平面色谱法演示文稿

✓平面色谱分离评价参数
➢分离度
✓平面色谱板效参数
➢理论塔板数 理论塔板高度
1、平面色谱定性参数及相平衡参数关系
①定性参数
比移值：溶质移动距离
与流动相移动距离之比
原点到组分斑点中心距离 Rf 原点到溶剂前沿距离
Li L0
②相平衡参数
Rf
Vm
Vm K Vs
1 1 k
k 1 Rf Rf
✓ 讨论
365nm 银激活的硫化锌、硫化镉；彩蓝
➢ 硅胶H——不含粘合剂 ➢ 硅胶G——硅胶和煅石膏混合而成 ➢ 硅胶HF254——不含粘结剂，含荧光指示剂
254 nm呈现强绿色荧光背景 ➢ 硅胶GF254——同时含粘结剂和景 ➢硅胶HF254+365——不含粘结剂，含荧光剂
光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥
二、吸附薄层色谱材料
（三）粘结剂
加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板的润湿性
1）无机粘结剂：煅石膏
➢含粘结剂固定相： 硅胶G——含13%~15%煅石膏
制备硅胶G——含30%煅石膏 氧化铝G——含9%煅石膏
➢不含粘结剂固定相：硅胶H
二、吸附薄层色谱材料
（三）粘结剂
2）有机粘结剂：
➢疏水改性硅胶（非极性键合相）
反相色谱采用高含水溶剂，需低疏水改性硅胶
➢ 亲水改性硅胶（极性键合相）
介于极性和疏水改性吸附剂间的色谱选择性
二、吸附薄层色谱材料
（二）载板
具一定机械强度，化学惰性，耐一定温度、表面 平整、厚度均匀、价格便宜
玻板： 5cm×10cm、10cm×20cm、20cm×20cm
L1 L2
✓ 讨论
参比物i 被测物s
原点
• 参考物与被测组分在完全相同
条件下展开；可消除系统误差，
提高重现性和可靠性
L2 • 相对比移值Rs与组分、参考物
L1
性质及色谱条件有关，范围可
以大于或小于1
2、平面色谱分离评价参数
分离度：两相邻斑点中心距离与两斑点平均 宽度（直径）的比值
R 2d W1 W2
➢ 吸附薄层色谱 ➢ 分配薄层色谱 ➢ 空间排阻薄层色谱 ➢ 胶束薄层色谱
二、吸附薄层色谱材料 （一）固定相——吸附剂
➢氧化铝、硅胶 ➢纤维素、聚酰胺
1.硅胶：最常用的吸附剂，SiO2·XH2O
吸附的原因 ——氢键作用→吸附活性中心
硅胶含水量% 活性级
0 5 15 25 38 Ⅰ Ⅱ Ⅲ ⅣⅤ
氧化铝含水量% 0 3 6 10 15
活性级
ⅠⅡ ⅢⅣⅤ
3.聚酰胺
常用的是聚己内酰胺，商名为锦纶、尼龙-6、卡 普隆等。
吸附的原因——氢键 聚酰胺分子内存在着许多酰胺基，可与酚、酸、
醌等形成氢键
• 氢键能力↑强，组分越后出柱
4.改性硅胶
借化学反应方法将有机分子以共价键连接在硅醇 基上，称化学键合固定相。
羧甲基纤维素钠（CMC） 0.8%CMC溶液配匀浆涂铺的薄层板强度高， 色谱分离性能好 注意：不适合浓硫酸显色，易霉变降解
二、吸附薄层色谱材料
（四）荧光指示剂
➢作用：适当波长激发光照射下可以产生均匀的荧光
背景，清晰显示化合物的暗斑
➢短波荧光指示剂：
254nm 锰激活的硅酸锌；钠荧光素，阴极绿
➢长波荧光指示剂：
➢相临两斑点间距离越大，斑点越 集中，分离度越大，分离效率越高
➢当R＞1.5时，相临斑点可达到基 线分离
TLC分离度与比移值的关系
➢Rf =0.3 时 分离度R最大
➢Rf = 0.2~0.5时 分离度R变化不大
➢Rf ＜ 0.1或Rf＞ 0.7时 分离度R急剧下降↓ ↓
3、平面色谱板效参数
理论塔板数 n 16( L )2 W
➢ Rf与K有关，即与组分性质、平面板和展开剂的性 质有关 K↑大，Rf↓小
➢ 色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是平面色谱 基本定性参数，说明组分保留行为
➢ Rf范围：0< Rf <1 Rf = 0.2~0.8（常用）；0.3~0.5（最佳）
相对比移值Rs
Rs
R f（组） R f（参）
原点到组分斑点中心距离 原点到参考物斑点中心距离
理论塔板高度 H L0 n
L为原点距斑点中心的距离 W为组分斑点的宽度 L0为原点距溶剂前沿的距离
W 越小，n 越大，H 值越小，板效越高
三、平面色谱法操作流程图
活化
第二节、薄层色谱法 TLC
一、概述
1．定义：
将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形 成薄层而进行色谱分离和分析的方法。
2．分离机制
2. 展开剂的极性选择：
“相似相溶”原则 根据组分性质选择适当极性的流动相
石油醚 < 环己烷 < 二硫化碳 < 三氯乙烷 < 苯 < 甲苯 < 二氯甲烷 < 氯仿 < 乙醚 < 乙酸 < 乙酯 < 丙酮 <正丁醇 < 乙醇 < 甲醇 < 吡啶 < 酸
三、吸附剂和流动相的选择： 3、薄层板活度级别选择
吸附强弱：
五级; 级数高, 含水量大, 吸附力弱
1.硅胶：最常用的吸附剂，SiO2·XH2O
硅胶特性：
1）物质极性↑，吸附能力↑ →强极性吸附中心，不易洗脱
2）吸水→占用活性位点→失活 ➢ 105~110OC烘干30min(活化)，吸附力最大 ➢ 500OC烘干(不可逆失水)→无吸附力
适用：硅胶具微酸性，分析酸性或中性物质
254 nm和356 nm呈现荧光背景
三、吸附剂和流动相的选择：
选择根据 ➢ 被分离物质的极性
➢ 展开剂的极性 ➢ 吸附剂的活度
三、吸附剂和流动相的选择：
1、被分离物质的极性
烷烃 < 烯烃 < 醚 < 硝基化合物 < 二甲胺 < 酯 < 酮 < 醛 < 胺 < 酰胺 < 醇 < 酚 < 羧酸
三、吸附剂和流动相的选择：
平面色谱法演示文稿
优选平面色谱法
一、平面色谱法的特点
➢固定相一次使用，样品预处理简单，对被分离 物质没有限制 ➢分离能力强，展开时间短，一次可以同时展开 多个试样 ➢ 所用仪器简单，操作方便
——缺点：自动化程度低，分辨率和重现性较差
二、平面色谱的主要技术参数
✓平面色谱定性参数及相平衡参数
➢比移值 相对比移值
2.氧化铝
碱性（pH 9~10）: 分离碱性及中性化合物。 如生物碱等。
酸性（pH 4~5）: 用于分离酸性中性物质。如 酸性色素、氨基酸等。
中性（pH 7.5）: 用途最广，适于分析酸性碱性 和中性物质，如生物碱、挥发油、甾体等。
2.氧化铝
吸附的原因——氢键。 吸附强弱：
五级，级数高，含水量大，吸附力弱