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兽药残留蛋白芯片检测系统的研制和应用

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—
—
—
巾图分 类 号 ：
R38 1 6
文 献标 识 码
：
A
兽药 ( 包括各种药物 添加 剂 ) 在 家禽饲养业 和 畜 牧 业 中 的应 用 日益 广 泛
。
因此
，
丁 对 于 大 量 样 品 的 初 筛 和 日常 的 监 测 _ 作
。
，
需要
但是
，
任何兽 药 的使用 都会
，
更 简便 快 速 准 确 的 检 测 方 法
、 、
微生 物
1
蛋 白芯 片 检 测 兽 药 残 留的 原 理
法 和 酶 联 免 疫 法 (E
胶 体 金 等 ) _1 i
、
。
仪器方法存在
免疫 分 析是 以 抗 原 与抗 体 的特 异 性
反应 为基 础 的分析技 术
，
、
可逆性结合
仪器 昂贵
限性
；
、
方 法 复杂
操作繁琐
试 剂 消耗 量 大 的局
、
免疫 反 应 涉及 抗 原 与抗 体
对 我 国农 产 品 出 口 造 成 壁 垒
，
每年 给我 国
。
已 经 被 研 究 用 于 临 床血 清 学 诊 断 等 领 域
、
。
带 来 的 直接 和 间 接 经 济损 失 已 逾 百 亿 美 元
同时
，
农药
博 奥 生 物 对 蛋 白芯 片 平 台 进 行 了 深 入 研 究 开 发
了 用 于 临 床 药 物 监 测 和 兴 奋 剂 检 测 的 蛋 白芯 片
：
但 每 次 检 测 只 能 针 对 单 种 兽药
。
分析技 术难 以 达 到 的选 择 性 和 灵 敏 度
非 常适 用 于 复
2 0 0 8 0 8 14
—
—
2 《 N N f N ~ N g 》2 0 0 8 ~ 中
_
’
14
卷 第 8 期 Vo
r 14 N o 8
． ．
33
技术报告
Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｅｈ ｏｏ ｙＲｅ ｒ ｐｏｔ
、
微 生 物法存在检测灵 敏度低
；
准确性 差 和 检测
、
分 子 间 高度 互 补 的 立 体 化 学
和 疏 水 区 域 的综合作 用
，
静电
、
氢键
、
范德华 力
一
速 度 慢 的缺 点
酶联 免 疫 法 虽 然 可 以 快 速
，
高灵 敏 度
、
因而 具有 单 独任何
，
种理化
高准 确 率 的检 测 样 品
收 稿 日期
、
最
已 成 为公 认 的社 会 问题
。
国际上
对农药
、
后 用 专 门的计算 机 软件进 行 图像分 析
结果定量 和解
，
兽 药 和 添 加 剂等各类 有 害物质 的检测 种类 和 检 出 限量
日益 严 格
，
释
。
由于 其 快 速
、
平 行 和 高 通 量 的优 越 性
_2 _ ”
蛋 白芯 片 过去几 年
， ，
结 合 博 奥 生 物 有 限 公 司 研 发 的样 品 分 子 提 取 仪
。
。
芯 片 扫 描 仪 以 及 配 套 的 自动 化 数 据 分 析 软
、
= 开 发 了 晶 i 芷 兽 药 残 留 蛋 白芯 片 检 测 系统
、
该 系统 可 用 于 猪 肉
、
猪肝
、
、
鸡肉
、
鸡肝
、
牛 奶 中磺 胺
、
甲基 嘧 啶
杂基 质 中痕 量组 分 的分 离或 检测 。本 方 法是 利用 抗 原 、
，
，
开发 了晶芯
。
兽 药 残 留 蛋 白芯 片 检 测
。
常 规 检 测 方 法 分 为 仪 器 方 法 ( 如 高效 液 相
C
可 同 时 分 析 多 种 样 品 的多 种 兽 药 残 留
色 谱 分 析 法 (H P L
M S
) 和 气 相 色 谱 ／质 谱 联 用 分 析 法 f G C ／
、
M ) 或 液 相 色谱 ／质 谱 联 用 分 析 法 ( L C ／ S ) ) L IS A
技术 报 告
Te c h n
o
l og y R ep o r
t
陈爱亮
1
，
王 国青
，
王艳
，
张朝辉
( 北京
z
王慧
10 0 0 2 6 )
’
韩蓓
’
刘淼
’
博 奥 生 物有 限 公 司 暨 生 物 芯 片 北 京 国 家 工 程 研 究 中 心 北 京 出 入 境 检 验 检疫 局 技术 中 心
( j E京
10 2 2 0 6 )
，
济利益 的驱 使
在 养 殖 业Βιβλιοθήκη 中滥 用 药 物 ( 如 不 遵 守 休 药
，
或抗体点 阵
可 特 异 的 捕 获 样 品 中 的分 子
CCD (
，
然后 用激
，
期 ) 和 非 法 使 用 违 禁药 物 的 现 象普 遍 存 在
尤 为严 重
，
在 我 国情 况
，
光 扫描 系 统 或
电感 耦合 器 件 ) 获 取 数组 图像
磺 胺 喹嗯 啉
、
磺 胺 甲唾 唑
。
、
磺 胺 异啄 唑
磺胺 间 甲氧 嘧 啶
链 霉素
、
双 氢链 霉 素
恩诺
沙 星 以 及 氯霉 素 的 定 量 检 测
羞 壁 坷!
史章 编 号
：
堡自蕉丝 鱼曼窒全 簦堑丛鱼
1 0 0 6 6 5 8 6 (2 0 0 8 ) 0 8 0 0 3 3 0 4
— — —
—
2
内 容提 要 ： 本 研 究 根 据 抗 原 和 抗 体 特 异 性 结 合 的 免疫 学 原 理 中 的兽 药 残 留含 量 留兽 药 件
二
， 。
，
采 用 荧 光 标 记 竞争 免 疫 法
，
，
构 建 蛋 白芯 片测 定 样 品
。
同 时设 计 了
一
种 简 便 快 速 的 样 品 制 备方 法
、
能 够从 多 种 组 织 样 品 同时提 取 多种 残
之后
，
蛋 白芯 片 是 继 基 因 芯 片
。
在 动 物 体 内造 成 药 物 的 滞 留 或 蓄 积
生 态 系统
。
最终 进 人 人 体及
作 为 基 因 芯 片功 能 的补充 发 展 起 来 的
，
和基 因
值 得 注 意 的是
，
，
由 于 科 学 知 识 的缺 乏 和 经
芯 片相 似
它 在 固相 支持 物 表 面 高 密 度 排列 探 针 蛋 白
【1 ” 6
，
段 包 括 食 品 残 留 ( 药 物原 形 及 代谢 产 物 ) 的 含 量 测 定 与
卫 生 检 疫 的 作 用 日益 受 到 重 视
博 奥 生 物 以 蛋 白芯
结构鉴 定 ( 静态 残 留分析 ) 以 及 组 织 分布与 代谢 ( 动态 残 留分 析 )
。
片平 台为基 础
系统
隅
”
h
研制
”
。
兽 药 和 添 加 剂 等有 害 物 质 的 正 确 检 出也 是 保 证 我 国食
品 安 全 的迫 切 需 要 目前
，
随
。
着 食 品 安 全 问 题 的 日益 突 出 药残 留
、
，
蛋 白芯 片 用 于 食 品 农 兽
动 物 源性食 品兽 药残 留监 控 的主要 分 析手
生 物毒素
、
微 生 物 等 方 面 的检 测 分 析 以 及 在

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兽药残留免疫检测技术应用进展

兽药残留免疫检测技术应用进展


和 70、80 年代后的质谱( MS) 和高效液相色谱( HP LC) 立了 检测头 孢噻 呋的 Ci-ELISA 方 法, cef-68 和 cef-
以及 GC/ MS、LC/ MS 等联用技术的飞速发展大大地 116 的 IC50分别为 32 Lg/ kg 和 0. 33 Lg/ kg。其检测限
的苯并咪唑类药物、亚砜和砜等代谢产物时, 阿苯达唑 和芬苯达唑的检测限分别为 58 Lg/ kg 和 120 Lg/ kg。 单抗 对 苯 并 咪 唑 类 抗 蠕 虫药 有 很 高 的 选 择 性[ 18] 。
Holtzapple 等用碳二亚胺法, 戊二醛修饰载体法和巯基
蔡勤仁等: 兽药 残留免疫检测技术应用进展
托氟沙星 52. 5 21. 1 8. 7
9. 6
9. 8
123
恩诺沙星 8. 2 34. 0 141
154
248 3307
诺氟沙星
81
115
163
154
253
921
奈啶酸
32
300
704
625
698 1038
Duan 等制备了环丙沙星多克隆抗体, 并建立了检 测 环丙 沙星 残留 的 Ci-ELISA 方法, 检 测 限为 0. 32 ng/ mL, 标准曲线在 0. 32 ng/ mL～5000 ng/ mL 范围 内线性关系良好, 批内和批间变异系数分别为 5. 81% 和 11. 23% 。环丙沙星在猪肉, 鸡肉及牛乳中的回收率 分别为 75. 58% 、81. 2% 和 84. 50% 。抗血清与恩诺沙 星的交叉反应率为 69. 8% , 与金霉素、庆大霉素、青霉 素、新霉素、喹乙醇和磺胺等无交叉反应[ 5] 。蔡勤仁等
兽药残留检测技术应用现状及发展方向

兽药残留检测技术应用现状及发展方向

2021年第11期现阶段兽药残留检测技术已经成为控制药物残留的主要手段及途径，是畜禽产品质量安全的基础保障。

针对兽药残留的检测，常见的手段一般为快速筛查，这种初筛的方式要求容易使用、流通量较高、运行成本较低及能在短时间内获得结果。

通过兽药残留检测技术的应用，能最大程度上检测出动物产品中的残留兽药，规避和预防危害消费者身体健康甚至生命安全的一系列中毒、过敏等反应的出现。

1兽药残留检测技术的应用现状在畜禽养殖过程中较为常见的兽药包括杀菌剂、杀虫剂、镇静剂、β-受体激动剂、雌性激素、肾上腺受体激动剂、糖皮质激素及生长促进剂等。

而兽用药按照化学结构有包括大环内酯类、喹诺酮类、四环素类、氯霉素类、氨基糖苷类等不同类型。

虽然兽药能预防治疗疾病、改善畜禽产品的品质，提高畜禽产品的生长效率，但多数养殖户用药缺乏合理性、对安全用药知识的认知不够，在经济效益的驱动下滥用药物、不按规定剂量用药甚至添加违禁药物等现象时有发生，导致兽药残留在畜禽产品中，影响消费者的身体健康，出现一系列食品安全问题。

因此，实施兽药残留检测技术显得尤为重要。

2兽药残留检测技术的发展方向以前高效液相色谱检测技术是检测食品中残留兽药的主要手段，我国关于高效液相色谱-紫外检测技术的应用也呈现多元化的发展趋势，能结合不同的前处理净化方式对食品中的残留兽药进行检测。

其中二极管阵列检测器是比较常见的，由于其成本低、灵敏度较高并具有较好的选择性等特点，所以其适用范围较广，使用人数较多。

但该法主要能检测出磺胺类及喹诺酮类兽药的残留，对可见光吸收的兽药检测缺乏敏感度。

受大多数复杂基质因素的影响，极易导致假阳性结果。

高效液相色谱-荧光检测技术比紫外检测技术具有更高的灵敏度及选择性。

由于喹诺酮类具有一定的荧光反应，所以本法经常被用于检测食物中残留的喹诺酮类药物，其他兽药则需要添加相应的衍生环节，具有较为复杂的检测过程。

对大部分兽药来说，本身不具备荧光反应，如果通过荧光检测器进行检测只有增加了衍生反应后才能检测出来，操作流程过于复杂，限制了检测的应用和发展。

兽药残留检测技术现状

兽药残留检测技术现状

兽药残留检测技术现状摘要近年来，国际上发生了一系列重大的食品安全事件，使得消费者对食品安全的信任度下降，对食品来源的关注逐渐增加。

动物源性食品安全问题现已成为全球性的议题。

因此，建立准确、灵敏、可靠的兽药残留分析方法刻不容缓。

本文介绍了目前兽药残留分析的检测现状。

关键词兽药残留检测食品安全Abstract In recent years, a series of major international food safety incidents have happened, consumers trust in food safety dropped, and focus on increasing food sources. Animal-derived food safety has become a global issue. Therefore, there must be establishing accurate, sensitive and reliable way about analysis of veterinary drug residues without delay. This article describes the current status of the detection of veterinary drug residue analysis. Keywords Residues of Veterinary Drugs detect food security0前言近年来，兽药在畜牧生产中的应用增加，由此导致的动物性食品中兽药残留问题日益突出。

兽药残留分析是复杂混合物中痕量组分的分析技术，既需要精细的微量操作手段，又需要高灵敏的痕量检测技术，难度大、仪器化程度和分析成本高，分析质量控制和分析策略有特殊要求。

现对兽药残留分析中的和检测方法作简要介绍[1]。

1检测技术有许多高灵敏、通用性或专一性强的检测器供选用，如氢焰离子化检测器(FID)、氮磷检测器(NPD)等。

浅析蛋白芯片在兽药残留中的应用

浅析蛋白芯片在兽药残留中的应用

２０１８年第５期（总第３４８期）畜禽业生产指导浅析蛋白芯片在兽药残留中的应用杜永杰（佛山市顺德区北蟯镇动物防疫检疫站，广东佛山５２８３１１）摘　要：为了实时监控跟踪市场兽药使用情况，要提高常规兽药检测方法。

阐述利用蛋白芯片技术检测动物源食性食品中的磺胺二甲基嘧啶、克仑特罗等兽药残留的办法，同时对蛋白芯片技术检测兽药残留的结果做了简单的分析。

关键词：蛋白芯片；兽药残留；应用中图分类号：Ｓ８５１．３４＋７ 文献标识码：Ｂ ＤＯＩ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８－０４１４．２０１８．０５．０３７收稿日期：２０１８－０４－１１　材料与方法　材料（１）仪器与设备。

芯片扫描仪，型号：晶芯ＥｃｏＳｃａｎ－１００，厂家：北京博奥生物有限公司。

离心机，型号：ＧＬ－２０Ｇ－Ⅱ，厂家：上海安亭科学仪器厂。

气相色谱－质谱联用仪，型号：ＴＲＡＣＥＤＳＱ，厂家：菲尼根。

高效液相色谱仪，２６９５配紫外检测器型，厂家：Ｗａｔｅｒｓ公司。

（２）试剂。

ＥＬＩＳＡ检测试剂盒、克仑特罗残留检测试剂盒以及磺胺二甲基嘧啶残留检测试剂盒，这３种试剂盒均由ｒ２Ｂｉｏｐｈａｒｍ公司生产。

蛋白芯片兽药残留检测试剂盒，则由北京博奥生物芯片有限公司生产。

纯度为９９．６％的克仑特罗和纯度为９９．０％的链霉素的标准品，由中国药品生物制品检定所提供。

纯度为９９．０％的磺胺二甲基嘧啶标准品，由美国的ＳＩＧＭＡ公司生产。

纯度为１００．１％的恩诺沙星标准品，由中国兽医药品监察所提供。

（３）实验用菌。

枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株。

方法（１）试剂盒的灵敏度评价。

①芯片反应：按兽药残留蛋白芯片检测试剂盒说明书进行［１］。

②标准曲线溶液的配制：依照实验要求，将各种药物标准品按步骤配制成标准溶液。

③扫描及数据处理：芯片反应完毕，进行图像扫描和数据处理；依照校正后的荧光信号强度对各标准品溶液的药物浓度作标准曲线；求出每种待测药物的ＩＣ５０（荧光信号强度下降一半的兽药浓度）值。