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关于人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察【摘要】目的建立一种能很好模拟人体内生物学行为的胃癌裸小鼠原位移植和转移模型。
方法采用人胃癌SGC-7901细胞株在裸鼠皮下经反复传5代形成实体瘤的完整组织块，建立人胃癌裸小鼠原位移植生长和转移模型16个。
观察所建立的模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率，常规H-E染色光镜下观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移情况。
电镜下观察肿瘤超微结构及免疫组化S-P法检测肿瘤诱导型环氧化酶-2（COX-2）。
结果胃癌裸鼠原位移植块再次原位移植的原位成瘤率达100％（16/16），淋巴结广泛转移率为87.5%（14/16），肝转移发生率为75.0％（12/16），腹腔积液形成率为12.5%（2/16）。
结论原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点，具有人胃癌的生物学活性。
【关键词】胃肿瘤肿瘤细胞原位移植疾病模型裸小鼠Abstract： Objective To develop a nude mouse model of human gastric cancer that can mimic its natural human biologic activities. Methods Human gastric cancer cell line SGC-7901 was cultured in nude mice repeatedly for 5 generations to get the subcutaneous solid tumor， which was then emulsified and orthotopicly inplanted into the anterior wall of the stomach in 16 nude mice. The tumor growth characters， tumor-take rate and metastatic rate were studied grossly， the transplanted tumor and its lymphatic and hepatic metastases， after routine H-E staining; the ultrastructures， by electron microscopy; and COX-2， by immunohistochemical method． Results The tumor-take rate was 100％（16/16）， the rates of metastasis to lymph nodes and liver were 87.5％（14/16） and 75.0％（12/16） respectively， the rate of ascites formation was 12.5%（2/16）. Conclusion The model of human stomach cancer established is qualified， exhibiting natural growth characters and biological activities.Key words: stomach neoplasms; orthotopic thansplantation; disease model; nude mouse既往胃癌动物模型的建立多采用皮下接种方式，虽然这种移植方式简单易行，肿瘤的生长情况也便于观察，且在一定程度上也近似地模拟了原有肿瘤的形态学、生物学及生物化学特性；然而接种于裸小鼠皮下组织毕竟属于异位移植，脱离了其起源组织器官的微环境，因此在实验中移植瘤的某些行为常不同于患者原发恶性肿瘤的生物学行为。
×实验研究Ø裸鼠荧光原位移植非小细胞肺癌模型转移相关microRNAs的研究王蓉1,2,束永前1,21.南京医科大学第一附属医院肿瘤科,江苏南京2100292.南京医科大学肿瘤中心,江苏南京210029Metastasis-associated microR N As in n on-small cell lu ng cancer u sin g fluorescentorth otopic implantation mouse modleW A N G Rong1,2,SH U Yong-qian1,21.D ep ar tment of Oncology,F irs t A f f iliated H os p ital w ith N anj ing Medical Univers ity,N anj ing210029,P.R.China2.Oncolog y Center,N anj ing M edical Univer sity,N anj ing210029,P.R.China=摘要>目的:筛选与非小细胞肺癌(N SCLC)转移相关的micro RN A s,为研究其在转移过程中发挥的作用提供理论基础。
方法:用荧光转染的人NSCL C细胞株H460皮下成瘤后原位移植于裸鼠左肺获取原发灶与转移灶组织标本。
通过m-i croR NA芯片检测和R T-PCR验证筛选与转移相关的差异micr oRN A s,并对其做生物信息学分析。
结果:N SCLC有转移原发灶比无转移原发灶(A组)上调的micro R-N As共17个,下调的7个;转移灶比转移原发灶(B组)上调的microR NA s共20个,下调的16个。
A组中表达上调的有miR-10b和miR-144,下调的有miR-9、miR-31和miR-34b;B组中表达下调的有miR-25、miR-92a、miR-202和miR-326,它们可能受转录因子AP-1、p53、STATs和NF-J B等调控,作用于RAR B、RASSF1和E2F-1等靶基因,发挥调控细胞增殖周期、细胞发育过程、DN A和RNA代谢及信号传导通路的作用,促进肿瘤生长和转移。
裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。
种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。
可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发， T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。
当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。
☞肿瘤细胞移植时的简要步骤首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106 左右；肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。
将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次。
右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。
2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次，然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置 2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。
人乳腺癌的裸鼠移植模型的制作讨论（一）引言概述：人乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，研究人乳腺癌的病理机制和新型治疗方法对于提高乳腺癌患者的治疗效果具有重要意义。
裸鼠移植模型作为一种重要的实验模型，在研究人乳腺癌中起着关键的作用。
本文将讨论人乳腺癌裸鼠移植模型的制作方法和相关注意事项。
正文：1. 选择裸鼠种类：- 了解裸鼠种类的特点和应用范围- 考虑使用的乳腺癌细胞系和裸鼠种类的适配性- 考虑裸鼠的耐受性和维护成本等因素2. 人乳腺癌细胞系的选取：- 选择与研究需求匹配的人乳腺癌细胞系- 考虑细胞系的来源、传代数和特殊基因改造等因素- 确保细胞系的纯净性和生长状态3. 裸鼠移植模型的建立：- 麻醉裸鼠并准备手术场所和器械- 选择合适的手术方法：正常组织移植、原位肿瘤移植等- 控制操作时间和温度，在手术中保证裸鼠的生命安全4. 裸鼠移植后的观察和评价：- 监测裸鼠移植部位的肿瘤生长情况- 测定肿瘤体积和质量等指标- 运用影像学和组织学等方法评估移植肿瘤的特征和转移能力5. 实验数据的分析与解释：- 对裸鼠移植模型进行数据统计和分析- 比较不同实验组间的差异和相关性- 结合其他实验结果和临床数据解释实验结果的意义总结：人乳腺癌裸鼠移植模型的制作是研究乳腺癌病理机制和治疗方法的重要实验手段。
通过选择合适的裸鼠种类和人乳腺癌细胞系，进行细致的手术操作和观察评价，以及对实验数据的严谨分析，可以获得可靠的实验结果，并进一步深入了解乳腺癌的发生发展机制，为治疗提供理论依据。
但在使用裸鼠移植模型进行实验时，也需遵守伦理和动物保护的原则，确保实验的科学性和可行性。
《人绒癌裸鼠原位移植瘤模型、转移瘤模型的构建及二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响》篇一一、引言人绒癌是一种常见的恶性肿瘤，其发生和转移给临床治疗带来了巨大的挑战。
为了更好地研究人绒癌的生物学特性和治疗策略，建立有效的动物模型至关重要。
裸鼠作为实验动物，因其生理构造与人类相似，成为建立人绒癌移植瘤模型的首选动物。
本文旨在探讨人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型的构建方法，并分析二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响。
二、人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型的构建1. 实验材料与方法（1）细胞株：选用人绒癌细胞株。
（2）裸鼠：选取健康的裸鼠作为实验动物。
（3）建模方法：通过将人绒癌细胞注射到裸鼠体内，构建原位移植瘤模型及转移瘤模型。
2. 模型构建过程（1）原位移植瘤模型构建：将人绒癌细胞注射到裸鼠子宫内，待肿瘤生长至一定大小后，进行相关指标的检测。
（2）转移瘤模型构建：通过静脉注射、腹腔注射等方式，将人绒癌细胞注射到裸鼠体内，待肿瘤发生转移后，观察并记录转移情况。
三、二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响1. 实验材料与方法（1）二氢杨梅素：购买高质量的二氢杨梅素。
（2）实验分组：将裸鼠随机分为实验组和对照组，实验组裸鼠给予二氢杨梅素治疗。
（3）观察指标：观察并记录两组裸鼠的转移瘤生长情况。
2. 实验结果与分析（1）实验组裸鼠给予二氢杨梅素治疗后，转移瘤生长速度明显减缓，肿瘤体积较对照组小。
（2）通过病理学检查发现，实验组裸鼠的肿瘤细胞凋亡率较高，表明二氢杨梅素具有抑制肿瘤细胞生长的作用。
（3）进一步分析发现，二氢杨梅素可能通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等途径，发挥抗肿瘤作用。
四、结论本文成功构建了人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型，为研究人绒癌的生物学特性和治疗策略提供了有效的动物模型。
此外，研究发现二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长具有明显的抑制作用，可能通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等途径发挥抗肿瘤效果。
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法先用组织学完整的新鲜人肝癌组织接种于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内，建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型），并将其与直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型作比较。
一、间接肝原位移植瘤模型的制备1. 用新鲜的肝癌外科手术切除标本（来自长海医院，患者为1名47岁男性，病理诊断：肝左叶肝细胞癌，粗梁型，Ⅱ级），在Hanks液中，去除坏死组织和非癌组织后切成1～2 mm3小块。
2. 取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤长到直径约1 cm时切取肿瘤，在Hanks液中，去除坏死组织后切成1～2 mm3小块，裸鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉后，行左上腹横切口，暴露肝脏。
3. 取上述2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠肝右叶深部实质内，全层关腹。
二、直接肝原位移植瘤模型的制备1. 同一例新鲜肝癌手术切除标本，处理方法同皮下移植，裸鼠处理同间接肝原位移植，取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头直接植入裸鼠肝右叶深部实质内。
2. 皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型的制备。
三、病理检查和相关指标检测1. 解剖和组织学检查（1）所有裸鼠接种后，分组分笼饲养，自由进食，每天观察1～2次。
（2）当裸鼠处于全身衰竭状态时处死并作大体解剖，对接种瘤和转移瘤分别进行观察、测量，记录肿瘤侵袭和转移情况，重要器官（主要为肝和肺）经10%中性甲醛固定后，常规石蜡制片，光学显微镜检查。
2. 周围血甲胎蛋白(AFP)检测处死前，均采用摘眼球采血的方法获得血液，用生化法检测AFP的分泌量。
3. 瘤细胞DNA含量分析留取部分移植瘤标本采用流式细胞术进行DNA含量分析。
注意事项目前，肝癌的复发和转移仍然是其术后长期存活的主要障碍。
为了研究肿瘤的转移机制，建立接近于人体的肿瘤动物模型显得尤为重要。
人胃癌完整组织块裸鼠原位种植高转移模型的建立实验具体步骤及方法人胃腺癌SGC27901 细胞株，裸鼠皮下注射(2x106/L 细胞悬液) ，成瘤后反复传代形成实体瘤，以第6 代瘤源为组织材料，打开腹腔，通过生物胶粘贴法用OB 医用生物胶将瘤块粘贴在裸鼠胃壁胃大弯血管分布稠密处；待荷瘤鼠出现衰竭体征濒临死亡时处死解剖检查。
一、皮下种植瘤模型的建立和传代BALB/c nu/nu 裸鼠24 只，雄性，6 周龄，体质量18～20 g，SPF 级条件下饲养。
人胃腺癌细胞株SGC-27901，2x106/L 细胞悬液裸鼠皮下注射，成瘤后反复传代形成实体瘤，本组瘤源为第6代。
二、人胃癌组织块裸鼠原位种植模型的建立1. 实验动物术前禁食12 h，氯胺酮50 mg/kg 腹腔麻醉，常规消毒，选择左侧正中旁切口进腹，暴露胃壁，在胃大弯处近胃窦旁用1 mL无菌空针头划破胃壁浆肌层，用无齿镊将破损处向内推压，使局部胃壁形成凹龛，植入1 块瘤组织块，并在瘤表面滴上1 滴OB 生物胶(由广州白云医用胶公司提供) ，使其覆盖瘤组织表面, 约40 s 凝固后将胃壁回纳入腹腔，0 号丝线缝合腹膜及皮肤，关腹。
2. 整个过程严格遵循无菌操作。
3. 所有模型动物无麻醉意外，SPF 级饲养。
4. 术后1 周内，死亡2 只。
5. 定时观察所有裸鼠全身状况、运动情况、腹部体征。
6. 当荷瘤鼠出现明显消瘦、弓背、精神萎靡等衰竭体征时，脱颈椎处死解剖，取原位瘤体、肿大淋巴结、胸腹腔内脏器、收取腹水。
7. 所取标本以10% 甲醛固定，石蜡包埋、切片，H-E 染色，作组织病理学检查。
8. 实体瘤细胞染色体鉴定。
注意事项体外实验虽然能在一定程度上反映胃癌细胞的运动能力和侵袭能力，但是不能完全替代体内胃癌转移的器官环境及转移效果，因此体内移植模型成为肿瘤实验研究的主要方法。
以往多是皮下移植，但可能因皮下纤维包膜的包绕致转移较少。
近年研究表明，肿瘤细胞株原位种植裸鼠体内不能完全表达肿瘤的生物学特性，而完整组织块原位移植可显著提高转移率。
人卵巢癌裸鼠卵巢原位移植瘤模型的构建詹光熙;彭书敏;美丽古丽·莫合买提;郭晓青【摘要】To build a suitable animal ovarian cancer model in vivo,so as to study the mechanism of its progression.Lentivirus transfection technology was used to build a green fluorescent protein (GFP) marked EOC cells model:SKOV3 (human ovarian serous carcinoma cell lines) and ES-2 (human ovarian clear cell carcinoma cell lines).After isoflurane anesthesia,4-6 week old BALB / C (nu / nu) nude female,back into the abdominal cavity from the median longitudinal incision.Micro multipoint injection method was used to transplant suspension cell model in one side ovary;Night OWL vivo imaging system was used to dynamically observe the growth and metastasis of xenografts in nude mice.Nude mice were dissected at 4-6 weeks after transplantation,the ovarian and metastatic tissues were stained with HE.Both SKOV3 and ES-2 GFP positive cell model was successfully constructed with ovarian orthotopic xenograft.nude mice did not lead to surgical death,the success rate of orthotopic transplanted tumor model in nude mice was 100％.The in vivo imaging system can dynamically monitor the growth of a transplanted tumor in nude mice by detecting the fluorescence intensity and range of GFP.SKOV3 cell model was built-in ovarian canceer and metastatic tissues,HE staining pathological features consistent with human ovarian serous adenocarcinoma;ES-2 cell model was built-in ovarian cancer and metastatic tissues,HE staining pathological features consistent with humanovarian clear cell carcinoma.it can be concluded that inhalation of isoflurane anesthesia,middle of the back vertical incision into the abdominal cavity,micro multipoint injection of GFP-carrying EOC cell model,can be successfully constructed dynamic observation of ovarian orthotopic transplantation tumor in nude mice animal models.This animal model is similar to the biological characteristics of human ovarian cancer and is suitable as an in vivo model to study the development of human ovarian cancer.%为探讨人卵巢癌进展机制的相关研究,构建适宜的体内动物模型.采用慢病毒转染技术,构建稳定过表达绿色荧光报告基因(GFP)的人EOC细胞模型:SKOV3(人卵巢浆液性腺癌细胞株)和ES-2(人卵巢透明细胞癌细胞株);异氟烷吸入麻醉4-6周龄BALB/C(nu/nu)雌性裸鼠,从裸鼠背部正中纵切口进入腹腔,显微多点注射法分别将细胞模型悬液,移植于裸鼠的单侧卵巢,每组6只裸鼠;NightOWL 活体成像系统动态观察裸鼠移植瘤生长和转移情况;移植术后4-6周解剖裸鼠,取卵巢和转移瘤组织行HE染色.结果显示,携带GFP的EOC细胞模型SKOV3和ES-2,均可成功构建裸鼠卵巢原位移植瘤模型,裸鼠未发生手术原因死亡,成功率均100％;活体成像系统通过检测GFP的荧光强度和范围,能够动态监测裸鼠移植瘤生长情况;SKOV3细胞模型构建的卵巢癌和转移瘤组织,HE染色观察病理特征符合人卵巢浆液性腺癌;ES-2细胞模型构建的卵巢癌和转移瘤组织,HE染色观察病理特征符合人卵巢透明细胞癌.由此可知,异氟烷吸人麻醉、从背部正中纵切口进入腹腔、显微多点注射法移植携带GFP的EOC细胞模型,能成功构建可动态监测的裸鼠卵巢原位移植瘤动物模型;该动物模型与人卵巢癌生物学特征类似,适宜作为研究人卵巢癌演变进展的体内模型.【期刊名称】《石河子大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(035)005【总页数】6页(P574-579)【关键词】卵巢癌;裸鼠;卵巢原位移植瘤模型;显微多点注射法【作者】詹光熙;彭书敏;美丽古丽·莫合买提;郭晓青【作者单位】石河子大学医学院,新疆石河子,832003;石河子大学医学院,新疆石河子,832003;石河子大学医学院,新疆石河子,832003;同济大学附属第一妇婴保健院,上海200040【正文语种】中文【中图分类】R711.75卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤 [1]，早期往往缺乏典型临床症状，且没有灵敏的标志物和筛选手段，约超过70%的病人在被确诊时已是疾病晚期，其5年生存率不到30%，极易发生侵袭、转移等生物学特性是导致其预后差、死亡率高的主要因素之一[2]。
裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立裸鼠前列腺原位肿瘤模型是研究前列腺癌的一种重要方法，可以帮助研究前列腺癌的发生机制、治疗方法以及预后。
在这篇文档中，我们将介绍创建裸鼠前列腺原位肿瘤模型的步骤和需要注意的事项。
一、实验动物选择当前，最常用的裸鼠前列腺原位肿瘤模型是使用BALB/c裸鼠进行实验。
这种鼠标品系的免疫系统极度压制，不会产生对异位移植物的免疫反应，从而提供了可行的肿瘤原位移植模型。
二、细胞株选择在建立裸鼠前列腺原位肿瘤模型的时候，选择合适的细胞株非常重要。
选择常用的前列腺癌PC-3和LNCaP细胞，或者使用病人前列腺癌细胞系，也可以根据需要转移所选原位移植物的特定表型。
三、移植前肿瘤细胞的处理肿瘤细胞的本质是异种细胞体，从人体获取到的肿瘤组织处理一般包括酶处理过程和细胞悬液制备过程。
酶液（例如胰酶）可以消化组织基质和纤维素，使细胞更容易生长。
酶液需要在恰当的温度和pH值下进行消化，并获得最高的细胞产量。
消化完毕后，过滤产生的细胞系悬液，以获得细胞。
四、移植前的裸鼠准备在移植前，要为裸鼠准备好阴茎垫和保持体温的设备。
可以使用小激光剪切器轻轻地切割皮肤做一个小孔，将悬液注入到前列腺内。
五、细胞移植移植前，应将细胞重新悬浮在适合的细胞培养基中，调整至合适的细胞浓度。
将细胞直接注入到头孢钠和甲苯磺丁脲等抗生素加载的BALB/c裸鼠前列腺中。
六、术后护理在移植完成后，将裸鼠安置在恰当的环境中，并监测它们的舒适程度。
为了预防感染和控制感染，需要注射抗生素和止痛药，以及监测患处的融合情况。
七、标本收集和肿瘤评估从移植的裸鼠体内收集原位移植物的标本，并用组织学方法鉴定癌细胞的形态学，确定癌细胞类型。
在肿瘤评估过程中，还可以进行微管道侵袭实验、体内药物毒理学试验等进一步的研究。
总之，裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立对研究前列腺癌的发生机制、治疗方法和预后等方面有重要意义。
从以上步骤和注意事项可以看出，建立该模型的过程繁琐，需要确保实验严谨，才能有效提高研究精度和推进前列腺癌的临床治疗。
裸鼠人胃癌原位移植模型的建立
汪芳裕;孙敬芳
【期刊名称】《癌症》
【年(卷),期】1997(016)005
【摘要】目的：建立裸鼠人胃癌原位移植模型。
方法：将ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞株细胞接种至裸鼠皮下，建立皮下模型并反复传代，再以第八代移植瘤组织为材料，通过剖腹手术将其移植到裸鼠胃壁，待动物自然死亡后尸检。
结果：该模型原位瘤沿胃壁呈浸润性生长，潜伏期为３￣４周，以后迅速增长并与腹膜粘连，约１２周以后逐渐消瘦，生存期为１６￣２４周，原位成瘤率及局部浸润率均为１００％，部分运动（２／６）出现肝脏转移。
结论：裸鼠
【总页数】4页(P343-344,347,F003)
【作者】汪芳裕;孙敬芳
【作者单位】南京军区南京总医院消化科;南京产军区实验动物研究中心
【正文语种】中文
【中图分类】R735.2
【相关文献】
1."纤维蛋白原-凝血酶"法建立人胃癌组织块裸鼠胃癌原位移植模型 [J], 黄玲;朱伟;许晓蒙;钱晖;许文荣
2.人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及三种方法比较 [J], 林奇;周士福
3.人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及两种方法比较 [J], 刘平;赵志泉;张小勇;潘世扬;杨国平;丁小健
4.人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察 [J], 林奇;周士福
5.人胃癌裸鼠胃原位移植转移模型的建立 [J], 白飞虎;郭新宁;杨力;翟惠虹;吴开春;樊代明
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如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定小鼠肿瘤模型的建立及鉴定是癌症研究中非常重要的一步，可以用于研究肿瘤的发生机制、治疗策略以及评估新的抗癌药物。
下面将详细介绍小鼠肿瘤模型的建立及鉴定的方法并提供一些实用的技巧。
肿瘤模型建立的方法主要包括人工移植方法、化学物质诱导方法和遗传工程方法。
一、人工移植方法：1.将人类肿瘤细胞、移植物肿瘤组织或细胞株移植到小鼠体内，可以通过裸鼠或免疫缺陷小鼠模型建立人类肿瘤模型。
当细胞或组织取出并经过相关处理后，通过给小鼠注射或将其移植到小鼠体内，研究人类肿瘤的生长和发展。
2.移植人体肿瘤片段。
3.使用免疫缺陷小鼠模型，如裸鼠、严重联合免疫缺陷小鼠等，可以接受外源组织移植而不会引发排斥反应。
二、化学物质诱导方法：1.化学物质诱导肿瘤模型是通过给予小鼠致癌物质或诱导剂来诱发肿瘤发生。
2.应遵循相关伦理原则使用易获得且时间成本低的致癌物质。
3.诱导剂可通过各种途径给予小鼠，如口服、皮下注射、腹腔注射等。
4.对于使用化学物质诱导的肿瘤模型，需要在给药期间和给药后对小鼠进行定期观察和血液检测，以评估肿瘤的发生和发展情况。
三、遗传工程方法：1.遗传工程方法可利用转基因技术将特定肿瘤相关基因引入小鼠体内，例如，通过敲除或激活肿瘤抑制基因或癌基因等，产生特定类型的肿瘤模型。
2.通过基因敲除、敲入或点突变技术，可改变小鼠体内特定基因的表达水平，以模拟人类肿瘤的发生和发展。
确定小鼠肿瘤模型建立成功后1.观察和检测小鼠是否出现明显的肿瘤体积增大和质地变硬等症状。
2.定期观察小鼠的体重变化，以评估肿瘤对小鼠健康状况的影响。
3.使用体重表、肿瘤质量表等测量工具定期测量肿瘤体积，以评估肿瘤生长速度。
4.进行组织学检测，通过活体组织活检或解剖后进行病理学检测，以确定肿瘤种类和分级。
5.对肿瘤样本进行免疫组织化学染色、分子生物学检测等，以确定肿瘤的分子特征。
总结：建立和鉴定小鼠肿瘤模型是一项复杂的工作，需要专业的知识和技术支持。
显微镜下人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立摘要】目的显微镜下建立一种能很好模拟人体内生物学行为的胃癌裸小鼠原位移植和转移模型。
方法采用人胃癌SGC-7901细胞株在裸鼠皮下反复传5代形成实体瘤，显微镜下将人胃癌裸鼠皮下移植瘤块种植于裸小鼠胃壁，建立胃癌裸小鼠原位移植和转移模型16个，观察建立的模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率，常规HE染色，观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移的病理切片，电镜下观察肿瘤超微结构。
结果胃癌裸鼠皮下移植瘤原位移植的原位成瘤率达100％（16/16），淋巴结广泛转移率为87.5%(14/16)，肝转移发生率为75％(12/16)，腹水形成率为12.5%(2/16)。
结论显微镜下建立原位移植和转移模型成功率高，且具有人胃癌自然生长过程的特点和生物学活性。
【关键词】胃肿瘤肿瘤细胞原位移植疾病模型裸小鼠【中图分类号】R73-35【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）31-0110-03The establishment of orthotopic implant and metastatic models of human stomach cancer in nude mice under the microscopeLIN Qi , CHEN Hui-yu(Department of General Surgery, The First Hospital of Lianyungang City，Lianyungang, 222002，China)【Abstract】 Objective To develop a nude mouse model of human gastric cancer which can mimic its natural human biologic activities under the microscope. Methods Human gastric cancer SGC-7901 was cultured in nude mice repeatedly for 5 generations to get the Tumor subcutaneous solid tumor, which was then emulsified and orthotopicly implanted into the nude mouse stomach under the microscope to develop 16 implant-tumors. The tumor growth characteristic, tumor-take rates and metastatic rates were analyzed grossly. The gastric orthotopically transplantation, gastric cancer lymphatic metastasis and hepatic metastasis by HE staining, the ultrostructures, by electron microscopy were analyzed too.Results The tumor-take rate was 100％, the metastases of lymph nodes and livers were 87.5％ and 75％, ascites formation is 12.5%. Conclusion To repeat the model under the microscope is easy and qualified, which can exhibiting natural growth characters and biological activities successfully.【Key words】 stomach neoplasms tumor cells orthotopicthansplantation disease model nude mouse理想的人类肿瘤动物模型的建立是研究肿瘤生长和转移生物学以及寻求抗癌新药和新方法的重要工具。
人胃腺癌裸鼠移植瘤模型的建立动物：BALB／c(nu／nu)裸小鼠，鼠龄6～1 0周，体重l5～25 g，雄性。
饲养在无特殊致病菌、空气洁净的净化工作台内，室内恒温、恒湿，定期消毒。
笼具、垫料、饲料和饮水均经高压蒸气灭菌，并在无菌条件下适时更换。
方法：收集培养的BGC-823细胞(癌细胞在含10% 小牛血清的RPMI-1640 培养液中，于CO2恒温孵育箱中培养，常规传代。
)在细胞培养至对数期时，用RPMI-1640制成约2×l07个／ml细胞悬液，取0．2ml(4x106个BGC-823细胞/只)注入裸小鼠颈部皮下或者背部皮下，每组接种3只鼠，当皮下移植瘤长至直径为l cm3左右时取出移肿瘤（大约在10d左右），及时放入含无血清培养液的平皿中，A再在超净工作台内修剪肿瘤组织，去除脂肪，结缔组织及坏死肿瘤组织，并用无血清培养液洗涤2次，将瘤组织切成约l mm×l mm×2mm的小块，加入适量的pbs备用。
以戊巴比妥经腹腔注射麻醉裸鼠，常规消毒背部肩胛区，（切开局部皮肤）用无菌套管针抽吸准备好的2mm3大小瘤块，将其接种于裸鼠背部肩胛区皮下，建立祼鼠皮下移植的人体胃癌祼鼠模型。
作鼠间传代(2只／代)。
移植瘤生长特性：胃癌细胞接种后的第三天即可见到裸鼠接种处皮下出现结节，直径约1．5 mm，质地较硬，在以后的几天中，上述皮下结节没有继续增大，此阶段为肿瘤细胞生长的潜伏期(7-10d左右)。
随后，裸鼠皮下的肿瘤结节开始缓慢生长．体积逐渐增大。
大概(25-30d)传代后荷瘤鼠皮下移植瘤的生长情况与初代移植瘤相近。
A具体操作：1一般要求需在无菌条件下进行。
可在接种罩、超净工作台或无菌室内操作。
动物处死后，用新吉尔灭(1∶1000)或碘酊、酒精消毒，对每个实体瘤应分别用灭菌的外科器械切取，对腹水瘤则应分别用灭菌的空针抽吸。
瘤块污染常是接种失败的主要原因，应予注意在高温季节操作时，应注意降温，可在盛有瘤源的器皿周围放置冰块。
裸鼠的肿瘤移植模型研究肿瘤是一种常见的疾病，也是医学研究的一个重要领域。
随着科学技术的不断发展，人们对肿瘤的认识也在不断深入。
其中，裸鼠的肿瘤移植模型研究是一种常用的实验手段。
一、裸鼠是什么裸鼠是一种没有毛发的实验小动物，通常被用来进行肿瘤移植研究。
这种小动物一般来自人工培育的遗传变异株，因为它没有毛发，所以被称为裸鼠。
这种小动物体型小、活力强，非常适合作为实验对象。
二、肿瘤移植模型的意义肿瘤移植模型是一种通过将人类肿瘤细胞移植到裸鼠体内来模拟肿瘤生长和发展的实验方法。
这种实验方法能够为生物医学研究人员提供宝贵的研究材料，用于发现和开发新的抗肿瘤药物和治疗方法。
同时，肿瘤移植模型还能够为临床医学研究提供重要的参考，帮助医生们更好地了解肿瘤生长和发展的规律，找到控制肿瘤的有效方法。
三、裸鼠肿瘤移植模型的基本步骤1. 建立肿瘤细胞株首先，需要建立一种稳定的肿瘤细胞株。
一般来说，肿瘤细胞株可以从患者的体内或者文献报道中获取，然后通过培养和筛选，筛选出能够稳定生长的肿瘤细胞株。
2. 准备裸鼠裸鼠一般都需要进行体表消毒和饲养管理等操作。
在进行实验前，需要将裸鼠的体表消毒，避免外来细菌对实验结果的影响。
此外，裸鼠的饲养、环境、温度、湿度等也需要进行精心管理，确保实验的准确性和有效性。
3. 移植肿瘤细胞将准备好的肿瘤细胞接种到裸鼠的体内，一般是通过皮下注射或者腹腔注射的方式进行。
移植后，需要观察肿瘤的生长和发展情况，并及时进行处理、剖解和测量等操作。
四、裸鼠肿瘤移植模型的优缺点优点：1. 易于建立：裸鼠的肤色和体毛特征明显，容易观察，建立肿瘤移植模型相对容易。
2. 可控性强：通过各种手段可以有效控制实验的变量，确保实验结果的可靠性和准确性。
3. 结论可靠：通过对裸鼠肿瘤移植模型的研究，可以得到比较可靠的实验结论，从而为后续的研究提供重要参考。
缺点：1. 模拟程度低：由于裸鼠与人体存在较大的生物学差异，因此在某些肿瘤特征的模拟程度上会存在一定的局限性。
人胃癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体方法及步骤以反复接种传代于裸鼠皮下的SGC-7901 人胃癌细胞株建立的移植瘤组织块为材料，将其用生物吻合OB胶原位粘贴于裸鼠胃壁，并与传统"胃囊法"、”皮下移植法“比较观察移植肿瘤的生长情况、移植成功率和自发转移的发生率。
一、实验材料准备6周龄BALB/c 无胸腺裸鼠24只，雌雄兼用，体重18-20 g。
传代于裸鼠皮下的SGC-7901人胃癌细胞株，本实验肿瘤组织为第6代。
二、人胃癌SGC-7901组织块制备1. 无菌条件下取人胃腺癌SGC-7901J标本中的组织数块，直径约0.5-1.0 cm，去除坏死组织，漂洗，滤纸吸干后置RPMI-1640液中剪成1-2 mm 的小块，制备成单细胞悬液（5×108-2.5×1011 /L）。
2. 置于18号套管针针口，碘棉消毒裸鼠右腋背部皮下，局部接种，逐日观察，待肿瘤长至1.0-1.5 cm时处死裸鼠，取出肿瘤组织按上述方法传代，传代瘤鼠与实验用鼠同为BALB/c无胸腺裸鼠，本组瘤源为第6代。
三、模型的建立1. 将24只健康裸鼠随机分为3 组，即皮下移植组、胃囊法组和OB胶粘贴组，每组8只。
2. 将传代瘤鼠拉颈处死，无菌操作，从腋部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜，切开选取生长良好、呈淡红色、鱼肉状的瘤组织，切成1 mm ×1 mm×1 mm小块，置于生理盐水中备用。
3. 皮下移植组：将切好的瘤块置于18号套管针针口，碘棉消毒裸鼠右腋背部皮下，局部接种。
4. 胃囊法组：腹腔注射50 mg/kg氯胺酮麻醉裸鼠，无菌条件下沿左侧正中旁线切开，刀口约1.5 cm，小心暴露腹膜、胃壁，在胃壁缝制粘膜小囊，将肿瘤组织块包埋于其中，缝合关腹。
5. OB胶粘贴组：腹腔注射50 mg/kg氯胺酮麻醉裸鼠，常规消毒皮肤，沿左侧正中旁线切开，刀口约1.5 cm处小心暴露腹膜、胃壁，用一次性注射针头轻微损伤胃大弯中部浆肌层，以出血为度，将肿瘤组织用医用吻合OB胶粘合在破损处，用0号线缝合腹膜腹壁，关腹。
人非小细胞肺癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体步骤及方法
将表达GFP的质粒pRNAT-U6/Neo转染人肺腺癌细胞A549，G418筛选获得稳定表达GFP细胞，对比转染前后细胞的生长活性和成瘤性。
将转染后细胞原位种植裸鼠预定标准处死。
HE染色和免疫组化检测转移灶的位置和数目。
利用KODAK IS2000MM系统检测肿瘤播散情况。
一、实验材料准备
1. BALB/c nu/nu裸鼠40只，雄性，4-6周龄，体重18-20 g，无特定病原体(SPF)级饲养。
2. 肺腺癌细胞株A549，用含10%小牛血清的RPMI 1640培养基(美国Gibcobrl公司)，5% CO237℃培养，常规传代。
3. 质粒和筛选药物质粒pRNAT-U6/Neo(美国Genscript公司)，携带Neomycin耐药基因供筛选，在CMV启动子控制下编码cGFP作为转染标记物。
G418(美国Promega公司)800 μg/ml初筛后200 ug/ml维持筛选。
二、细胞的转染
1. 哺乳动物磷酸钙转染系统(美国Promega公司)，按照操作指南将质粒pRNAT-
U6/Neoo转入A549细胞，转染后24~48 h荧光显微镜下观察转染效率。
2. 后培养液内加G418筛选获得稳定转染。
3. 利用平板克隆形成试验测定细胞克隆形成率>10%后，有限稀释法获得表达GFP阳性细胞。
4. 1月后收获转染细胞，常规传代培养，培养液中加G418(200 ug/ml)维持筛选。
5. 测定转染后A549细胞增殖动力学指标，对比转染前后A549细胞生长曲线，检测转染后细胞的生长活性是否受转染的影响。
6. 待细胞增殖达一定数量后，裸鼠皮下注射转染前后细胞，记录成瘤时间，用公式
V=1/2x长x宽计算肿瘤体积，对比转染前后两组裸鼠的瘤体大小以检测成瘤性是否有差别。
三、人肺腺癌A549裸鼠原位种植模型的建立
1. 取转染后细胞，用不含血清的RMPI 1640培养液冲洗2次并调整细胞最终浓度为
5x106/0.2 ml备用。
2. 用0.5%的戊巴比妥钠(50 mg/kg)(中国医药上海化学试剂公司)腹腔注射麻醉裸鼠，用26号针头吸取细胞悬液0.2 ml注射入裸鼠左侧胸腔，注射过程中注意控制刺入针头的深度。
3. 整个操作过程在细胞收获后半小时内完成，严格遵循无菌原则。
4. 注射后在KODAK IS2000MM下确认原位种植成功，注射部位为胸腔。
5. 注射后继续饲养，隔天观察一次并记录体重。
6. 当裸鼠出现精神萎靡、呼吸短促、弓背并明显消瘦，体重较注射Et减轻20%时，颈椎脱位术处死裸鼠。
7. 开胸观察，取出器官，用10%甲醛固定保存。
四、检查项目
1. 转染后细胞荧光显微镜成像转染后24～48 h荧光显微镜下观察，确认转染成功。
单克隆化过程中镜下观察细胞克隆生长情况。
2. 活体GFP标记成像检测应用KODAK IS2000MM进行活体荧光成像，确认注射部位为胸腔，后间断应用以活体确认瘤细胞的远处转移。
3. 解剖学与组织学检查处死的裸鼠均经
详细解剖学检查，取出器官、固定包埋后，以4 tun厚度连续切片，切片严格编号，奇数号行HE染色，光镜观察，以初步确定转移灶。
4. 免疫组织化学染色
选择肺脏、肝脏和脑作为主要研究器官，在HE染色确定转移灶位置的基础上，取相邻偶数号码的切片进行免疫组化检测，CEA鼠抗人单克隆抗体(ZM-0062)，LRP鼠抗人单克隆抗体(ZM．0335)工作液，即用型SP超敏感免疫组化染色试剂盒(sP-9000)、抗原修复液、DAB Kit显色试剂盒(zU一9032)均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
五、统计学处理
细胞的生长活性和肿瘤体积x ±s表示，数值的比较采用方差分析。
HE检测结果和活体成像检测结果的比较用x2检验。
采用SPSSl3．0软件进行统计分析。
注意事项
原位种植法模拟肺癌发生的自然环境，是建立肺癌转移模型的最佳方法。
肿瘤学研究中应用最多的皮下种植法建立的模型只是局部包块而无远处器官的转移和播散，不出现肿瘤相关症状。
胸腔内原位种植法操作简便，重现临床NSCLC转移过程；GFP转入人肺腺癌
A549细胞对生长活性和致瘤性无影响，A549/GFP用于NSCLC转移模型结果可靠；借助于荧光显像设备，利用GFP的示踪功能可以非侵人性检测NSCLC转移。
