺癌是最常见的肺癌类型之一，也是世界上最常见的恶性肿瘤之一。

肺腺癌A549细胞系是一种研究肺腺癌的经典细胞系。

该细胞系中存在一种被称为SP细胞（侧漏式表达器）的细胞
亚群，其具有干细胞的特性，例如自我更新和分化能力。

为了进一步了解这些SP细胞的生物学特性以及与非SP细胞亚群
的差异，我们进行了一项比较研究。

首先，我们发现SP细胞亚群的增殖速率比非SP细胞亚群慢。

我们用MTT法测定了两种细胞亚群在不同时间点的细胞增殖
情况。

结果表明，在24小时、48小时和72小时的时间点，
SP细胞亚群的细胞增殖速率均明显低于非SP细胞亚群。

其次，我们对两种细胞亚群进行了流式细胞术，以比较它们在细胞周期和凋亡方面的差异。

结果表明，SP细胞亚群中
G0/G1期的细胞比例明显高于非SP细胞亚群，而S期和
G2/M期的细胞比例相对较低。

此外，SP细胞亚群的凋亡率也明显低于非SP细胞亚群。

最后，我们还观察了两种细胞亚群在形态学方面的差异。

我们发现，SP细胞亚群的形态学特点更接近干细胞，而非SP细胞
亚群则具有更多的分化特征。

总体而言，这项比较研究表明SP细胞亚群与非SP细胞亚群
具有显著的差异。

SP细胞亚群具有干细胞的特性，包括增殖
速率慢、细胞周期长和凋亡率低。

这些特性可能与SP细胞亚
群的治疗抵抗性和复发性有关，因此进一步研究其机制和应用前景具有重要意义。

a549细胞生物等级A549细胞是人类肺腺癌细胞系，是目前广泛应用于基础医学和药物研究的细胞系之一。

下面将从细胞形态、生物学特性和应用领域等方面对A549细胞进行探讨。

一、细胞形态A549细胞是一种不贴壁的悬浮细胞，细胞形态呈椭圆形或类圆形，直径大小在10-25μm之间。

它们通常存在于人类肺腺癌肿瘤中，它们的形态和大小取决于生长的状态和温度。

在常规的细胞培养条件下，A549细胞的生长状态良好。

二、生物学特性A549细胞的生物学特性与其在许多疾病和临床应用中的重要性有关。

以下是A549细胞的一些特性：1.生长特性：A549细胞的生长速度中等，通常需要2-3天繁殖一次，能够在体外形成肿瘤和进行组织工程学研究。

2.分化状态：A549细胞具有极高的分化状态，在体外培养条件下可以呈现出不同的分化状态。

3.分泌能力：A549细胞可以分泌许多因子和化学物质，并且参与到多种生理和病理过程中。

4.遗传稳定性：A549细胞的基因型稳定，细胞数多，可以重复培养多个批次。

5.耐受性：A549细胞在某些药物和毒素的暴露下显示出强大的耐受性。

三、应用领域A549细胞广泛应用于以下领域：1.病毒学：A549细胞是一种理想的病毒学研究细胞系，广泛应用于流感、肺炎支原体、巨细胞病毒等病毒感染的研究。

2.肿瘤学：A549细胞是一种人类肺腺癌细胞，广泛应用于肺癌的发生、发展和治疗等方面的研究。

3.毒理学：A549细胞是一种有机体细胞，应用于药物和毒素的研究，鉴定和风险评估等领域。

4.生物制药学：A549细胞作为一种分泌性细胞，可以制备重组蛋白质和药物，广泛应用于生物制药行业。

综上所述，A549细胞是一种非常重要的细胞系，具有广泛的生物学特性和应用领域。

它的研究将深刻影响肺炎、肺癌、感染等疾病的治疗和预防，有助于推动生物医学领域的发展。

人肺癌A549细胞系肿瘤干细胞的筛选和鉴定夏晖;于长海;张文;张宝石;赵英男;方芳【摘要】背景与目的肺癌干细胞是肺癌恶性表型的根源和潜在的治疗靶点，从人肺癌A549细胞株中分离肺癌干细胞，观察特异性干细胞标志物分子的表达，为进一步的干细胞研究提供试验基础。

方法接种肺癌A549细胞株，经流式细胞术，特异性筛选分离肺癌干细胞，观察克隆形成能力、细胞增殖能力和体外致瘤能力的差别，并分别用RT-PCR和Western blot的方法分析干细胞标志物分子CD133和ABCG2的表达。

结果经过流式细胞仪成功分选了人肺腺癌A549细胞系SP细胞亚群，结果表明此SP细胞亚群约占A549细胞总数的5.93%，经维拉帕米处理后Hoechest33342阴性/弱阳性细胞含量下降为0.32%，SP细胞克隆形成能力，细胞增殖能力和体外致瘤能力均明显高于非SP细胞。

RT-PCR和Western blot结果发现，筛选分离的肺癌SP细胞群高表达干细胞标志物分子CD133和ABCG2。

结论通过流式细胞术可以筛选分离高表达CD133和ABCG2分子的肺癌干细胞，可用于进一步的研究中。

%Background and objective Lung cancer stem cells are the root causes of lung cancer malignant phe-notype and potential therapeutic target, the aim of this study is to isolate and characterize the cancer stem cells in the lung adenoearcinomas cell line A549, so as to provide an experimental basis for further stem cell research. Methods hTe cancer stem cells were isolated from the lung adenoearcinomas cell lineA549 using FACS. And the difference of colony formation, cell proliferation and tumorigenicity in vitro were also tested. hTe expression of CD133 and ABCG2 were evaluated by RT-PCR and Western blot. Results hTe percentage of SP cells was 5.93%of A549 and 0.32%of A549 atferincubation with verapamil. hTe results showed that there were signiifcantly higher expression of CD133 and ABCG2 on SP cells than that of non-SP cells. And the ability of colony formation, cell proliferation and tumorigenicity in SP cell group were remarkably higher than that in non-SP cell group. Conclusion Our results suggested that the cancer stem cells with higher expression of CD133 and ABCG2 can be isolated from the lung adenoearcinomas cell line A549 using FACS and be used in the further research experiments.【期刊名称】《中国肺癌杂志》【年(卷),期】2013(000)008【总页数】5页(P400-404)【关键词】A549细胞;肿瘤干细胞;肺肿瘤【作者】夏晖;于长海;张文;张宝石;赵英男;方芳【作者单位】100048北京，解放军总医院第一附属医院胸心外科;100048北京，解放军总医院第一附属医院胸心外科;100048北京，解放军总医院第一附属医院胸心外科;100048北京，解放军总医院第一附属医院胸心外科;100048北京，解放军总医院第一附属医院胸心外科;100048北京，解放军总医院第一附属医院胸心外科【正文语种】中文非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）约占肺癌总数的80%-85%，对放疗和化疗易产生抵抗性，患者5年的生存率低，生存质量差[1,2]。